2.4. Lipid oxidationLipid oxidation

2.4. Lipid oxidation
Lipid oxidation was analyzed employing thiobarbituric acid assay
(Yin, Faustman, Riesen, & Williams, 1993). Briefly, 5 g representative
samples, taken frommultiple locations,weremixedwith trichloroacetic
acid, homogenized in a blender, and filtered usingWhatman No. 1 filter
paper. OnemL of filtratewasmixedwith 1mL of aqueous thiobarbituric
acid (20 mM) and incubated at 25 °C for 20 h. The absorbance of
samples at 532 nm measured spectrophotometrically (UV-2401
spectrophotometer, Shimadzu Inc., Columbia, MD, USA) was reported
as thiobarbituric acid reactive substances (TBARS).
2.5. Metmyoglobin reducing activity (MRA)
MRA was evaluated according to the method described by Sammel,
Hunt, Kropf, Hachmeister, Johnson (2002). Cubes (2.5 × 2.5 × 2.5 cm3)
of meat were removed fromthe light-exposed surfaces and submerged
in a solution of 0.3% sodium nitrite for 20 min at room temperature to
induce metmyoglobin formation. Samples were blotted dry, vacuum
packaged, and the reflectance spectra from700 to 400 nm were recorded
immediately on the light-exposed surface using aHunterLab LabScan
XE colorimeter. The vacuum-packaged samples were then incubated
at 30 °C for 2 h to induce reduction of metmyoglobin, and the reflectance
data were taken again. Percentage of surface metmyoglobin
(pre-incubation as well as post-incubation) was calculated based on
K/S ratios and according to established formulas (AMSA, 2012). MRA
was calculated using the following equation.
MRA=100×[(%pre- incubation surfacemetmyoglobin− %postincubation
surface metmyoglobin)/%pre - incubation surface
metmyoglobin].
2.6. Myoglobin concentration
Myoglobin concentration was determined according to the method
of Faustman and Phillips (2001). Duplicate 5 g frozen samples were homogenized
in 45mL ice cold 40mMsodiumphosphate buffer at pH 6.8.
The homogenatewas filtered usingWhatman No. 1 filter paper, and the
absorbance of the filtrate at 525 nm (A525) was recorded using a UV-
2401PC spectrophotometer (Shimadzu Inc., Columbia, MD, USA) with
sodium phosphate buffer as blank. Myoglobin concentration was
calculated using the following equation.
Myoglobin (mg/g)=[A525/(7.6 mM−1 cm−1×1 cm)] x
[17,000/1000]×10.
where, 7.6 mM−1 cm−1 = millimolar extinction coefficient of
myoglobin at 525 nm; 1 cm = path length of cuvette; 17,000 Da =
average molecular mass of myoglobin; 10 = dilution factor.
2.7. Isolation of sarcoplasmic proteome
The sarcoplasmic proteomes from ISM and OSM steaks (n = 8)
collected on day 0 were extracted according to the method of Joseph
