The activity of potassium (K + ) ch

The activity of potassium (K + ) channels critically depends on their density on the cell surface membrane, which is regulated by dynamic protein–protein interactions that often involve distincttrafficking signals on the cargo proteins. In this paper we explored the possibility of utilizing the Saccharomyces cerevisiae strain B31 for identification of the signal motifs that regulate surface expression of membrane proteins and for studying structure–function relationships of K + channels. B31 cells lack the K + efflux system and were reported to show overloaded K + -mediated growth inhibition in high K + media upon heterologous expression of a mammalian inwardly rectifying K + channel (Kir2.1). We show that while the expression of wild-type Kir2.1 channel inhibits the growth of B31 cells in high K + media, the human disease-causing mutations of Kir2.1 that abolish K + conduction (V302M) or surface trafficking (314/315) fully restores the growth. The expression of two-pore-domain K + channel KCNK3 or KCNK9 also inhibited the growth of B31 in high K + media while C-terminal mutations that reduce their 14-3-3 protein-dependent cell surface trafficking restored the growth of B31. Finally, the expression of Kir2.1 channels that were C-terminally fused with known sequence motifs including ER retention/retrieval signals and an endocytosis signal allowed the growth of B31 in high K + media. These results demonstrate the potential of B31 yeast strain as a unique biological tool to screen the random peptide libraries for novel sequence signals that down-regulate surface expression of membrane proteins, as well as to systematically identify the structural determinants for cell surface trafficking and/or ion conductance of K + channels.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

กิจกรรมของโพแทสเซียม (K +) ช่องที่เหลือขึ้นอยู่กับความหนาแน่นของพวกเขาในการเซลล์ผิวเมมเบรน ซึ่งได้รับการควบคุม โดยการโต้ตอบแบบไดนามิกโปรตีน – โปรตีนที่มักจะเกี่ยวข้องกับสัญญาณ distincttrafficking บนโปรตีนขนส่งสินค้า ในเอกสารนี้ เราสำรวจความเป็นไปได้ของการใช้ Saccharomyces cerevisiae สายพันธุ์ B31 รหัสลงสัญญาณที่ควบคุมค่าผิวของเมมเบรนโปรตีน และศึกษาความสัมพันธ์ของโครงสร้าง – ฟังก์ชัน K +ช่อง B31 เซลล์ขาด K + efflux ระบบ และมีรายงานแสดง K โอเวอร์โหลด + - mediated ยับยั้งการเจริญเติบโตใน K + สื่อเมื่อนิพจน์ heterologous ของ mammalian ที่สองอย่างภายใน rectifying K + ช่อง (Kir2.1) สูง แสดงว่า ในขณะที่ค่าของช่อง Kir2.1 ป่าชนิดยับยั้งการเติบโตเซลล์ B31 K + สื่อสูง ที่มนุษย์ก่อโรคกลายพันธุ์ของ Kir2.1 ที่ยุบ K + จึง (V302M) หรือผิวค้า (314/315) เต็ม คืนค่าเจริญเติบโต ค่าของ K + ช่อง KCNK3 หรือ KCNK9 สองรูโดยังห้ามการเติบโตของ B31 ใน K + สื่อสูงขณะกลายพันธุ์ C-เทอร์มินัลที่ลดของ 14-3-3 โปรตีนขึ้นอยู่กับเซลล์ผิวการค้า คืนค่าการเติบโตของ B31 ในที่สุด ค่าของช่อง Kir2.1 ที่ C พฤติกรรม fused ด้วยความรู้จักลำดับสัญญาณรักษา/เรียก ER และสัญญาณการ endocytosis ที่สามารถเจริญเติบโตของ B31 ใน K สูง + สื่อ ผลเหล่านี้แสดงให้เห็นถึงศักยภาพของ B31 ยีสต์ต้องใช้เป็นเครื่องมือชีวภาพเฉพาะการจอรีเพปไทด์สุ่มสำหรับสัญญาณนวนิยายลำดับที่ลงควบคุมค่าผิวของเมมเบรนโปรตีน เช่นระบบระบุดีเทอร์มิแนนต์โครงสร้างสำหรับเซลล์ผิวค้าหรือไอออนต้านทานของ K + ช่อง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

กิจกรรมของโพแทสเซียม (K +) ช่องวิกฤตขึ้นอยู่กับความหนาแน่นของพวกเขาในเยื่อหุ้มเซลล์ผิวซึ่งถูกควบคุมโดยปฏิกริยาระหว่างโปรตีนแบบไดนามิกที่มักจะเกี่ยวข้องกับ distincttrafficking สัญญาณโปรตีนสินค้า ในบทความนี้เราสำรวจความเป็นไปได้ของการใช้ Saccharomyces cerevisiae สายพันธุ์ B31 เพื่อระบุตัวตนของลวดลายสัญญาณที่ควบคุมการแสดงออกของพื้นผิวของโปรตีนและการศึกษาความสัมพันธ์ระหว่างโครงสร้างและหน้าที่ของ k + ช่อง เซลล์ B31 ขาดระบบ K + ไหลและได้รับรายงานที่จะแสดงมากเกินไป k + -mediated การยับยั้งการเจริญเติบโตใน K สูง + สื่อเมื่อการแสดงออกของ heterologous เลี้ยงลูกด้วยนมในใจแก้ไขช่อง K + (Kir2.1) เราแสดงให้เห็นว่าในขณะที่การแสดงออกของป่าประเภท Kir2.1 ช่องทางยับยั้งการเจริญเติบโตของเซลล์ใน B31 K สูง + สื่อที่ก่อให้เกิดโรคในมนุษย์กลายพันธุ์ของ Kir2.1 ที่ยกเลิกการนำ k + (V302M) หรือพื้นผิวการค้ามนุษย์ (314 / 315) อย่างเต็มที่เรียกคืนการเจริญเติบโต การแสดงออกของสองรูขุมขนโดเมน k + ช่อง KCNK3 หรือ KCNK9 ยังยับยั้งการเจริญเติบโตของ B31 ในสื่อ K + สูงในขณะที่การกลายพันธุ์ C-มินัลที่ช่วยลด 14-3-3 เซลล์โปรตีนของพวกเขาขึ้นอยู่กับการค้ามนุษย์เรียกคืนพื้นผิวการเจริญเติบโตของ B31 ในที่สุดการแสดงออกของช่อง Kir2.1 ที่อยู่ C-หนักผสมกับลวดลายลำดับที่รู้จักกันรวมทั้งการเก็บรักษา ER / ดึงสัญญาณและสัญญาณ endocytosis ได้รับอนุญาตการเจริญเติบโตของ B31 ใน K สูงสื่อต + ผลการศึกษานี้แสดงให้เห็นถึงศักยภาพของสายพันธุ์ยีสต์ B31 เป็นเครื่องมือทางชีวภาพที่ไม่ซ้ำกันไปยังหน้าจอห้องสมุดเปปไทด์สุ่มสัญญาณลำดับใหม่ที่ลงควบคุมการแสดงออกพื้นผิวของโปรตีนเช่นเดียวกับระบบการระบุปัจจัยโครงสร้างสำหรับการค้าเซลล์ผิวและ / หรือ สื่อกระแสไฟฟ้าไอออน K + ช่อง