2.2.2. AssaysPlasma and tissue samp

2.2.2. Assays

Plasma and tissue samples were assayed for corticosterone, glucose, NEFAs, and lactate. Insulin was assayed in plasma only. Corticosterone, glucose, NEFAs, and lactate assays were validated for use in tissue. Samples were run in concert with known standards and plasma samples that had been previously assayed. A standard curve was produced from the results of the known standards, and the assay results from the samples were plotted on the standard curve. These results were then checked against published data, and in all cases the assay results fell within the range of normal or published data. The intra-assay and inter-assay variation for each of corticosterone, glucose, NEFAs, and lactate was within the acceptable range. These are described under each specific assay.

2.2.2.1. Corticosterone

The total concentration of corticosterone was measured using a commercially available competitive enzyme immunoassay kit purchased from Immunodiagnostic Systems Ltd (IDS Ltd Boldon, Tyne and Wear, UK) as previously described [16]. The intra-assay coefficient of variation was

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2.2. assaysตัวอย่างพลาสม่าและเนื้อเยื่อได้ assayed corticosterone กลูโคส NEFAs และ lactate อินซูลินมี assayed ในพลาสมาเท่านั้น Corticosterone กลูโคส NEFAs และ lactate assays ถูกตรวจสอบสำหรับการใช้ในเนื้อเยื่อ ตัวอย่างถูกเรียกใช้ในคอนเสิร์ตมาตรฐานรู้จักและตัวอย่างพลาสมาที่ได้รับก่อนหน้านี้ assayed เส้นโค้งมาตรฐานถูกผลิตมาจากผลของมาตรฐานรู้จัก และผลการวิเคราะห์จากตัวอย่างถูกลงจุดบนเส้นโค้งมาตรฐาน ผลลัพธ์เหล่านี้ได้แล้วตรวจสอบกับข้อมูลที่เผยแพร่ และในทุกกรณี ผลการวิเคราะห์ตกอยู่ในช่วงปกติ หรือเผยแพร่ข้อมูล ความผันแปรภายในวิเคราะห์และทดสอบระหว่างแต่ละ corticosterone กลูโคส NEFAs และ lactate ภายในช่วงยอมรับได้ เหล่านี้ไว้ภายใต้การวิเคราะห์แต่ละเฉพาะ2.2.2.1 การ corticosteroneความเข้มข้นรวมของ corticosterone ถูกวัดโดยใช้เอนไซม์ใช้ได้ในเชิงพาณิชย์แข่งขัน immunoassay ชุดสั่งซื้อจากระบบ Immunodiagnostic จำกัด (รหัส Ltd Boldon ไทน์ และเครื่องแต่งกาย UK) อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [16] อินทราวิเคราะห์ค่าสัมประสิทธิ์ของการเปลี่ยนแปลงถูก < 4% และวิเคราะห์ระหว่างค่าสัมประสิทธิ์ของความแปรผัน < 8% ตัวอย่าง (30 μL) ถูก assayed สำเนา Cross-reactivity ของทดสอบกับ 11 dehydroxycorticosterone มี 6.60%, 11 deoxycorticosterone 5.93% และโปรเจสเตอโร 1.39% Cross-reactivity นี้นี้ยอมรับขีดจำกัดอธิบายว่า ก่อนหน้านี้ [17]2.2.2.2 น้ำตาลกลูโคสความเข้มข้นกลูโคสถูกกำหนดโดยใช้วิธีเทียบเคียงเอนไซม์ในระบบ (ชุดน้ำตาลกลูโคส วิเคราะห์ซิก St Louis, MO) ที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [18] อินทราวิเคราะห์ค่าสัมประสิทธิ์ของการเปลี่ยนแปลงถูก < 5% ขณะทดสอบระหว่างค่าสัมประสิทธิ์ของความแปรผันยังเป็น < 5% ตัวอย่าง (25 μL) ถูก assayed สำเนา2.2.2.3 การ nonesterified