et al. (2012). Frozen sampleswere thawed at 4 °C, and 5 g ofmuscle tissuewas
homogenized in a 25 mLice-cold extraction buffer (40mMTris,
5 mM EDTA, pH 8.0) using a Waring blender (Waring Commercial,
Torrington, CT, USA). The homogenate was centrifuged at 10,000 ×g
for 10 min at 4 °C. The supernatant (sarcoplasmic proteome extract)
was filtered and utilized for subsequent analysis.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4 ออกซิเดชันของไขมันออกซิเดชันของไขมันได้วิเคราะห์การใช้ทดสอบกรด thiobarbituric(ยิน Faustman, Riesen และวิ ลเลียมส์ 1993) สั้น ๆ 5 กรัมแทนตัวอย่าง ถ่ายสถาน frommultiple, weremixedwith trichloroaceticกรด homogenized เป็นกลุ่มในเบลนเดอร์เป็น และกรองตัวกรอง usingWhatman หมายเลข 1กระดาษ OnemL filtratewasmixedwith 1mL ของ thiobarbituric อควีกรด (20 mM) และ incubated ที่ 25 ° C สำหรับ 20 h Absorbance ของตัวอย่างที่ 532 nm วัด spectrophotometrically (UV-2401รายงานเครื่องทดสอบกรดด่าง Shimadzu Inc. โคลัมเบีย MD สหรัฐอเมริกา)เป็น thiobarbituric กรดปฏิกิริยาสาร (TBARS)2.5. Metmyoglobin ลดกิจกรรม (MRA)MRA ถูกประเมินตามวิธีการอธิบายไว้ โดย Sammelล่า Kropf, Hachmeister, Johnson (2002) ลูกบาศก์ (2.5 × 2.5 × 2.5 cm3)เนื้อออกจากพื้นผิวสัมผัสแสง และน้ำท่วมในโซลูชันของ 0.3% โซเดียมไนไตรท์ใน 20 นาทีที่อุณหภูมิห้องเพื่อก่อให้เกิดก่อ metmyoglobin ตัวอย่างเครื่องดูดฝุ่นแห้ง blottedบรรจุ และ from700 แรมสเป็คตราแบบสะท้อนแสงกับ 400 nm ได้บันทึกไว้บนพื้นผิวแสดงไฟที่ใช้ aHunterLab LabScan ทันทีXE เครื่อง ตัวอย่างบรรจุสุญญากาศได้แล้ว incubatedที่ 30 ° C สำหรับ h 2 ชวนลด metmyoglobin และแบบสะท้อนแสงที่ได้นำข้อมูลอีกครั้ง เปอร์เซ็นต์ของพื้นผิว metmyoglobin(ก่อนบ่มเช่นเป็นหลังบ่ม) ถูกคำนวณจากอัตราส่วน K/S และ ตามสูตรที่กำหนดขึ้น (AMSA, 2012) MRAมีคำนวณโดยใช้สมการต่อไปนี้MRA = 100 × [(%ฟักตัวก่อน surfacemetmyoglobin− % postincubationmetmyoglobin)/%pre ผิว - ผิวบ่มmetmyoglobin]2.6 ความเข้มข้นไมโยโกลบินความเข้มข้นไมโยโกลบินได้กำหนดตามวิธีการFaustman และไขควง (2001) 5 กรัมแช่ตัวอย่างซ้ำถูก homogenized เป็นกลุ่มใน 45mL น้ำแข็งเย็น 40mMsodiumphosphate บัฟเฟอร์ที่ pH 6.8Homogenatewas ที่กรองกระดาษกรอง usingWhatman หมายเลข 1 และabsorbance ของสารกรองที่ 525 nm (A525) ถูกบันทึกไว้โดยใช้ UV แบบ2401PC เครื่องทดสอบกรดด่าง (Shimadzu Inc. โคลัมเบีย MD สหรัฐอเมริกา) ด้วยโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ว่างไว้ มีความเข้มข้นไมโยโกลบินคำนวณโดยใช้สมการต่อไปนี้ไมโยโกลบิน (mg/g) = [A525 / (7.6 mM−1 cm−1 × 1 ซม.)] x[17,000/1000] × 10, 7.6 mM−1 cm−1 = millimolar ดับสัมประสิทธิ์ของไมโยโกลบินที่ 525 nm 1 ซม. =ความยาวเส้นทางของ cuvette ดา 17,000 =มวลโมเลกุลเฉลี่ยของไมโยโกลบิน 10 =ปัจจัยเจือจาง2.7 การแยกของ sarcoplasmic proteomeProteomes sarcoplasmic