Cell lines, culture conditions, vir

Cell lines, culture conditions, virus isolation, and pilot-scale production

Three different Madin-Darby canine kidney cell lines (MDCK-1[14] and [15]; MDCK-2[12], [14] and [33]; MDCK-3[33]) and one African green monkey cell line (VERO [17]) were used in the experiments. The MDCK-1 and MDCK-2 as well as the VERO cell lines were anchorage-dependent; whereas the MDCK-3 line was cultivated in suspension. The three MDCK cell lines were used for primary isolation of influenza viruses from clinical specimens and for pilot-scale virus production. The VERO cell line was used for small-scale production experiments, one representative isolate from each of the four virus groups (H1N1, H3N2, B-Victoria, B-Yamagata) was used. For production, MDCK-1 was grown on micro-carriers in serum free medium to which a protease was added to facilitate virus replication. Virus was harvested when cytopathic effect (CPE) was observed in all cells. MDCK-2 were grown in T-225 flasks in a serum-free medium, virus growth was monitored by microscopic observation for CPE and by hemadsorption assay (HA). MDCK-3 grew as a single-cell suspension in disposable shake flasks in a serum-free medium supplemented with recombinant bovine trypsin. VERO cells were grown on micro carriers in serum-free medium supplemented with trypsin. Virus from small-scale production was harvested, clarified, stabilized by addition of 5% glycerol using a standard protocol, stored at ≤−60 °C, and shipped to the CDC for viral antigen content determination.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เซลล์บรรทัด วัฒนธรรมเงื่อนไข แยกไวรัส และการผลิตในระดับนำร่องสามบรรทัดแตกต่าง Madin บี้ไตสุนัขเซลล์ (MDCK-1 [14] และ [15]; MDCK-2 [12], [14] และ [33]; MDCK-3[33]) และสายหนึ่งลิงเขียวแอฟริกาเซลล์ (VERO [17]) ถูกใช้ในการทดลอง MDCK-1 และ MDCK 2 ตลอดจนรายการเซลล์ VERO ถูกเรจขึ้นอยู่กับ ในขณะที่บรรทัด MDCK 3 ถูกปลูกในระบบกันสะเทือน บรรทัดเซลล์ MDCK สามถูกใช้ สำหรับแยกหลักของไวรัสไข้หวัดใหญ่จาก specimens ทางคลินิก และ การผลิตไวรัสระดับนำร่อง ใช้สำหรับการทดลองผลิตระบุบรรทัดเซลล์ VERO หนึ่งพนักงานแยกจากกลุ่มไวรัส 4 (H1N1, H3N2, B-วิคตอเรีย B-ตะ) ใช้ สำหรับการผลิต MDCK-1 ถูกจัดปลูกในไมโครสายการบินในซีรั่มฟรีที่รติเอสถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อจำลองแบบไวรัส ไวรัสถูกเก็บเกี่ยวเมื่อผล cytopathic (CPE) ที่พบในเซลล์ทั้งหมด MDCK 2 ถูกปลูกในน้ำ T 225 ในสื่อฟรีเซรั่ม เจริญเติบโตของไวรัสถูกตรวจสอบ โดยการสังเกตด้วยกล้องจุลทรรศน์สำหรับ CPE และทดสอบ hemadsorption (ฮา) MDCK 3 เติบโตเป็นระงับเซลล์เดียวในน้ำปั่นทิ้งในกลางฟรีเซรั่มที่เสริม ด้วย recombinant วัวทริปซิน เซลล์ VERO ได้เติบโตขึ้นบนสายการบินขนาดเล็กในสื่อฟรีเซรั่มเสริม ด้วยทริปซิน ไวรัสจากระบุผลิตถูกเก็บเกี่ยว ขึ้ เสถียร โดยเพิ่ม 5% กลีเซอรที่ใช้โพรโทคอลมาตรฐาน เก็บที่ ≤−60 ° C และจัด CDC สำหรับการกำหนดเนื้อหาของการตรวจหาไวรัส

