Total plant RNA from PRSV BR infect

Total plant RNA from PRSV BR infected papaya
plants was extracted as described by Napoli et al. (1990).
The reverse transcription was done under the following
conditions: 1-2 µg of total RNA, 200 ng of 3’-end primer,
200 ng of each dNTP , 10 mM DTT, 80 units of RNAsin,
360 mM of 2-mercaptoethanol, 1X RT buffer, and 400 units
of M-MLV RT (Maloney Murine Leukemia virus) (Promega,
Madison, WI). Initially , a 15-µl aliquot containing only the
total RNA and the 3’-end primer was heated at 70 °C for 5
min, and cooled on ice for 2 min. Then, a 35-µl aliquot
containing the other reaction components was added and
incubated for 90 min at 37 °C. Incubating at 70 °C for 5
min stopped the reaction

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

รวมพืช RNA จาก PRSV BR ติดไวรัสมะละกอพืชที่ถูกแยกไว้โดย Napoli et al. (1990)ทำการถอดรหัสย้อนกลับใต้ต่อไปนี้เงื่อนไข: 1-2 µg ของ RNA ทั้งหมด 200 ฉบับพื้นปลาย 3'200 ฉบับของแต่ละ dNTP, 10 มม. DTT, RNAsin, 80 หน่วย2-mercaptoethanol, 1 X RT บัฟเฟอร์ และ 400 360 มม.ของ M MLV RT (ไวรัสโรค Murine Maloney) (Promegaเมดิสัน WI) เริ่มแรก การ 15 µl ส่วนลงตัวที่ประกอบด้วยเพียงการรวม RNA และไพรเมอร์ 3' สิ้นสุดถูกความร้อน 70 ° c สำหรับ 5นาที และน้ำแข็งเย็นบน 2 นาที จากนั้น เป็นส่วนลงตัว 35 µlส่วนปฏิกิริยาอื่น ๆ ที่ประกอบด้วยเพิ่ม และรับการกก 90 นาทีที่ 37 องศาเซลเซียส Incubating 70 ° c สำหรับ 5นาทีหยุดปฏิกิริยา

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

อาร์เอ็นเอของพืชรวมจากโรคใบด่าง BR มะละกอติดเชื้อ
พืชถูกสกัดตามที่อธิบายไว้โดยนาโปลี, et al (1990).
ถอดความย้อนกลับได้รับการกระทำภายใต้การดังต่อไปนี้
เงื่อนไข: 1-2 ไมโครกรัมของ RNA รวม 200 NG ของไพรเมอร์ 3'-end
200 NG ของแต่ละ dNTP 10 มิลลิ DTT 80 หน่วย RNAsin,
360 มม 2 -mercaptoethanol, 1X RT บัฟเฟอร์และ 400 หน่วย
M-MLV RT (มาโลนีหนูไวรัสมะเร็งเม็ดเลือดขาว) (Promega,
Madison, WI) ในขั้นต้นหาร 15 ไมโครลิตรมีเพียง
RNA รวมและไพรเมอร์ 3'-end ที่ถูกความร้อนที่อุณหภูมิ 70 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5
นาทีและระบายความร้อนบนน้ำแข็งเป็นเวลา 2 นาที จากนั้นหาร 35 ไมโครลิตร
ที่มีส่วนประกอบปฏิกิริยาอื่น ๆ ได้รับการเพิ่มและ
บ่มเป็นเวลา 90 นาทีที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส บ่มที่อุณหภูมิ 70 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5
นาทีหยุดปฏิกิริยา

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

RNA พืชทั้งหมดจากงาน BR ติดเชื้อ มะละกอพืชสกัด ตามที่อธิบายไว้โดยนาโปลี et al . ( 1990 )ย้อนกลับขั้นตอนกระทำภายใต้ ดังต่อไปนี้เงื่อนไข : 1-2 µกรัมของ RNA ทั้งหมด 200 นาโน 3 " - จบก่อน ,200 นาโนของแต่ละ dntp DTT , 10 mm rnasin 80 หน่วย ,360 มม. อย่างเดียว , 1x RT บัฟเฟอร์และ 400 หน่วยของ m-mlv RT ( ลูคีเมียไวรัส มาโลนีย์ ~ ( promega ) ,Madison , WI ) เริ่ม 15 - µ L ส่วนลงตัวที่มีเพียงทั้งหมดนี้และ 3 " - จบที่ 70 องศา C ใช้ให้ความร้อนที่ 5มิน และระบายความร้อนด้วยน้ำแข็ง 2 นาทีแล้ว 35 - µ L ส่วนลงตัวที่มีส่วนประกอบอื่น ๆคือการเพิ่มและปฏิกิริยาบ่มเป็นเวลา 90 นาทีที่ 37 องศา ไข่ที่ 70 องศา C 5มินหยุดปฏิกิริยา