จากสเต็ก ISM และ OSM (n = 8)รวบรวมในวันที่ 0 ที่แยกตามวิธีการของโจเซฟal. ร้อยเอ็ด (2012) แช่แข็ง thawed ที่ 4 ° C, 5 g ofmuscle tissuewas sampleswerehomogenized เป็นกลุ่มในบัฟเฟอร์ 25 สกัดเย็น mLice (40mMTris5 mM EDTA, pH 8.0) ใช้ blender Waring (Waring พาณิชย์Torrington, CT สหรัฐอเมริกา) Homogenate ถูก centrifuged ที่ 10000 × gใน 10 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส Supernatant (sarcoplasmic proteome สกัด)กรอง และใช้สำหรับวิเคราะห์ภายหลัง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 ออกซิเดชันของไขมันออกซิเดชันของไขมันวิเคราะห์จ้างทดสอบกรด thiobarbituric (หยิน Faustman, Riesen และวิลเลียมส์, 1993) สั้น ๆ , 5 กรัมตัวแทนกลุ่มตัวอย่างที่นำมาสถานfrommultiple, weremixedwith ไตรคลอโรกรดปั่นในเครื่องปั่นและกรองusingWhatman ฉบับที่ 1 กรองกระดาษ OnemL ของ filtratewasmixedwith 1 mL ของ thiobarbituric น้ำกรด(20 มิลลิเมตร) และบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 ชั่วโมง การดูดกลืนแสงของกลุ่มตัวอย่างที่ 532 นาโนเมตรวัด spectrophotometrically (UV-2401 spectrophotometer, Shimadzu อิงค์โคลัมเบีย, MD, USA) มีรายงานว่าเป็นสารที่มีปฏิกิริยากรดthiobarbituric (TBARS). 2.5 metmyoglobin ลดกิจกรรม (MRA) MRA ถูกประเมินตามวิธีการอธิบายโดย Sammel, ล่า Kropf, Hachmeister จอห์นสัน (2002) ก้อน (2.5 × 2.5 × 2.5 cm3) ของเนื้อสัตว์ที่ถูกถอดออก fromthe พื้นผิวสัมผัสแสงและจมอยู่ใต้น้ำในการแก้ปัญหาของโซเดียมไนไตรท์0.3% เป็นเวลา 20 นาทีที่อุณหภูมิห้องจะทำให้เกิดการก่อตัวmetmyoglobin ตัวอย่างเปื้อนแห้งสูญญากาศบรรจุและสเปกตรัมสะท้อน from700 ถึง 400 นาโนเมตรที่ถูกบันทึกไว้ได้ทันทีบนพื้นผิวสัมผัสแสงโดยใช้aHunterLab LabScan colorimeter XE กลุ่มตัวอย่างที่สูญญากาศบรรจุแล้วถูกบ่มที่อุณหภูมิ 30 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 2 ชั่วโมงเพื่อก่อให้เกิดการลดลงของ metmyoglobin และสะท้อนข้อมูลที่ถูกนำอีกครั้ง ร้อยละของพื้นผิว metmyoglobin (ก่อนการบ่มเช่นเดียวกับการโพสต์การบ่ม) คำนวณจากอัตราส่วนK / S และเป็นไปตามสูตรที่จัดตั้งขึ้น (AMSA 2012) MRA ที่คำนวณโดยใช้สมการต่อไป. MRA = 100 × [(% ก่อนการบ่ม surfacemetmyoglobin-% postincubation ผิว metmyoglobin) /% ก่อน - พื้นผิวการบ่มmetmyoglobin]. 2.6 ความเข้มข้นของ myoglobin เข้มข้น myoglobin ถูกกำหนดตามวิธีการของFaustman และฟิลลิป (2001) ซ้ำ 5 กรัมตัวอย่างแช่แข็งที่ถูกปั่นในน้ำแข็ง45ml บัฟเฟอร์เย็น 40mMsodiumphosphate ที่ pH 6.8. homogenatewas กรอง usingWhatman ฉบับที่ 1 กระดาษกรองและการดูดกลืนแสงของกรองที่525 นาโนเมตร (A525) จะถูกบันทึกโดยใช้รังสียูวีspectrophotometer 2401PC (Shimadzu Inc . โคลัมเบีย, MD, USA) มีโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์เป็นที่ว่างเปล่า ความเข้มข้นของ myoglobin ถูกคำนวณโดยใช้สมการต่อไป. myoglobin (mg / g) = [A525 / (7.6 MM-1 ซม-1 × 1 ซม.)] x [17000/1000] × 10. ที่ 7.6 MM-1 ซม-1 = ค่าสัมประสิทธิ์การสูญเสีย millimolar ของmyoglobin ที่ 525 นาโนเมตร; 1 ซม. ความยาวเส้นทางของ cuvette =; 17,000 ดา = มวลโมเลกุลเฉลี่ยของ myoglobin; 10 = ปัจจัยที่ทำให้เจือจาง. 2.7 การแยกโปรตีน sarcoplasmic proteomes sarcoplasmic จากสเต็ก ISM และ OSM (n = 8) เก็บรวบรวมในวันที่ 0 ถูกสกัดตามวิธีการของโจเซฟเอตอัล (2012) sampleswere แช่แข็งละลายที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียสและ 5 กรัม ofmuscle tissuewas หดหายในบัฟเฟอร์สกัด 25 mLice เย็น (40mMTris, EDTA 5 มิลลิค่า pH 8.0) โดยใช้เครื่องปั่น Waring (Waring พาณิชย์, ทอร์, CT, USA) homogenate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 10,000 ×กรัมเป็นเวลา10 นาทีที่อุณหภูมิ 4 องศาเซลเซียส สารละลาย (สารสกัดจากโปรตีน sarcoplasmic) ถูกกรองและนำมาใช้ในการวิเคราะห์ที่ตามมา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 Lipid氧化。分析了Lipid氧化的硫代巴比妥酸法是员工Riesen（阴，Faustman & Williams，），1993 Briefly，5 g系列的代表性。taken样本，三氯乙酸，weremixedwith frommultiple locations在一个单一的酸，usingWhatman搅拌机，1号和filtered filter。filtratewasmixedwith纸。OnemL 1mL硫代巴比妥（水）20毫米）和酸（incubated在25°C），20 absorbance of H .在测量样品（UV-2401 spectrophotometrically 532海里岛津分光光度计，Inc .，哥伦比亚，MD，USA）是reported作为硫代巴比妥酸反应物质（TBARS）。2.5 Metmyoglobin还原活性（MRA）。评估的方法是根据MRA，由Sammel described亨特，Kropf（约翰逊，Hachmeister立方体，2002）。（×）×2.5 2.5 2.5 cm3是的fromthe肉表面和埋light-exposed与删除。在一个解决方案；亚硝酸钠（钠在温度为20 min到房间induce metmyoglobin样本是blotted干，形成真空。一定要打包。reflectance光谱，和对400是recorded 700到海里在使用immediately light-exposed aHunterLab LabScan表面比色vacuum-packaged Xe）然后incubated样品是。在30°C，H induce减少到2 metmyoglobin），和reflectance但是，数据是taken metmyoglobin的表面。pre-incubation As As（post-incubation）都是基于calculated根据ratios和K / S成立，2012 AMSA formulas（MRA）。以下是calculated和使用的。100×= [（MRA %pre - incubation %postincubation surfacemetmyoglobin−metmyoglobin）/ %pre incubation表面-表面metmyoglobin ] .2.6 Myoglobin浓度。Myoglobin浓度的方法是根据determinedFaustman和菲利普斯（g）。（2001 5是单一重复冷冻样本。在45mL在pH缓冲6.8 40mMsodiumphosphate冰冷。homogenatewas filtered usingWhatman）为1号，和过滤器。absorbance的滤液在525海里（）是一recorded A525使用UV岛津分光光度计（2401PC Inc .，哥伦比亚，MD，USA）与钠磷酸盐缓冲液的浓度、Myoglobin是As。使用联立方程的calculated以下。Myoglobin（mg / g）= [（A525 7.6毫米/ cm−−1 ]×1×1厘米）。17,000 ]×[ / 1000 10。在那里，7.6毫米- 1 cm−1）= millimolar extinction系数在525海里；肌红蛋白cuvette路径长度1厘米= = 17,000大；肌红蛋白分子的平均质量；10 =稀释因子。2.7 proteome Isolation（肌浆。从肌浆蛋白质：ISM和OSM 8牛排（n =）一是根据collected在0到extracted约瑟夫method of2012）等人。在sampleswere解冻冷冻4°C，和ofmuscle tissuewas 5 g在一个单一的提取，25 mLice-cold（40mMTris缓冲5毫米EDTA，pH 8（a）使用商业，Waring Waring搅拌机Torrington，CT，USA）。homogenate centrifuged）是在10,000×g在4°C，10 min肌proteome提取物上清液。（））为分析和utilized是filtered subsequent。