Table 1). The mfat1 gene expression

Table 1). The mfat1 gene expression vector-pST200
was consisted of a muscle creatine kinase enhancer
and a cytomegalovirus enhancer with a chicken bactin
promoter. A PGK/neo expression cassette
flanked by the loxP sites was linked to the backbone
as the selection marker (Fig. 1).
Isolation of transgenic cells
Primary fetal fibroblasts, isolated from a 50-day Luxi
cattle fetus by the trypsin enzyme digestion method,
were transfected with the linearized pST200 vector
and selected under G418 (250 lg/ml) for 8–10 days.
Then the G418-resistant colonies were pooled and
used for SCNT.
Oocytes in vitro maturation
Bovine ovaries were collected from a local abattoir, and
the cumulus oocyte complexes (COCs) were aspirated
from follicles (3–8 mm). Oocytes with three layers of
cumulus cells were selected and maturated in the tissue
culture medium M199 supplemented with 10 % (v/v)
fetal bovine serum (FBS) (HyClone, batch number
SH30070.03), 0.5 lg FSH ml-1 (Sioux Biochemicals),
5 lg LH ml-1 (Sioux Biochemicals), and 1 % (v/v)
Penicillin/Streptomycin and cultured for 20 h.
Nuclear transfer
Matured oocytes were enucleated to remove the first
polar body and surrounding cytoplasm. Donor cells were
then transferred into the enucleated oocytes individually.
The reconstructed embryos were fused inmannitol fusion
mediumwith two DC pulses (1.8 kV/cm for 20 ls).And
then, activated by 5 lM ionomycin (Sigma) for 5 min
and incubated with 10 mg cycloheximide ml-1 (Sigma)
in CR1aa medium under 5 % CO2 in air for 5 h. After
activation, the embryos were further cultured in CR1aa
medium supplemented with 0.4 % BSA for 40 h. Then,
selected and subsequently cultured in CR1aa medium
(4 % FBS) on cumulus cell monolayers for 6–7 days.
Embryo transfer and pregnancy diagnosis
All animal procedures followed the Guide for the Care
and Use of Laboratory Animals of the Northwest A&F
University. Qinchuan cattle, used as recipients, were
synchronized by cloprostenol treatment before