กรดไขมันความเข้มข้นของ NEFA ได้กำหนดใช้ใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ Wako NEFA C Kit (ชุด NEFA C Inc สหรัฐอเมริกาเคมี Wako ดัลลัส เท็กซัส) อธิบายไว้ว่า ก่อนหน้านี้ [19] อินทราวิเคราะห์ค่าสัมประสิทธิ์ของการเปลี่ยนแปลงถูก < 4.7% ขณะทดสอบระหว่างค่าสัมประสิทธิ์ของความแปรผันเป็น < 7.5% ตัวอย่าง (25 μL) ถูก assayed สำเนา2.2.2.4 อินซูลินความเข้มข้นของอินซูลินถูกกำหนด โดยชุดของ PI - 12K Linco ช่วงอินซูลินเรียใช้ได้ในเชิงพาณิชย์ (งานวิจัยของ Linco เซนต์ชาร์ลส์ MO) อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [18] อินทราวิเคราะห์ค่าสัมประสิทธิ์ของการเปลี่ยนแปลงถูก < 10% ขณะทดสอบระหว่างค่าสัมประสิทธิ์ของความแปรผันเป็น < 5% ตัวอย่าง (200 μL) ถูก assayed สำเนา2.2.2.5 การ lactateLactate ที่ assayed ใช้เป็น YSI กลูโคส/Lactate 2300 – วิเคราะห์สถิติ (YSI วิทยาศาสตร์สุขภาพ แฮมเชียร์ สหราชอาณาจักร) ระหว่างทดสอบค่าสัมประสิทธิ์ของความแปรปรวน < 2% และอินทราวิเคราะห์ค่าสัมประสิทธิ์ของความผันแปร < 2% ตัวอย่าง (25 μL) ถูก assayed สำเนา2.2.3 การประเมินผลของการเผาผลาญน้ำตาลกลูโคสAssays เอนไซม์ทั้งหมดยกเว้นที่ระบุไว้ได้ถูกประเมินโดยใช้เครื่องอ่านแผ่น Multiskanner เทอร์โม (วานตา ฟินแลนด์) ที่ 37° C และ assayed ที่ 340 nm ความยาวคลื่น โปรตีน cytosolic ประเมินที่ 37° C และ assayed ที่ 595 nm ความยาวคลื่น Assays ทั้งหมดได้ดำเนินการใช้ 96 NUNC ดีใสแบนด้านล่างแผ่นไมโครด้วยรังสีอัลตราไวโอเลต (Roskilde เดนมาร์ก)2.2.3.1 การ glyceraldehyde-3-ฟอสเฟต dehydrogenaseDehydrogenase glyceraldehyde-3-ฟอสเฟต (G3PDH), (E.C. 1.1.1.8) เป็นเอนไซม์ที่สำคัญใน glycolysis และการเปลี่ยนแปลงในกิจกรรมใช้เพื่อบ่งชี้ว่า ถ้า มีการเปลี่ยนแปลงอัตราการ glycolysis G3PDH รายงานโดย Gamou et al [20] วิธีที่ใช้ประเมินกิจกรรม G3PDH มีการปรับปรุงต่อไปนี้ ส่วนผสมของปฏิกิริยาอยู่ 125 มม. Triethanolamine HCl ที่ pH 7.5, 2.5 mM EDTA ไฮโดรเจน nicotinamide adenine dinucleotide 0.5 mM (NADH), ฟอสเฟต dihydroxyacetone 1.1 มม. และ 0.125 มม.บาท-mercaptoethanol ปฏิกิริยาเอนไซม์ในระบบเริ่มต้น และตรวจสอบ โดยการเกิดออกซิเดชันของ NADH การเปลี่ยนแปลง absorbance ผ่านอย่างน้อย 3 นาทีผ่านเฟสเชิงเส้นได้ถูกประเมินเพื่อคำนวณอัตราเฉลี่ยเอนไซม์ในระบบ กิจกรรมของเอนไซม์ในระบบถูกแสดงเป็นออกซิไดซ์ nM NADH ต่อนาที/มิลลิกรัมโปรตีน cytosolic2.2.3.2 กลูโคส-6-ฟอสเฟต dehydrogenaseกลูโคส-6-ฟอสเฟต dehydrogenase (G6PDH), (E.C. 1.1.1.49) เป็นเอนไซม์ที่สำคัญใน glycogenesis และการเปลี่ยนแปลงในอัตราของกิจกรรมถูกใช้เพื่อระบุการเปลี่ยนแปลงในอัตรา glycogenesis G6PDH ใช้วิธีการรายงาน ด้วยภาษา [21] การประเมิน G6PDH มีการปรับปรุงต่อไปนี้ ส่วนผสมของปฏิกิริยาอยู่ 125 มม.ทริสเรทติ้งบัฟเฟอร์ที่ pH 7.5, 125 mM KCl, 6.25 mM MgCl2, 0.25 mM nicotinamide adenine dinucleotide ฟอสเฟต (NADP), และ 5 มม.