Sequencing of PCR products from clo

Sequencing of PCR products from cloned inserts. Insert sequences were amplified by PCR, applying a denaturation step of 5 min at 95°C followed by 30 cycles of 30 s at 95°C, 1 min of annealing at 50°C, and 2 min of extension at 72°C.
The PCR mixtures (50 ml) contained 13 reaction buffer (Gibco, BRL); 200 mM(each) dATP, dCTP, dGTP, and dTTP; 0.15 mM (each) primers M13for and M13rev; 2.5 U of Taq DNA polymerase (Gibco, BRL); and 1 ml of supernatant
obtained after lysis of transformants. PCR products were purified with the NucleoTraPCR kit (Macheroy-Nagel) according to the manufacturer’s instructions and used as a template in sequencing reactions. DNA sequencing was performed with an ABI 373A automated DNA sequencer (PE Applied Biosystems,Inc., Foster City, Calif.) and the ABI PRISM Big Dye terminator cycle sequencing kit (Perkin-Elmer).

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ลำดับของผลิตภัณฑ์ PCR จากโคลนแทรก ใส่ลำดับถูกขยายโดยวิธี PCR ใช้ขั้นตอน denaturation 5 นาทีที่ 95 ° C ตามด้วย 30 รอบของ 30 วินาทีที่ 95 องศาเซลเซียส 1 นาทีของการอบที่ 50 องศาเซลเซียสและ 2 นาทีของการขยายที่ 72 ° C.
ผสม PCR (50 มล.) ที่มี 13 บัฟเฟอร์ปฏิกิริยา (Gibco, BRL); 200 มิลลิ (แต่ละคน) dATP, dCTP, dGTP และ dTTP; 0.15 มิลลิ (แต่ละคน) และไพรเมอร์ M13for M13rev; 2.5 U ของดีเอ็นเอโพลิเมอร์ Taq (Gibco, BRL); 1
มิลลิลิตรใสได้รับหลังจากการสลายของtransformants ผลิตภัณฑ์ PCR บริสุทธิ์กับชุด NucleoTraPCR (Macheroy-แจคกี้) ตามคำแนะนำของผู้ผลิตและนำมาใช้เป็นแม่แบบในการเกิดปฏิกิริยาลำดับ ลำดับดีเอ็นเอที่ได้ดำเนินการที่มีซีเควนดีเอ็นเอ ABI 373A อัตโนมัติ (PE Applied Biosystems, Inc., ฟอสเตอร์ซิตี้รัฐแคลิฟอร์เนีย.) และวงจรบิ๊ก ABI PRISM ย้อมชุดเทอร์มิลำดับ (เพอร์กินเอลเมอ)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ลำดับของผลิตภัณฑ์ PCR จากโคลนแทรก ใส่ลำดับถูกขยายโดยวิธี PCR ที่ใช้ ( ขั้น 5 นาทีที่ 95 องศา C ตามด้วย 30 รอบ 30 s ที่ 95 องศา C , 1 นาที อบอ่อนที่อุณหภูมิ 50 องศา C และ 2 นาทีที่ 72 ° C )
( 50 ml ) โดยผสมมีปฏิกิริยาบัฟเฟอร์ ( gibco BRL 13 , ) ; 200 มม. ( แต่ละ ) datp dctp dgtp , , , และ dttp ; 0.15 มม. ( แต่ละคน ) และไพรเมอร์ m13for m13rev ; 2 .5 U ของดีเอ็นเอพอลิเมอเรส ทัค ( gibco BRL , ) ; และ 1 มิลลิลิตร นำ
ที่ได้รับหลังจากการสลายของพลาสมิด . ผลิตภัณฑ์ทั้งหมดจะถูกแยกกับ nucleotrapcr Kit ( macheroy เนเกิล ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิตและใช้เป็นแม่แบบในปฏิกิริยาของ การจัดลำดับดีเอ็นเอได้ด้วยอบิ 373a ลำดับ DNA แบบอัตโนมัติ ( PE APPLIED BIOSYSTEMS ( Foster City .) และ ABI ปริซึมย้อมรอบใหญ่ ( เพอร์กินเอลเมอร์ลำดับชุด Terminator )