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตาราง 1) Mfat1 ยีนนิพจน์เวกเตอร์-pST200เป็นกล้ามเนื้อควรบริโภค kinase เพิ่มประกอบด้วยและเพิ่ม cytomegalovirus ด้วย bactin ไก่โปรโมเตอร์ เทปนิพจน์ PGK/นีโอขนาบข้าง ด้วย loxP อเมริกาถูกเชื่อมโยงกับแกนหลักเป็นเครื่องหมายตัวเลือก (Fig. 1)แยกเซลล์ถั่วเหลืองหลัก fibroblasts และทารกในครรภ์ โดดเดี่ยวยัง Luxi 50 วันวัวอ่อน โดยเอนไซม์ทริปซินย่อยอาหารวิธีมี transfected กับเวกเตอร์ pST200 เป็นเส้นตรงและเลือกภายใต้ G418 (250 lg/มล) 8 – 10 วันแล้วอาณานิคม G418 ทนถูกทางถูกพู และใช้สำหรับ SCNTแช่สารละลายในหลอดแก่มีการรวบรวมรังไข่วัวจากโรงฆ่าสัตว์ในท้องถิ่น และมี aspirated คอมเพล็กซ์ oocyte ลัส (COCs)จากรูขุมขน (3 – 8 mm) แช่สารละลายชั้นสามด้วยเลือก และ maturated ในเนื้อเยื่อเซลล์ลัสสื่อวัฒนธรรม M199 เสริม ด้วย 10% (v/v)เซรั่มวัวและทารกในครรภ์ (FBS) (HyClone หมายเลขชุดงานSH30070.03), 0.5 lg FSH ml-1 (ซี Biochemicals),5 lg LH ml-1 (ซี Biochemicals), และ 1% (v/v)ยา เพนนิซิลลิน/Streptomycin และอ่างสำหรับ 20 hโอนนิวเคลียร์แช่สารละลาย matured ได้ enucleated เอาครั้งแรกร่างกายขั้วโลกและบริเวณไซโทพลาซึม เซลล์ของผู้บริจาคได้แล้ว โอนเข้าแช่สารละลาย enucleated แต่ละโคลนสร้างขึ้นใหม่ผสมผสานหลอม inmannitolmediumwith สอง DC พัลส์ (1.8 kV/cm สำหรับ 20 ls) และเปิดใช้งานแล้ว โดย 5 lM ionomycin (ซิกมา) ใน 5 นาทีและ incubated กับ 10 มก. cycloheximide ml (ซิกมา)ใน CR1aa ภายใต้ 5% CO2 ในอากาศ h. 5 หลังเปิดใช้งาน โคลนถูกเพิ่มเติมอ่างใน CR1aaสื่อเสริม ด้วย 0.4% บีเอสเอสำหรับ 40 h แล้วเลือก และอ่างมาใน CR1aa(4% FBS) บน monolayers เซลล์ลัสวัน 6 – 7วินิจฉัยการโอนย้ายและการตั้งครรภ์ตัวอ่อนขั้นตอนที่สัตว์ทั้งหมดตามคำแนะนำสำหรับการดูแลและการใช้สัตว์ในห้องปฏิบัติการของตะวันตกเฉียงเหนือ A และ Fมหาวิทยาลัย Qinchuan วัว ใช้เป็นชื่อผู้รับ มีโดย cloprostenol รักษาก่อนการซิงโครไนส์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตารางที่ 1) การแสดงออกของยีน mfat1 เวกเตอร์ pST200
ถูกประกอบด้วยไคเนสรีเพิ่มกล้ามเนื้อ
และเพิ่ม cytomegalovirus กับ bactin ไก่
โปรโมเตอร์ PGK / เทปการแสดงออกนีโอ
ขนาบข้างด้วย loxP เว็บไซต์ที่เชื่อมโยงกับแกนนำ
เป็นเครื่องหมายเลือก (รูปที่ 1)..
การแยกเซลล์ยีน
เซลล์ของทารกในครรภ์หลักที่แยกได้จากลูซี่ 50 วัน
วัวทารกในครรภ์โดยวิธีการย่อยอาหารเอนไซม์ trypsin,
ถูก transfected กับเวกเตอร์ pST200 linearized
และเลือกภายใต้ G418 (250 LG / ml) สำหรับ 8-10 วัน.
แล้วอาณานิคม G418 ทนถูกรวบรวมและ
ใช้สำหรับ SCNT.
ไข่ในหลอดทดลองการเจริญเติบโต
รังไข่วัวที่ถูกเก็บรวบรวมจากโรงฆ่าสัตว์ในท้องถิ่นและ
คอมเพล็กซ์คิวมูลัสเซลล์ (CoCs) ได้รับการสำลัก
จากรูขุมขน (3-8 มิลลิเมตร) เซลล์ไข่ที่มีสามชั้นของ
เซลล์คิวมูลัสได้รับการคัดเลือกและ maturated ในเนื้อเยื่อ
กลางวัฒนธรรม M199 เสริมด้วย 10% (v / v)
ซีรั่มวัวของทารกในครรภ์ (FBS) (HyClone จำนวนชุด
SH30070.03) 0.5 จี FSH ml-1 (ซู ชีวเคมี)
5 มล. LG LH-1 (ซูชีวเคมี) และ 1% (v / v)
Penicillin / นี้ streptomycin และเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 20 ชม.
โอนนิวเคลียร์
ไข่สุกถูก enucleated การลบครั้งแรก
ร่างกายขั้วโลกและพลาสซึมโดยรอบ ผู้บริจาคเซลล์ถูก
โอนเข้าไปในเซลล์ไข่ enucleated รายบุคคล.
ตัวอ่อนสร้างขึ้นใหม่ได้รับการผสมฟิวชั่น inmannitol
mediumwith สองพัลส์ซี (1.8 กิโลโวลต์ / 20 ซม. สั่ง ls) .and
แล้วเปิดใช้งานโดย 5 LM ionomycin (ซิกม่า) เป็นเวลา 5 นาที
และบ่ม 10 มก. cycloheximide ml-1 (ซิกม่า)
ในสื่อ CR1aa CO2 ต่ำกว่า 5% ในอากาศเป็นเวลา 5 ชั่วโมง หลังจากที่
เปิดใช้งานมาเลี้ยงตัวอ่อนต่อไปใน CR1aa
กลางเสริมด้วย 0.4% BSA 40 ชั่วโมง จากนั้น
เลือกและต่อมาเพาะเลี้ยงในกลาง CR1aa
(4% FBS) ใน monolayers เซลล์คิวมูลัสสำหรับ 6-7 วัน.
โอนตัวอ่อนและการวินิจฉัยการตั้งครรภ์
ทุกขั้นตอนสัตว์ตามคู่มือสำหรับการดูแล
และการใช้ห้องปฏิบัติการสัตว์ของภาคตะวันตกเฉียงเหนือ & F
มหาวิทยาลัย วัว Qinchuan ใช้เป็นผู้รับได้รับ
การรักษาโดยการทำข้อมูลให้ตรงกันก่อนที่จะ cloprostenol