กลูโคส-6-ฟอสเฟต เริ่มปฏิกิริยา โดยการเพิ่ม μL 30 ของ 0.05 M กลูโคส-6-ฟอสเฟตกับเสียงสุดท้ายของ 180 μL ปฏิกิริยาเอนไซม์ในระบบเริ่มต้น และตรวจสอบผ่านลดของ NADP การเปลี่ยนแปลง absorbance ผ่านอย่างน้อย 3 นาทีผ่านเฟสเชิงเส้นได้ถูกประเมินเพื่อคำนวณอัตราเฉลี่ยเอนไซม์ในระบบ เอนไซม์ถูกแสดงเป็น nM NADP ลด/นาที/มิลลิกรัมโปรตีน cytosolic2.2.3.3 การ pyruvate carboxylasePyruvate carboxylase (PCx) (E.C. 6.4.1.1) เป็นเอนไซม์ที่สำคัญในการสร้างกลูโคส และการเปลี่ยนแปลงในอัตราของกิจกรรม PCx ถูกใช้เพื่อระบุการเปลี่ยนแปลงในอัตราการสร้างกลูโคส กิจกรรมของ PCx ถูกประเมินด้วยวิธีการอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [22] การปรับปรุงต่อไปนี้ ปฏิกิริยาผสมอยู่ 0.5 M HCl Triethanolamine ที่ pH 7.5, 250 มม. NaHCO3, pyruvate โซเดียมมม. 0.6, 0.8 mM ATP, NADH 0.5 mM ΜL 150 ของตัวอย่างทั้งหมดถูกเพิ่ม 100 μL บัฟเฟอร์ และการเปลี่ยนแปลง absorbance ผ่านอย่างน้อย 3 นาทีผ่านเฟสเชิงเส้นได้ถูกประเมินเพื่อคำนวณอัตราเฉลี่ยเอนไซม์ในระบบ เอนไซม์ถูกแสดงเป็น nM ของ NADH ลด/นาที/มิลลิกรัมโปรตีน cytosolic2.2.3.4 โปรตีนเข้มข้นความเข้มข้นของโปรตีน cytosolic ของ homogenate เนื้อเยื่อถูกประเมินโดยใช้วิธีของ Lowry et al [23] และแบรดฟอร์ด [24] โดย Rad ชีวภาพด่วนเริ่มแบรดฟอร์ดโปรตีนวิเคราะห์ชุด (ห้องปฏิบัติการชีวภาพ Rad มอ ออสเตรเลีย)2.2.4. สถิติวิเคราะห์ผลของการฉีด ACTH หลังเวลาในแต่ละวัดมีการตรวจสอบโดยใช้แบบจำลองเชิงเส้นทั่วไปอย่างไร Univariate (โปรแกรม 18.0 โปรแกรม Inc ชิคาโก IL) ตรวจพบผลเวลา ความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญน้อยที่สุดถูกใช้กำหนดถ้ามาตรการในแต่ละครั้งแตกต่างจากความเข้มข้น preinjection ซึ่งถูกกำหนดเป็นพื้นฐาน P < 0.05 ถือว่ามีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญ นอกจากนี้ ความแตกต่างในรูปแบบของการเปลี่ยนแปลงที่สำคัญจาก preinjection corticosterone ความเข้มข้นในเนื้อเยื่อแต่ละสามารถยังสามารถศึกษาเทียบกับพลาสม่า corticosterone สมาธิ ลดความเบ้ของค่าคงเหลือ วิเคราะห์ ก่อนหลายวัดถูกเปลี่ยนรูปในเชิงลอการิทึมแปลงมีดำเนินการวิเคราะห์การถดถอยในทั้งสองการทดลองเพื่อตรวจสอบความสัมพันธ์ระหว่างความเข้มข้น corticosterone พลาสมาและเนื้อเยื่อ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2.2 การตรวจพลาสม่าและตัวอย่างเนื้อเยื่อถูก assayed สำหรับ corticosterone กลูโคส NEFAs และแลคเตท อินซูลินได้รับการวิเคราะห์ในพลาสมาเท่านั้น corticosterone กลูโคส NEFAs และตรวจแลคเตทได้รับการตรวจสอบสำหรับการใช้งานในเนื้อเยื่อ ตัวอย่างทำงานในคอนเสิร์ตที่มีมาตรฐานเป็นที่รู้จักและตัวอย่างพลาสมาที่ได้รับ assayed ก่อนหน้านี้ เส้นโค้งมาตรฐานผลิตจากผลของมาตรฐานที่รู้จักกันและผลการทดสอบจากตัวอย่างที่ถูกพล็อตบนกราฟมาตรฐาน ผลลัพธ์เหล่านี้ถูกตรวจสอบแล้วกับข้อมูลที่เผยแพร่และในทุกกรณีผลการทดสอบลดลงอยู่ในช่วงของข้อมูลปกติหรือการตีพิมพ์ ภายในการทดสอบและการเปลี่ยนแปลงระหว่างการทดสอบสำหรับแต่ละ corticosterone กลูโคส NEFAs และแลคเตทอยู่ในช่วงที่ยอมรับได้ เหล่านี้จะอธิบายในแต่ละการทดสอบเฉพาะ. 