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เซลล์เงื่อนไขวัฒนธรรมการแยกเชื้อไวรัสและการผลิตนักบินระดับสามที่แตกต่างกัน Madin-ดาร์บี้เซลล์ไตของสุนัขสาย (MDCK-1 [14] และ [15]; MDCK-2 [12] [14] และ [33] MDCK-3 [33]) และเป็นหนึ่งในลิงแอฟริกันสีเขียวสายพันธุ์ของเซลล์ (VERO [17]) ถูกนำมาใช้ในการทดลอง MDCK-1 และ MDCK-2 เช่นเดียวกับเซลล์ VERO เป็นทอดสมอขึ้นอยู่กับ; ในขณะที่สาย MDCK-3 ได้รับการปลูกฝังในการระงับ สามบรรทัด MDCK มือถือถูกนำมาใช้ในการแยกหลักของไวรัสไข้หวัดใหญ่จากตัวอย่างทางคลินิกและการผลิตไวรัสนักบินระดับ บรรทัด VERO เซลล์ที่ใช้สำหรับการขนาดเล็กการทดลองการผลิตซึ่งเป็นหนึ่งในตัวแทนแยกจากกันของสี่กลุ่มไวรัส (H1N1, H3N2, B-Victoria, B-ยามากาตะ) ใช้ สำหรับการผลิต MDCK-1 ที่ปลูกในสายการบินขนาดเล็กในสื่อฟรีเซรั่มโปรติเอสที่ได้รับการเพิ่มการอำนวยความสะดวกการจำลองแบบไวรัส ไวรัสเก็บเกี่ยวเมื่อผล cytopathic (CPE) พบว่าในทุกเซลล์ MDCK-2 ปลูกใน T-225 ขวดในกลางซีรั่มที่ปราศจากการเจริญเติบโตของเชื้อไวรัสได้รับการตรวจสอบโดยกล้องจุลทรรศน์สำหรับ CPE และโดยการทดสอบ hemadsorption (HA) MDCK-3 ขยายตัวเป็นจังหวะเดียวเซลล์ในขวดสั่นทิ้งกลางในซีรั่มฟรีเสริมด้วย trypsin วัว recombinant เซลล์ VERO ปลูกกับสายการบินขนาดเล็กขนาดกลางในซีรั่มฟรีเสริมด้วย trypsin ไวรัสจากการผลิตขนาดเล็กได้รับการเก็บเกี่ยวชี้แจงเสถียรภาพโดยนอกเหนือจากกลีเซอรีน 5% โดยใช้โปรโตคอลมาตรฐานเก็บไว้ที่≤-60 องศาเซลเซียสและจัดส่งที่ CDC สำหรับการกำหนดเนื้อหาแอนติเจนของเชื้อไวรัส

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เซลล์ , เงื่อนไข , การแยกเชื้อไวรัส วัฒนธรรม และนักบินระดับการผลิต

ทั้งสามต่าง madin ดาร์บี้สุนัขไตเซลล์ ( mdck-1 [ 14 ] และ [ 15 ] ; mdck-2 [ 12 ] , [ 14 ] และ [ 33 ] ; mdck-3 [ 33 ] ) และหนึ่งในแอฟริกาสีเขียวลิงสายพันธุ์ของเซลล์ ( เวโร [ 17 ] ) ที่ใช้ในการทดลอง และที่ mdck-1 mdck-2 เช่นเดียวกับเวโรเซลล์เป็นแองเคอเรจ ) ;ส่วนสาย mdck-3 ถูกปลูกในการระงับ 3 mdck เซลล์ถูกใช้สำหรับการแยกไวรัสไข้หวัดใหญ่จากตัวอย่างทางคลินิก และนำร่องการผลิตไวรัสขนาด โดยเวโรเซลล์ไลน์ที่ใช้สำหรับการทดลองการผลิตขนาดเล็ก หนึ่งตัวแทนจากแต่ละสี่กลุ่ม ( ไวรัส H1N1 b-victoria h3n2 , , b-yamagata ) คือใช้ สำหรับการผลิตmdck-1 โตบนไมโครซีรั่มฟรีพาหะตัวกลาง ซึ่งถูกเพิ่มเข้ามาเพื่อความสะดวกในการสร้างไวรัส ไวรัส cytopathic เก็บเกี่ยวเมื่อผล ( CPE ) พบในเซลล์ mdck-2 เติบโตใน t-225 ขวดใน serum-free กลาง , การเจริญเติบโตของไวรัสถูกตรวจสอบโดยการสังเกตกล้องจุลทรรศน์สำหรับ CPE และ hemadsorption assay ( ฮา )mdck-3 เติบโตเป็นเซลล์เดียวระงับในขวดเขย่า serum-free ผ้าอ้อมในอาหารสูตร MS ที่เสริมด้วยเอนไซม์ recombinant bovine . เวโรเซลล์เติบโตบนอาหารสูตร MS ที่เสริมด้วย Micro ผู้ให้บริการใน serum-free ทริป . ไวรัสจากการผลิตขนาดเล็กเก็บเกี่ยวไม่มีเสถียร โดยเพิ่ม 5% glycerol โดยใช้โปรโตคอลมาตรฐาน เก็บไว้ที่≤− 60 ° C