2.5. Intracellular cytokine stainin

2.5. Intracellular cytokine staining
Intracellular levels of TNF- was analyzed by flow cytometry as described previously (Suni et al., 1998). Briefly, RAW 264.7 cells (2×106 cells/well) were stimulated with LPS (1ug/ml) for 8 h and 1 ug/ml brefeldin A (Sigma) was added 10 h before the end of culture. Cells were incubated with phycoerythrin (PE)-labeled antiTNF- (BD Pharmingen, USA; 559503) antibody for intracellular molecular detection. Control histograms were made by staining with the relevant isotype control antibody. After staining in the dark at 4◦ C for 30 min, cells were washed and resuspended in PBS, and at least 10,000 events were analyzed using EPICS XLTM and EXPO32TM software (Beckman Coulter, CA, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.5 ย้อมสีอย่างไร cytokine intracellularระดับ intracellular TNF-ถูกวิเคราะห์ โดยเซลล์ flow อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (สุนีย์ et al., 1998) Briefly, RAW 264.7 เซลล์ (2 × 106 เซลล์/ดี) ถูกถูกกระตุ้น ด้วย LPS (1ug/มล) 8 h และ brefeldin ยู จี/ml 1 (ซิกมา) เพิ่ม h 10 ก่อนสิ้นวัฒนธรรม เซลล์ถูก incubated กับ phycoerythrin (PE) -ป้าย antiTNF - (BD Pharmingen สหรัฐอเมริกา 559503) แอนติบอดีตรวจ intracellular โมเลกุล ฮิสโตแกรมควบคุมเกิดจากการย้อมสีด้วยแอนติบอดีควบคุม isotype ที่เกี่ยวข้อง หลังจากย้อมสีในมืดที่ C 4◦ สำหรับ 30 นาที เซลล์ถูกล้าง และ resuspended ใน PBS แล้วเหตุการณ์น้อย 10000 ได้วิเคราะห์โดยใช้ซอฟต์แวร์ EPICS XLTM และ EXPO32TM (Beckman Coulter, CA, USA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.5 การย้อมสีเซลล์ไซโตไคน์
ระดับภายในเซลล์ของ TNF- ได้รับการวิเคราะห์โดยชั้นโอ๊ยภูมิคุ้มกันตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (สุนีย์ et al., 1998) Brie ชั้น y, RAW 264.7 เซลล์ (2 × 106 เซลล์ / ดี) ได้รับการกระตุ้นด้วย LPS (1UG / ml) เป็นเวลา 8 ชั่วโมงและ 1 ไมโครกรัม / มล brefeldin (Sigma) ถูกเพิ่มเข้ามา 10 ชั่วโมงก่อนที่จะสิ้นสุดของวัฒนธรรม เซลล์ที่ถูกบ่มกับ phycoerythrin (PE) -labeled antiTNF- (BD PharMingen สหรัฐอเมริกา; 559503) สำหรับการตรวจหาแอนติบอดีโมเลกุลภายในเซลล์ histograms ควบคุมที่ถูกสร้างขึ้นโดยการย้อมสีที่มีแอนติบอดีควบคุม isotype ที่เกี่ยวข้อง หลังจากการย้อมสีในที่มืดที่4◦ C เป็นเวลา 30 นาทีเซลล์ถูกล้างและ resuspended ในพีบีเอสและอย่างน้อย 10,000 เหตุการณ์ถูกวิเคราะห์โดยใช้มหากาพย์ xltm และซอฟต์แวร์ EXPO32TM (Beckman Coulter, CA, USA)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.5 การย้อมเซลล์ไซโตไคน์
ระดับของ TNF - วิเคราะห์โดยflโอ๊ย ( ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( นี et al . , 1998 ) บรี fl Y , ดิบ 264.7 เซลล์ ( 2 × 106 เซลล์ / ดี ) ถูกกระตุ้นด้วยสเปรย์หล่อลื่น ( 1ug / ml ) 8 H และ 1 ไมโครกรัมต่อมิลลิลิตร brefeldin ( Sigma ) เพิ่ม 10 ชั่วโมงก่อนการสิ้นสุดของวัฒนธรรม เซลล์มีแยกไฟโคอิริทริท ( PE ) - ป้าย antitnf - ( BD pharmingen สหรัฐอเมริกา ;559503 ) แอนติบอดีเพื่อตรวจหาโมเลกุลภายในเซลล์ . ฮิสโตแกรมควบคุมได้โดยการย้อมด้วยแอนติบอดีควบคุมและที่เกี่ยวข้อง หลัง จากที่มืดที่อุณหภูมิ 4 ◦ C นาน 30 นาที เซลล์ถูกล้างและ resuspended ใน PBS , และอย่างน้อย 10 , 000 กิจกรรม วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้ xltm expo32tm มหากาพย์และซอฟต์แวร์ ( Beckman Coulter , CA , USA ) .