2.2.2.1 corticosterone ความเข้มข้นรวมของ corticosterone วัดโดยใช้ชุด immunoassay เอนไซม์ในการแข่งขันในเชิงพาณิชย์ที่ซื้อมาจาก immunodiagnostic Systems Ltd (IDS จำกัด Boldon ไทน์และสวมสหราชอาณาจักร) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [16] ค่าสัมประสิทธิ์การทดสอบภายในของรูปแบบเป็น <4% และค่าสัมประสิทธิ์ระหว่างการทดสอบของการเปลี่ยนแปลงเป็น <8% กลุ่มตัวอย่าง (30 ไมโครลิตร) ถูก assayed ในที่ซ้ำกัน ปฏิกิริยาข้ามของการทดสอบที่มี 11 dehydroxycorticosterone เป็น 6.60% โดยมี 11 deoxycorticosterone 5.93% และ 1.39% กระเทือน นี้ปฏิกิริยาข้ามต่ำกว่าขีด จำกัด ที่ยอมรับตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [17]. 2.2.2.2 กลูโคสความเข้มข้นของน้ำตาลกลูโคสได้รับการพิจารณาใช้วิธีการสีเอนไซม์ (ชุดกลูโคส; วินิจฉัยซิกเซนต์หลุยส์, มิสซูรี่) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [18] ค่าสัมประสิทธิ์การทดสอบภายในของรูปแบบเป็น <5% ในขณะที่ค่าสัมประสิทธิ์ระหว่างการทดสอบของการเปลี่ยนแปลงก็ยัง <5% กลุ่มตัวอย่าง (25 ไมโครลิตร) ถูก assayed ในที่ซ้ำกัน. 2.2.2.3 กรดไขมัน Nonesterified ความเข้มข้นของ NEFA ถูกกำหนดใช้ในเชิงพาณิชย์ Wako NEFA C ชุด (ชุด NEFA-C; Wako สารเคมีสหรัฐอเมริกา Inc, ดัลลัสเท็กซัส) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [19] ค่าสัมประสิทธิ์การทดสอบภายในของรูปแบบเป็น <4.7% ในขณะที่ค่าสัมประสิทธิ์ระหว่างการทดสอบของการเปลี่ยนแปลงเป็น <7.5% กลุ่มตัวอย่าง (25 ไมโครลิตร) ถูก assayed ในที่ซ้ำกัน. 2.2.2.4 อินซูลินความเข้มข้นของอินซูลินได้รับการพิจารณาโดยใช้ในเชิงพาณิชย์ Linco PI-12K สุกรอินซูลินชุด RIA (Linco วิจัยเซนต์ชาร์ลส์, มิสซูรี่) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [18] ค่าสัมประสิทธิ์การทดสอบภายในของรูปแบบเป็น <10% ในขณะที่ค่าสัมประสิทธิ์ระหว่างการทดสอบของการเปลี่ยนแปลงเป็น <5% กลุ่มตัวอย่าง (200 ไมโครลิตร) ถูก assayed ในที่ซ้ำกัน. 2.2.2.5 นมแลคเตทได้รับการวิเคราะห์โดยใช้ YSI กลูโคส / นมสถิติวิเคราะห์-2300 (YSI ชีวิตวิทยาศาสตร์ Hampshire, UK) ค่าสัมประสิทธิ์ระหว่างการทดสอบของการเปลี่ยนแปลงเป็น <2% และค่าสัมประสิทธิ์การทดสอบภายในของการเปลี่ยนแปลงเป็น <2% กลุ่มตัวอย่าง (25 ไมโครลิตร) ถูก assayed ในที่ซ้ำกัน. 2.2.3 การประเมินผลของการเผาผลาญกลูโคสตรวจเอนไซม์ทั้งหมดยกเว้นที่ระบุไว้เป็นอย่างอื่นได้รับการประเมินโดยใช้เครื่องอ่านแผ่นเทอร์โม Multiskanner (Vantaa, ฟินแลนด์) ที่ 37 องศาเซลเซียสและ assayed ที่ความยาวคลื่น 340 นาโนเมตร โปรตีน cytosolic ถูกประเมินที่ 37 องศาเซลเซียสและ assayed ที่ความยาวคลื่น 595 นาโนเมตร ตรวจทั้งหมดถูกดำเนินการโดยใช้ NUNC 96 ดีชัดเจนอัลตราไวโอเลตด้านล่างแบนแผ่นไมโครดี (กิลด์, เดนมาร์ก). 2.2.3.1 glyceraldehyde-3-ฟอสเฟต dehydrogenase dehydrogenase glyceraldehyde-3-ฟอสเฟต (G3PDH), (EC 1.1.1.8) เป็นเอนไซม์สำคัญใน glycolysis และการเปลี่ยนแปลงในกิจกรรม G3PDH ถูกนำมาใช้เพื่อระบุว่าอัตราการ glycolysis มีการเปลี่ยนแปลง วิธีการรายงานโดย Gamou et al, [20] ถูกใช้ในการประเมินกิจกรรม G3PDH มีการปรับดังต่อไปนี้ ผสมปฏิกิริยาที่มีอยู่ 125 มิลลิ Triethanolamine HCl ที่ pH 7.5, 2.5 มิลลิ EDTA, 0.5 มิลลิ Nicotinamide adenine dinucleotide ไฮโดรเจน (NADH) 1.1 มิลลิ dihydroxyacetone ฟอสเฟตและ 0.125 มิลลิ SS-mercaptoethanol ปฏิกิริยาของเอนไซม์ได้ริเริ่มและตรวจสอบผ่านการเกิดออกซิเดชันของ NADH การเปลี่ยนแปลงที่เกิดขึ้นในการดูดกลืนแสงในช่วงต่ำสุดของ 3 นาทีผ่านขั้นตอนการเชิงเส้นถูกประเมินในการคำนวณอัตราเฉลี่ยของเอนไซม์ เอนไซม์ถูกแสดงเป็น NADH ออกซิไดซ์นาโนเมตรต่อนาที / มก. โปรตีน cytosolic. 