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตารางที่ 1 ) การ mfat1 การแสดงออกของยีน vector-pst200
ประกอบด้วยกล้ามเนื้อ Creatine kinase Enhancer
และเสริมใหม่กับไก่แบคติน
โปรโมเตอร์ เป็น PGK / นีโอเทป
ขนาบข้างด้วยสีหน้า loxp เว็บไซต์ที่เชื่อมโยงกับแกนหลัก
เป็นเครื่องหมายที่เลือก ( รูปที่ 1 ) .

แยกเซลล์ต้นหลักของไฟโบรบลาส ที่แยกได้จากลูซี่
50 วันโคเอนไซม์เอนไซม์ย่อยอาหารตัวอ่อนโดยวิธี
ถูก transfected กับช่วง pst200 เวกเตอร์
และเลือกภายใต้ g418 ( 250 LG / ml ) สำหรับ 8 – 10 วัน .
แล้ว g418 ป้องกันอาณานิคมได้ถูกใช้สำหรับ scnt pooled และ
.
เพาะเลี้ยงในหลอดทดลองเลี้ยงวัวที่เก็บจากรังไข่
โรงฆ่าสัตว์ในท้องถิ่นและ
Cumulus โอพีเชิงซ้อน ( ลบ ) aspirated
จากรูขุมขน ( 3 - 8 มม. )ไข่ที่มีสามชั้นของ
Cumulus เซลล์การคัดเลือกและ maturated ในเนื้อเยื่อ
สื่อวัฒนธรรมเปรียบเทียบอาหาร 10% ( v / v )
ครรภ์วัว เซรั่ม ( FBS ) ( hyclone , ชุดหมายเลข
sh30070.03 ) 0.5 LG 2 แน่นอน ( ซู อัลลิซิน ) ,
5 แน่นอน LH LG ( ซู อัลลิซิน ) และ 1% ( v / v )
เพนนิซิลลิน / ยาสเตรปโตมัยซินและเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 20 ชั่วโมง

โตขึ้นนิวเคลียร์โอน oocyte enucleated ลบก่อน
ร่างกายและบริเวณขั้วโลก cytoplasm เซลล์
โอนในเซลล์ enucleated เป็นรายบุคคล เมื่อถูกผสมขึ้นใหม่

mediumwith ฟิวชั่น inmannitol สองกะพริบ DC ( 1.8 kV / cm 20 LS ) .
แล้วเปิดใช้งานโดย 5 อิม ionomycin ( Sigma ) เป็นเวลา 5 นาที และ บ่มด้วย 10
แน่นอนร้อยเรียงมิลลิกรัม ( Sigma )
ใน cr1aa กลางใต้ 5% CO2 ในอากาศเป็นเวลา 5 ชั่วโมง หลังจาก
กระตุ้นตัวอ่อนได้เพาะเลี้ยงในอาหารสูตร MS ที่เสริมด้วย cr1aa
เอ 0.4% เป็นเวลา 40 ชั่วโมง แล้ว

) และต่อมาในการเพาะเลี้ยง cr1aa เลือก 4 เปอร์เซ็นต์ ( FBS ) ในเซลล์คิวมูลัส monolayers 6 – 7 วัน

ขั้นตอนการวินิจฉัยการตั้งครรภ์ตัวอ่อนโอนและสัตว์ทั้งหมดตามแนวทางการดูแล
และใช้ห้องปฏิบัติการ สัตว์ของตะวันตกเฉียงเหนือเป็น& f
มหาวิทยาลัย qinchuan โคใช้เป็นผู้รับ (
,