Although many assay methods have be

Although many assay methods have been developed for determining cytotoxicity in lower density formats, precious few have been validated for use in high throughput screening that requires simple, homogenous assay procedure with robust assay signal. Niles et al. recently described a novel proteolytic biomarker profile for cytotoxicity that embodies many biological attributes desirable for robust assay development (Niles et al., 2007). Subsequently, a homogenous luminescent assay was developed for measuring this biomarker that comprises a formulation containing an aminoluciferin-conjugated substrate, ATP, MgSO4 and a thermostable, recombinant luciferase (Figure 1). We describe here the development and validation of a bioluminescent cytotoxicity assay using a protease biomarker in a 1536-well plate format, by the screening of the1408 compound collection from National Toxicology Program (NTP) (Xia et al., 2008). We have identified several known and novel membrane disrupters by screening NTP library, which indicates that the assay is robust and suitable for large scale library screening.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

แม้ว่าวิธีวิเคราะห์จำนวนมากได้รับการพัฒนาสำหรับการกำหนดในรูปแบบความหนาแน่นลด cytotoxicity สิ่งล้ำค่าได้รับการตรวจสอบเพื่อใช้ในการคัดกรองอัตราความเร็วสูงที่ต้องใช้กระบวนการวิเคราะห์อย่างง่าย ให้ มีประสิทธิภาพวิเคราะห์สัญญาณ Al. Niles ร้อยเอ็ดเพิ่งอธิบายโปรไฟล์ไบโอมาร์คเกอร์ proteolytic นวนิยาย cytotoxicity ที่ผสานคุณลักษณะชีวภาพในการพัฒนาวิเคราะห์ประสิทธิภาพ (Niles et al., 2007) ในเวลาต่อมา การทดสอบ luminescent ให้ถูกพัฒนาขึ้นสำหรับวัดนี้ไบโอมาร์คเกอร์ที่ประกอบด้วยการกำหนดพื้นผิวการ aminoluciferin กลวง ATP, MgSO4 และ luciferase เป็น thermostable, recombinant (รูปที่ 1) เราอธิบายต่อการพัฒนาและการตรวจสอบวิเคราะห์ bioluminescent cytotoxicity ที่ใช้เป็นรติเอสไบโอมาร์คเกอร์ในรูปแบบแผ่นดี 1536 คัดกรองของคอลเลกชันผสม the1408 จากชาติพิษวิทยาโปรแกรม (NTP) (เซี่ย et al., 2008) เราได้ระบุ disrupters เมมเบรนรู้จัก และนวนิยายหลาย โดยคัดกรอง NTP ไลบรารี ซึ่งบ่งชี้ว่า การวิเคราะห์มีประสิทธิภาพ และเหมาะสมสำหรับคัดกรองไลบรารีขนาดใหญ่

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

แม้ว่าวิธีการทดสอบจำนวนมากได้รับการพัฒนาสำหรับการกำหนดความเป็นพิษในรูปแบบที่มีความหนาแน่นต่ำ, มีค่าน้อยมากที่ได้รับการตรวจสอบเพื่อใช้ในการตรวจคัดกรองผ่านสูงที่ต้องใช้ง่ายขั้นตอนการทดสอบคุณสมบัติเหมือนกันกับสัญญาณทดสอบที่แข็งแกร่ง ไนล์ et al, เมื่อเร็ว ๆ นี้อธิบายรายละเอียด biomarker โปรตีนใหม่สำหรับพิษที่คาดเดาคุณลักษณะที่พึงประสงค์หลายทางชีวภาพเพื่อการพัฒนาทดสอบประสิทธิภาพ (ไนล์ et al., 2007) ต่อจากนั้นทดสอบเรืองแสงเป็นเนื้อเดียวกันได้รับการพัฒนาสำหรับการวัด biomarker นี้ที่ประกอบด้วยสูตรที่มีส่วนผสมของสารตั้งต้น aminoluciferin-ผันที่เอทีพี MgSO4 และอุณหภูมิ, recombinant luciferase (รูปที่ 1) ที่นี่เราจะอธิบายการพัฒนาและการตรวจสอบของการทดสอบความเป็นพิษเรืองแสงใช้ biomarker โปรติเอสในรูปแบบแผ่น 1536 ดีโดยการคัดกรองของการเก็บสาร the1408 จากโปรแกรมพิษวิทยาแห่งชาติ (NTP) (เซี่ย et al., 2008) เราได้ระบุหลายที่รู้จักและ disrupters เยื่อนิยายของการตรวจคัดกรองห้องสมุด NTP ซึ่งบ่งชี้ว่าการทดสอบเป็นที่แข็งแกร่งและเหมาะสำหรับการตรวจคัดกรองห้องสมุดขนาดใหญ่

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ถึงแม้ว่าการทดสอบมากมายได้ถูกพัฒนาขึ้นเพื่อกำหนดความเป็นพิษในรูปแบบความหนาแน่นต่ำน้อยได้รับการตรวจสอบเพื่อใช้ในการคัดกรองสูง throughput ที่ใช้ง่าย ขั้นตอนการทดสอบ การทดสอบเนื้อเดียวกันกับสัญญาณที่แข็งแกร่ง ไนล์ et al .เมื่อเร็ว ๆนี้อธิบายนวนิยายโปรตีนไบโอมาร์คเกอร์โปรไฟล์สำหรับเซลล์ที่ embodies คุณลักษณะทางชีวภาพมากมายพึงปรารถนาเพื่อการพัฒนาการทดสอบประสิทธิภาพ ( Niles et al . , 2007 ) ต่อมาเป็นเนื้อเดียว โดยรวม พัฒนาวัดนี้ไบโอมาร์คเกอร์ที่ประกอบด้วยสูตรที่มี aminoluciferin conjugated ตั้งต้น และสร้างสาร ATP MgSO4 ใ , ,รีคอมบิแนนท์เอนไซม์ลูซิเฟอเรส ( รูปที่ 1 ) เราอธิบายที่นี่การพัฒนาและตรวจสอบความตรงของไบโอลูมิเนสเซนต์ต่อการทดสอบโดยใช้โปรตีนไบโอมาร์คเกอร์ในรูปแบบคู่ดีจาน โดยการคัดเลือก the1408 ผสมคอลเลกชันจากโปรแกรมพิษวิทยาแห่งชาติ ( NTP ) ( Xia et al . , 2008 ) เราได้ระบุหลายที่รู้จักและ disrupters เยื่อนวนิยายโดยห้องสมุด NTP การคัดกรอง ,ซึ่งบ่งชี้ว่าแบคทีเรียที่แข็งแกร่ง และเหมาะสมสำหรับการคัดกรองห้องสมุดขนาดใหญ่