2.2.3.2 กลูโคส -6- ฟอสเฟต dehydrogenase dehydrogenase กลูโคส -6- ฟอสเฟต (G6PDH), (EC 1.1.1.49) เป็นเอนไซม์สำคัญในการ glycogenesis และการเปลี่ยนแปลงในอัตราของกิจกรรม G6PDH ที่ถูกนำมาใช้เพื่อแสดงให้เห็นการเปลี่ยนแปลงในอัตรา glycogenesis ที่ วิธีการรายงานโดย Deutsch [21] ถูกใช้ในการประเมิน G6PDH มีการปรับดังต่อไปนี้ ผสมปฏิกิริยาที่มีบัฟเฟอร์ 125 มิลลิทริสที่ pH 7.5, 125 มิลลิ KCl, 6.25 มิลลิ MgCl2, 0.25 มิลลิ Nicotinamide adenine dinucleotide ฟอสเฟต (NADP) และ 5 มิลลิกลูโคส -6- ฟอสเฟต ปฏิกิริยาที่ได้ริเริ่มขึ้นโดยนอกเหนือจาก 30 ไมโครลิตร 0.05 M กลูโคส -6- ฟอสเฟตปริมาณสุดท้ายของ 180 ไมโครลิตร ปฏิกิริยาของเอนไซม์ได้ริเริ่มและตรวจสอบผ่านการลด NADP การเปลี่ยนแปลงที่เกิดขึ้นในการดูดกลืนแสงในช่วงต่ำสุดของ 3 นาทีผ่านขั้นตอนการเชิงเส้นถูกประเมินในการคำนวณอัตราเฉลี่ยของเอนไซม์ กิจกรรมของเอนไซม์ถูกแสดงเป็นนิวตันเมตร NADP ลดลง / นาที / มก. โปรตีน cytosolic. 2.2.3.3 ไพรูคาร์บอกซิคาร์บอกซิไพรู (PCX) (EC 6.4.1.1) เป็นเอนไซม์สำคัญในการ gluconeogenesis และการเปลี่ยนแปลงในอัตราของกิจกรรม PCX ที่ถูกนำมาใช้เพื่อแสดงให้เห็นการเปลี่ยนแปลงในอัตรา gluconeogenesis กิจกรรมของ PCX ที่ได้รับการประเมินโดยใช้วิธีการที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [22] มีการปรับดังต่อไปนี้ ผสมปฏิกิริยาที่มีอยู่ 0.5 M HCl Triethanolamine ที่ pH 7.5, 0.5 มิลลิ NADH 250 มิลลิ NaHCO3, 0.6 มิลลิไพรูโซเดียม 0.8 มิลลิเอทีพี รวม 150 ไมโครลิตรของตัวอย่างถูกบันทึกอยู่ใน 100 ไมโครลิตรของ buffer และการเปลี่ยนแปลงที่เกิดขึ้นในการดูดกลืนแสงในช่วงต่ำสุดของ 3 นาทีผ่านขั้นตอนการเชิงเส้นถูกประเมินในการคำนวณอัตราเฉลี่ยของเอนไซม์ กิจกรรมของเอนไซม์ถูกแสดงเป็นนิวตันเมตร NADH ลดลง / นาที / มก. โปรตีน cytosolic. 2.2.3.4 โปรตีนเข้มข้นของโปรตีนเข้มข้น cytosolic ของ homogenate เนื้อเยื่อถูกประเมินโดยใช้วิธีการของ Lowry et al, [23] และแบรดฟอ [24] โดยใช้ Bio-Rad ด่วนเริ่มต้นชุดทดสอบโปรตีน Bradford (ห้องปฏิบัติการ Bio-Rad, Regents Park, ออสเตรเลีย). 2.2 0.4 การวิเคราะห์ทางสถิติผลของการฉีดโพสต์ ACTH เวลาในแต่ละมาตรการมีการตรวจสอบโดยใช้แบบ univariate เชิงเส้นรุ่นทั่วไป (SPSS 18.0, SPSS Inc, Chicago, IL) ผลกระทบในกรณีที่ตรวจพบเวลาอย่างน้อยแตกต่างกันอย่างมีนัยสำคัญถูกนำมาใช้เพื่อตรวจสอบว่ามาตรการในแต่ละช่วงเวลาที่แตกต่างกันจากความเข้มข้น preinjection ซึ่งได้รับการกำหนดให้เป็นพื้นฐาน P <0.05 ก็จะถือว่าเป็นความแตกต่าง นอกจากนี้ความแตกต่างในรูปแบบการเปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญจากความเข้มข้น preinjection corticosterone สำหรับแต่ละเนื้อเยื่ออาจจะมีการศึกษามีความสัมพันธ์กับความเข้มข้น corticosterone พลาสม่า เพื่อลดเบ้ของที่เหลือก่อนที่จะวิเคราะห์การวัดหลายคนเปลี่ยนลอการิทึม. การวิเคราะห์การถดถอยได้ดำเนินการในการทดลองทั้งในการตรวจสอบความสัมพันธ์ระหว่างพลาสม่าและเนื้อเยื่อความเข้มข้น corticosterone

