Growth experiment
A set of bacterial plates were created for each aspect of the study: growth in microgravity on the ISS (space plates), or growth on Earth (ground plates). The plates were created using clear agar to facilitate optical density (OD) measurements. 1.5 g of Gelzan CM agar (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) was added to 1 liter of lysogeny broth (LB). Each well of a flat-bottomed 96-well plate (Costar, Corning, NY, USA) was plated with 200 µl of agar. The plates were flamed to remove bubbles and incubated for 48–72 h at room temperature (∼20 °C) to ensure sterility before adding bacteria. Fresh overnights of each bacterial isolate were diluted to .01 OD600 and made into 8% glycerol stocks. For plating, 10 µl of each thawed stock dilution was added to two wells per 96 well plate. Six replicate plates were made. The bacteria were placed into different locations on each plate in order to account for drying at the edges or any other positional effects on the plates. The plates were then sealed with adhesive polypropylene film (VWR #60941-072), into which a grid of micron-diameter holes were cut with a laser to allow for airflow. The ground plates were stored at −80 °C at UC Davis, and the space plates were mailed on dry ice to the National Aeronautics and Space Administration (NASA) Johnson Space Center in Houston, TX before transfer (at −80 °C) to Cape Canaveral, FL for launch.
การเจริญเติบโตของการทดลอง
ชุดของแผ่นแบคทีเรียที่สร้างขึ้นสำหรับทุกแง่มุมของการศึกษาในแต่ละ: การเจริญเติบโตในสภาวะไร้น้ำหนักบนสถานีอวกาศนานาชาติ (แผ่นพื้นที่) หรือการเจริญเติบโตบนโลก (แผ่นพื้นดิน) แผ่นที่ถูกสร้างขึ้นโดยใช้วุ้นที่ชัดเจนเพื่ออำนวยความสะดวกความหนาแน่นของแสง (OD) วัด 1.5 กรัม Gelzan CM วุ้น (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) ถูกบันทึกอยู่ใน 1 ลิตร lysogeny น้ำซุป (ปอนด์) ดีของที่ราบต่ำแผ่น 96 หลุม (ดารา, Corning, NY, USA) แต่ละคนถูกชุบด้วย 200 ไมโครลิตรของวุ้น แผ่นถูก flamed เพื่อเอาฟองและบ่มเป็นเวลา 48-72 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง (~20 ° C) เพื่อให้แน่ใจว่าเป็นหมันก่อนที่จะเพิ่มแบคทีเรีย overnights สดของแต่ละแยกแบคทีเรียถูกลดลงเหลือ 0.01 OD600 และทำให้เป็นหุ้นกลีเซอรีน 8% สำหรับชุบ 10 ไมโครลิตรของแต่ละลดสัดส่วนหุ้นละลายถูกบันทึกอยู่ในสองหลุมต่อ 96 แผ่นเดียว หกแผ่นซ้ำได้ทำ แบคทีเรียที่ถูกวางไว้ในสถานที่ที่แตกต่างกันในแต่ละแผ่นเพื่อบัญชีสำหรับการอบแห้งที่ขอบหรือผลตำแหน่งอื่น ๆ บนจาน แผ่นถูกปิดผนึกแล้วกับฟิล์มกาวโพรพิลีน (VWR # 60941-072) เป็นที่ตารางของหลุมไมครอนเส้นผ่าศูนย์กลางถูกตัดด้วยเลเซอร์เพื่อให้การไหลเวียนของอากาศ แผ่นพื้นถูกเก็บไว้ที่ -80 ° C ที่ UC Davis, และแผ่นพื้นที่ถูกส่งบนน้ำแข็งแห้งไปและอวกาศแห่งชาติสหรัฐฯ (NASA) จอห์นสันศูนย์อวกาศในฮูสตัน, เท็กซัสก่อนที่จะโอน (ที่ -80 ° C) เพื่อ Cape Canaveral, ฟลอริด้าสำหรับการเปิดตัว
การแปล กรุณารอสักครู่..

การ ทดลองชุดจานแบคทีเรียที่ถูกสร้างขึ้นสำหรับแต่ละด้านของการศึกษาต่อสภาวะไร้น้ำหนักบนสถานีอวกาศนานาชาติ ( แผ่นพื้นที่ ) หรือเติบโตบนโลก ( แผ่นดิน ) จานสร้าง ใช้ล้างวุ้นเพื่ออำนวยความสะดวกซิกแซ็ก ( OD ) วัด 1.5 กรัม gelzan ซม. ( ซิกม่า Aldrich St . Louis , MO , USA ) คือเพิ่ม 1 ลิตร lysogeny broth ( ปอนด์ ) แต่ละคนดีของแบน bottomed 96 ดีจาน ( COSTAR , Corning , NY , USA ) ถูกชุบด้วย 200 µลิตรของอาหารเลี้ยงเชื้อ แผ่นเป็น flamed เอาฟองอากาศบ่ม 48 - 72 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิห้อง ( ∼ 20 ° C ) เพื่อให้แน่ใจว่าเป็นหมันก่อนเพิ่มแบคทีเรีย สด overnights ของแต่ละเชื้อแยกเพื่อลดระดับ od600 และทำให้เป็นหุ้น 8 % กลีเซอรอล . สำหรับชุบ , 10 µลิตรละลายเจือจางแต่ละหุ้นถูกเพิ่มสองบ่อดีต่อ 96 แผ่น 6 เลียนแบบแผ่นได้ แบคทีเรียถูกวางไว้ในสถานที่ที่แตกต่างกันในแต่ละแผ่น เพื่อให้บัญชีสำหรับการอบแห้งที่ขอบหรืออื่น ๆตำแหน่งต่อจาน แผ่น แล้วผนึกด้วยกาวฟิล์มพอลิโพรพิลีน ( อนาคีเมีย # 60941-072 ) ซึ่งเป็นตารางไมครอน เส้นผ่านศูนย์กลางรูถูกตัดด้วยเลเซอร์ เพื่อช่วยให้ พื้นแผ่นอุณหภูมิ− 80 ° C ที่ UC Davis และพื้นที่แผ่นถูกส่งในบริการน้ำแข็งให้องค์การบริหารการบินและอวกาศแห่งชาติ ( นาซา ) ที่ศูนย์อวกาศจอห์นสันในฮูสตัน , เท็กซัส ก่อนโอน ( − 80 ° C ) ใน Cape Canaveral , ฟลอริด้าสำหรับการเปิดตัว
การแปล กรุณารอสักครู่..
