MethodsTissue PreparationFigure 4 o

Methods
Tissue Preparation
Figure 4 outlines the tissue preparation, particle addition and isolation, and sample cleanup. Briefly, whole lungs and livers were collected post-mortem from male Sprague-Dawley rats in accordance with an IACUC-approved protocol and snap frozen in liquid nitrogen. The tissue was then ground with a mortar and pestle in liquid nitrogen. The powdered tissue was suspended in 3 ml per gram of tissue of a low-salt buffer (20 mM HEPES, pH 7.9, 25% glycerol, 1.5 mM MgCl2,
0.02 M KCl, 0.2 mM EDTA, 0.2 mM phenylmethylsulfonyl fluoride, and 0.5
mM dithiolthreitol). The tissue was further processed by homogenization using a
PRO200 series portable homogenizer (ISC BioExpress, Kaysville, UT) at 30,000
rpm until there were no visible chunks and then transferred to a motor-driven
Teflon-glass homogenizer (Potter-Elvehjem), (Fisher Scientific) and run at 900rpm for 2 full passes to ensure the tissue was
thoroughly homogenized.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิธีการการเตรียมเนื้อเยื่อรูปที่ 4 แสดงการเตรียมเนื้อเยื่อ อนุภาคนี้ และแยก และการล้างข้อมูลตัวอย่าง สั้น ๆ ทั้งปอดและ livers ได้ประกาศรวบรวมพ้นจากชาย Sprague Dawley หนูที่อนุมัติ IACUC โพรโทคอลและแช่แข็งในไนโตรเจนเหลวสแนป เนื้อเยื่อได้แล้วพื้นดินที่ มีการโกร่งในไนโตรเจนเหลว เนื้อเยื่อผงถูกหยุดชั่วคราวใน 3 มล.ต่อกรัมของเนื้อเยื่อของบัฟเฟอร์เกลือต่ำ (20 มม. HEPES, 7.9, pH 25% กลีเซอร MgCl2, 1.5 มม.0.02 M KCl, 0.2 mM EDTA ฟลูออไรด์ 0.2 mM phenylmethylsulfonyl และ 0.5มม. dithiolthreitol) เนื้อเยื่อมีการประมวลผลเพิ่มเติมโดย homogenizationPRO200 ชุดพกพา homogenizer (ISC BioExpress, Kaysville, UT) ที่ 30000รอบต่อนาทีจนถึงมีก้อนไม่สามารถมองเห็นได้แล้ว โอนย้ายไปที่มอเตอร์ขับเคลื่อนแก้วเทฟลอน homogenizer (พอตเตอร์-Elvehjem), (Fisher วิทยาศาสตร์) และเรียกใช้ที่ 900 rpm 2 เต็มผ่านให้เนื้อเยื่อถูก อย่าง homogenized เป็นกลุ่ม

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีเนื้อเยื่อเตรียมรูปที่4 แสดงการเตรียมเนื้อเยื่อนอกจากนี้อนุภาคและการแยกและการทำความสะอาดตัวอย่าง สั้น ๆ , ปอดและตับทั้งที่ถูกเก็บรวบรวมชันสูตรศพจากหนูเพศปราก-Dawley สอดคล้องกับโปรโตคอล IACUC ได้รับการอนุมัติและสแน็ปแช่แข็งในไนโตรเจนเหลว เนื้อเยื่อแล้วพื้นดินที่มีโกร่งบดยาในไนโตรเจนเหลว เนื้อเยื่อผงถูกระงับใน 3 มล. ต่อกรัมของเนื้อเยื่อของบัฟเฟอร์เกลือต่ำ (20 มิลลิ HEPES พีเอช 7.9, กลีเซอรีน 25%, 1.5 มิลลิ MgCl2, 0.02 M KCl 0.2 มิลลิ EDTA, 0.2 มิลลิฟลูออไร phenylmethylsulfonyl และ 0.5 มิลลิ dithiolthreitol) เนื้อเยื่อได้รับการดำเนินการต่อไปโดยการทำให้เป็นเนื้อเดียวกันโดยใช้homogenizer ชุด PRO200 แบบพกพา (ISC BioExpress, Kaysville, ยูทาห์) ที่ 30,000 รอบต่อนาทีจนไม่มีชิ้นที่มองเห็นและจากนั้นก็ย้ายไปยังมอเตอร์ขับเคลื่อนเทฟลอนแก้วโฮโมจีไน (พอตเตอร์ Elvehjem), (ฟิชเชอร์ วิทยาศาสตร์) และเรียกใช้ที่ 900rpm สำหรับ 2 ผ่านเต็มรูปแบบเพื่อให้แน่ใจว่าเนื้อเยื่อที่ถูกปั่นให้ละเอียด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วิธีการเตรียม

เนื้อเยื่อรูปที่ 4 สรุปการเตรียมเนื้อเยื่อเพิ่มอนุภาคและการแยก และ ตัวอย่าง การทำความสะอาด สั้น ๆ , การเก็บรวบรวมทั้งหมดและตับปอดการชันสูตรศพจากชายหนู Sprague ต่อการสอดคล้องกับการ iacuc อนุมัติโปรโตคอลและ snap แช่แข็งในไนโตรเจนเหลว เนื้อเยื่อที่ถูกบดด้วยครกและสากในไนโตรเจนเหลวเนื้อผงแขวนลอยใน 3 มิลลิลิตร / กรัมเนื้อเยื่อของบัฟเฟอร์เกลือต่ำ ( 20 มิลฮีเปส , pH 9 , 25 , กลีเซอรอล , 1.5 มม. ชุด
0.02 M KCl , 0.5 mM EDTA 0.2 มิลลิ phenylmethylsulfonyl ฟลูออไรด์และ 0.5
อืม dithiolthreitol ) เนื้อเยื่อที่ถูกเพิ่มเติมประมวลผลโดยการใช้
pro200 ชุดพกพาโฮโมจิไนซ์ ( ISC bioexpress kaysville , UT , ,
)รอบต่อนาทีจนไม่มีปรากฏให้เห็นอย่างชัดเจน และโอนให้กับมอเตอร์ขับเคลื่อน
เทฟลอนแก้ว Homogenizer ( พอตเตอร์ elvehjem ) , ( ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ ) และเรียก 900rpm 2 เต็มรูปแบบผ่านไปเพื่อให้แน่ใจว่าเนื้อเยื่อที่เป็นโฮโม

อย่างละเอียด .