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2.2 . )

พลาสมาและเนื้อเยื่อตัวอย่างซีรั่มสำหรับคอร์ติโคสเตอโรน กลูโคส เนฟาส และแลคเตท . คือปริมาณอินซูลินในพลาสมาเท่านั้น คอร์ติโคสเตอโรน กลูโคส เนฟาส และแลคเตท ) กำลังตรวจสอบเพื่อใช้ในเนื้อเยื่อ กลุ่มตัวอย่างที่ใช้ในคอนเสิร์ตกับรู้จักมาตรฐานและตัวอย่างพลาสมาที่ได้รับก่อนหน้านี้ ml . เส้นโค้งมาตรฐานที่ผลิตจากผลรู้จักมาตรฐานและวิเคราะห์ผลจากจำนวนจุดบนเส้นโค้งมาตรฐาน ผลลัพธ์เหล่านี้แล้วตรวจสอบกับการเผยแพร่ข้อมูล และในทุกกรณีวิเคราะห์ผลลดลงในช่วงปกติ หรือเผยแพร่ข้อมูล ภายในระหว่างการทดสอบในรูปแบบสำหรับแต่ละของคอร์ติโคสเตอโรน กลูโคส เนฟาส และ และภายในช่วงที่ยอมรับได้ เหล่านี้จะอธิบายในแต่ละการทดสอบที่เฉพาะเจาะจง .

22.2.1 . คอร์ติโคสเตอโรน

ความเข้มข้นรวมของคอร์ติโคสเตอโรนถูกวัดโดยใช้เอนไซม์ที่มีการแข่งขันที่ใช้ในเชิงพาณิชย์ชุดซื้อจากระบบ IDS boldon immunodiagnostic กัดกัด , ไทน์และสวม , UK ) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [ 16 ] ภายในการทดสอบสัมประสิทธิ์ของการแปรผันเป็น < 4 % และระหว่างการทดสอบสัมประสิทธิ์ของการแปรผันเป็น < 8 %ตัวอย่าง ( 30 μ L ) เป็นเอนไซม์ในที่ซ้ำกัน ข้ามการ ( 11 dehydroxycorticosterone คือ 6.60 บาท กับ 11 อาถรรพเวท 5.93 ล้านบาท และโปรเจสเตอโรน 1.39 % นี้ขอประทานด้านล่างตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ที่ยอมรับได้ [ 17 ] .

2.2.2.2 . กลูโคส กลูโคสความเข้มข้น

ถูกกำหนดโดยใช้เอนไซม์กลูโคส Colorimetric method ( ชุด ; Sigma การวินิจฉัยเซนต์ หลุยส์ โม ) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [ 18 ] ภายในการทดสอบสัมประสิทธิ์ของการแปรผันเป็น < 5 เปอร์เซ็นต์ และระหว่างการทดสอบค่าสัมประสิทธิ์ความแปรผันยัง < 5 % ตัวอย่าง ( 25 μ L ) เป็นเอนไซม์ในซ้ำ

2.2.2.3 . กรดไขมันอิสระ

ส่วน nefa ถูกใช้ในเชิงพาณิชย์ Wako nefa C ชุด ( ชุด nefa-c ; Wako เคมีสหรัฐอเมริกา Inc , ดัลลัสTX ) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [ 19 ] ภายในการทดสอบสัมประสิทธิ์ของการแปรผันเป็น < 4.7 เปอร์เซ็นต์ และระหว่างการทดสอบสัมประสิทธิ์ของการแปรผันเป็น < 7.5 % ตัวอย่าง ( 25 μ L ) เป็นเอนไซม์ในพื้นที่ซ้ำ

. อินซูลินอินซูลินเข้มข้น

ซึ่งใช้ในเชิงพาณิชย์ linco pi-12k จากอินซูลินเรีย Kit ( linco การวิจัย เซนต์ชาร์ลส์ โม ) ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [ 18 ]ภายในการทดสอบสัมประสิทธิ์ของการแปรผันคือ < 10 % ในขณะที่ อินเตอร์ วิเคราะห์สัมประสิทธิ์ของการแปรผันเป็น < 5 % ตัวอย่าง ( 200 μ L ) เป็นเอนไซม์ในซ้ำ

2.2.2.5 . แลค

และปริมาณการใช้ ysi กลูโคส / แลควิเคราะห์– 2300 stat ( ysi ชีวิตวิทยาศาสตร์ , Hampshire , UK ) ระหว่างการทดสอบสัมประสิทธิ์ของการแปรผันเป็น < 2% และอัฟกานิสถานสัมประสิทธิ์ของการแปรผันเป็น < 2%ตัวอย่าง ( 25 μ L ) เป็นเอนไซม์ในซ้ำ

2.2.3 . การประเมิน

) เอนไซม์กลูโคสการเผาผลาญอาหารทั้งหมดยกเว้นที่ระบุไว้เป็นอย่างอื่น ได้แก่ การใช้เทอร์โม multiskanner จานอ่าน ( วันทา , ฟินแลนด์ ) ที่อุณหภูมิ 37 องศา C และเอนไซม์ที่ 340 nm ความยาวคลื่น cytosolic โปรตีนที่ 37 ° C และประเมินปริมาณที่ 595 nm ความยาวคลื่นสามารถใช้ ขณะนี้จำนวน 96 ดีล้างก้นแบนไมโครดีรังสีอัลตราไวโอเลตแผ่น ( Roskilde , เดนมาร์ก )

2.2.3.1 . glyceraldehyde-3-phosphate เนส

glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase ( g3pdh ) , ( อีซี 1.1.1.8 ) เป็นเอนไซม์ที่สำคัญในไกลโคไลซิส และเปลี่ยนแปลงกิจกรรม g3pdh ถูกใช้เพื่อบ่งชี้ว่าอัตราการไกลโคลิซิสที่เปลี่ยนไปวิธีรายงานโดย กาโม่ et al [ 20 ] ประเมินผลกิจกรรม g3pdh กับการปรับเปลี่ยนดังต่อไปนี้ ปฏิกิริยาผสมบรรจุ 125 มม. ไตรเ ทาโนลามีน HCl ที่ pH 7.5 , 2.5 mM EDTA , 0.5 มิลลิเมตร พยุหยาตรา ไฮโดรเจน ( แอมโมเนีย ) 1.1 มม. กระฎุมพีบนหอคอยฟอสเฟต และ 0.125 มม. ß - mercaptoethanol . ปฏิกิริยาของเอนไซม์ที่ถูกริเริ่มและการตรวจสอบผ่านการออกซิเดชันของ NADH .ผลเปลี่ยนแปลงในการดูดกลืนแสงมากกว่าอย่างน้อย 3 นาทีผ่านเฟสเชิงประเมิน เพื่อคำนวณอัตราเฉลี่ยเอนไซม์ . เอนไซม์จะแสดงเป็น nm การออกซิไดซ์ต่อนาที / มิลลิกรัมโปรตีน cytosolic

2.2.3.2 . glucose-6-phosphate เนส

glucose-6-phosphate dehydrogenase ( g6pdh ) , ( อีซี 1.1.1.49 ) เป็นเอนไซม์สำคัญในการสร้างไกลโคเจน ,และการเปลี่ยนแปลงในอัตราของกิจกรรม g6pdh ถูกใช้เพื่อบ่งชี้ถึงการเปลี่ยนแปลงในอัตราของไกลโคเจน . วิธีการรายงานโดยใช้ภาษาเยอรมัน [ 21 ] ถูกใช้เพื่อประเมิน g6pdh กับการปรับเปลี่ยนดังต่อไปนี้ ปฏิกิริยาผสมบรรจุ 125 มม. นอกจากนี้ บัฟเฟอร์ พีเอช 7.5 , . 125 มม. , MgCl2 6.25 มม. 0.25 มม. ปูใบ้ ( nadp ) และ glucose-6-phosphate 5 มิลปฏิกิริยาที่ถูกริเริ่มโดยเพิ่ม 30 μ L 0.05 M glucose-6-phosphate เป็นเล่มสุดท้ายของ 180 μ . เอนไซม์ปฏิกิริยาเริ่มต้นและการตรวจสอบผ่านการ nadp . ผลเปลี่ยนแปลงในการดูดกลืนแสงมากกว่าอย่างน้อย 3 นาทีผ่านเฟสเชิงประเมิน เพื่อคำนวณอัตราเฉลี่ยเอนไซม์ .กิจกรรมของเอนไซม์จะแสดงเป็น nm ของ nadp ลดลง / นาทีต่อมิลลิกรัมโปรตีน cytosolic

2.2.3.3 . ไพรูเวทคาร์บอกซีเลส

ไพรูเวทคาร์บอกซีเลส ( PCX ) ( อีซี 6.4.1.1 ) เป็นเอนไซม์ในการสร้างกลูโคส และการเปลี่ยนแปลงในอัตราของกิจกรรม PCX ถูกใช้เพื่อระบุการเปลี่ยนแปลงในอัตราของการสร้างกลูโคส . กิจกรรมของ PCX ถูกประเมินโดยใช้วิธีอธิบาย [ 22 ] ก่อนหน้านี้ กับการปรับเปลี่ยนดังต่อไปนี้ปฏิกิริยาผสมอยู่ 0.5 M HCl ไตรเ ทาโนลามีนที่ pH 7.5 , แอมโมเนีย 0.5 มม. 250 มิลลิเมตรโซเดียมไบคาร์บอเนต , โซเดียมไพรูเวท 0.6 mm , เอทีพี 0.8 มิลลิเมตร รวม 150 μ l ตัวอย่างเพิ่ม 100 μ L ของบัฟเฟอร์ และผลเปลี่ยนแปลงในการดูดกลืนแสงมากกว่าอย่างน้อย 3 นาทีผ่านเฟสเชิงประเมิน เพื่อคำนวณอัตราเฉลี่ยเอนไซม์ .กิจกรรมของเอนไซม์จะแสดงเป็น nm ของ NADH / นาทีต่อมิลลิกรัมโปรตีน ลด cytosolic

2.2.3.4 . โปรตีน

cytosolic โปรตีนของเนื้อเยื่ออนถูกประเมินโดยใช้วิธีโลว์รี et al [ 23 ] และแบรดฟอร์ด [ 24 ] โดยการใช้ไบโอ ราดเร็วเริ่มใช้ Kit ( ไบโอโปรตีนแบรดฟอร์ด rad laboratories Regents Park , ออสเตรเลีย )

2.2.4 .

ทางสถิติการวิเคราะห์ผลของเวลาหลังการฉีด ACTH ในแต่ละวัด มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาการใช้รูปแบบการสัมภาษณ์เชิงเส้นทั่วไป ( 18.0 SPSS SPSS Inc , ชิคาโก , อิลลินอยส์ ) ที่เวลา ผลตรวจพบความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญทางสถิติอย่างน้อยใช้ตรวจสอบว่ามาตรการที่แต่ละเวลาที่แตกต่างกันจากความเข้มข้น preinjection ซึ่งถูกกำหนดเป็นค่าพื้นฐาน p < 0.05 คือ ถือว่ามีความแตกต่างกัน นอกจากนี้ความแตกต่างในรูปแบบในการเปลี่ยนแปลงจาก preinjection คอร์ติโคสเตอโรนปริมาณแต่ละเนื้อเยื่ออาจจะศึกษาให้สัมพันธ์กับปริมาณคอร์ติโคสเตอโรน พลาสมา เพื่อลดความความคลาดเคลื่อนก่อนการวิเคราะห์การวัดหลายถูกเปลี่ยน logarithmically .

การวิเคราะห์การถดถอยมีวัตถุประสงค์ทั้งในการทดลอง เพื่อศึกษาความสัมพันธ์ระหว่างพลาสมาและเนื้อเยื่อ
คอร์ติโคสเตอโรนเข้มข้น