MATERIALS AND METHODSPlants and vir

MATERIALS AND METHODS
Plants and virus and insect cultures. Twenty-day-old seedlings
of wild and domesticated tomato, grown in a nursery, were
planted in 0.5-liter pots and kept in an insect-proof nethouse. B.
tabaci of the B biotype (3) were maintained on eggplants (Solanum
melongena cv. Classic) and on cotton (Gossypium hirsutum
cv. Akkala) in insect-proof cages held at 26°C in an insect-proof
growth chamber. Virus isolates were maintained in tomato plants
(L. esculentum cv. Daniela) and propagated by whitefly-mediated
transmission.
Whitefly-mediated inoculation. Insects that acquired TYLCV
during a 48-h acquisition feeding on infected tomato plants were
used for inoculation. An inoculation routine was used to avoid
escape (20). Twenty-day-old seedlings were inoculated in the greenhouse
by caging viruliferous whiteflies for 5 days, 10 to 20 insects
per plant. Fourteen days thereafter, the plants were tested for the
presence of viral DNA by squash blot hybridization (described below).
Plants without detectable viral DNA were individually caged
with 20 to 40 viruliferous insects for an additional 48-h inoculation
period. All plants were then planted in an infested field. The
presence of viral DNA was assayed up to 130 days later, using
squashes of two to four apices for each plant. Symptoms were
monitored for this entire period.
Detection of TYLCV DNA. Approximately 1 cm2
of tissue from
the shoot apex was squashed on a nylon membrane (Hybond N;
Amersham Corp., Arlington Heights, IL) and hybridized (14) with
the radiolabeled plasmid pTYH20.7 bearing tandemly repeated
copies of the cloned genome of a TYLCV isolate from Israel (15).
Viral DNA was also detected by Southern blot analysis (1) and by polymerase chain reaction (PCR) (16)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วัสดุและวิธีพืชและไวรัสและวัฒนธรรมแมลง ต้นกล้ายี่สิบวันเก่าของมะเขือเทศป่าและบ้านที่ปลูกในเรือนเพาะชำที่ได้รับการปลูกในกระถาง0.5 ลิตรและเก็บไว้ใน nethouse แมลงหลักฐาน บีtabaci ของ B biotype (3) ได้รับการดูแลในมะเขือ (Solanum melongena พันธุ์. คลาสสิก) และฝ้าย (Gossypium hirsutum พันธุ์. Akkala) ในกระชังแมลงหลักฐานที่จัดขึ้นที่ 26 องศาเซลเซียสในแมลงหลักฐานห้องการเจริญเติบโต สายพันธุ์ไวรัสที่ถูกเก็บรักษาไว้ในมะเขือเทศ(แอล esculentum พันธุ์. Daniela) และแพร่กระจายโดยแมลงหวี่ขาวพึ่งการส่ง. ฉีดวัคซีนแมลงหวี่ขาวพึ่ง แมลงที่ได้มา TYLCV ระหว่างการเข้าซื้อกิจการ 48 ชั่วโมงกินมะเขือเทศที่ติดเชื้อถูกใช้สำหรับการฉีดวัคซีน ประจำการฉีดวัคซีนถูกใช้เพื่อหลีกเลี่ยงการหลบหนี (20) ต้นกล้ายี่สิบวันเก่าถูกเชื้อในเรือนกระจกโดย caging whiteflies viruliferous เป็นเวลา 5 วัน, 10 ถึง 20 แมลงต่อต้น สิบสี่วันหลังจากนั้นพืชได้มีการทดสอบสำหรับการปรากฏตัวของดีเอ็นเอของเชื้อไวรัสจากการผสมข้ามพันธุ์ blot สควอช (อธิบายด้านล่าง). พืชโดยไม่ต้องดีเอ็นเอที่ตรวจพบไวรัสที่ถูกขังอยู่ในกรงเป็นรายบุคคลกับ 20-40 แมลง viruliferous สำหรับการฉีดวัคซีน 48 ชั่วโมงเพิ่มเติมระยะเวลา พืชทุกชนิดถูกนำมาปลูกแล้วในสนามรบกวน การปรากฏตัวของดีเอ็นเอของเชื้อไวรัสได้รับการวิเคราะห์ถึง 130 วันต่อมาโดยใช้ฟักทองของ2-4 apices สำหรับแต่ละโรงงาน อาการที่ได้รับการตรวจสอบนี้ระยะเวลาทั้งหมด. การตรวจหา DNA ของไวรัส ประมาณ 1 cm2 ของเนื้อเยื่อจากปลายยิงที่ถูกแบนในเมมเบรนไนลอน (Hybond ไม่มี; Amersham คอร์ปอาร์ลิงตันไฮทส์, IL) และไฮบริด (14) กับradiolabeled พลาสมิด pTYH20.7 แบกซ้ำ tandemly สำเนาของจีโนมของโคลน TYLCV แยกจากอิสราเอล (15). DNA ไวรัสที่ตรวจพบโดยการวิเคราะห์ blot ภาคใต้ (1) และโพลีเมอปฏิกิริยาลูกโซ่ (PCR) (16)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัสดุและวิธีการ
พืชและไวรัสและแมลงต่างๆ ยี่สิบวันแก่ต้นกล้า
ของป่าและโดดเด่นมะเขือเทศที่ปลูกในโรงเรือนที่ปลูกในกระถางได้
0.5-liter และเก็บไว้ใน nethouse กันแมลง . B .
tabaci ของบีไบโอไทป์ ( 3 ) รักษามะเขือ ( โซลานัม
melongena พันธุ์ คลาสสิก ) และฝ้าย ( ฝ้าย
พันธุ์ akkala ) ในกรงแมลงได้จัดขึ้นที่ 26 ° C ในแมลงพิสูจน์
หอเจริญเติบโต ไวรัสสายพันธุ์เป็นรักษาในมะเขือเทศพืชมะเขือเทศ
( L . cv . Daniela ) และขยายพันธุ์แมลง ( แมลง )

ส่ง การฉีดวัคซีน แมลงที่ได้มา 2
ในระหว่าง 30 ซื้ออาหารในต้นมะเขือเทศที่ติดเชื้อถูก
ใช้สำหรับการฉีดวัคซีน การฉีดวัคซีนตามปกติถูกใช้เพื่อหลีกเลี่ยง
หนี ( 20 )ต้นกล้าอายุยี่สิบวันปลูกในเรือนกระจก
โดย caging viruliferous whiteflies 5 วัน , 10 ถึง 20 แมลง
ต่อโรงงาน สิบสี่วัน หลังจากนั้นพืชทดสอบ
ตนของไวรัสดีเอ็นเอด้วยสควอช blot hybridization ( อธิบายด้านล่าง ) .
พืชโดยไม่ต้องตรวจดีเอ็นเอจากไวรัสถูกขัง
20 ถึง 40 แมลง viruliferous การเพิ่มเติมเชื้อ
30 งวดพืชที่ปลูกในเขตข้อมูลที่ถูกรบกวน
มีไวรัสดีเอ็นเอซีรั่มถึง 130 วันต่อมาใช้
squashes สองถึงสี่ apices สำหรับแต่ละโรงงาน อาการ
ติดตามสำหรับระยะเวลาทั้งหมดนี้ .
2 ตรวจหาดีเอ็นเอ ประมาณ 1 ตร. ซม.

เนื้อเยื่อจากส่วนยอดถูกแบนในไนลอนเมมเบรน ( hybond N ;
ชาม คอร์ป , Arlington Heights , IL ) และ ( 14 )
) กับการ radiolabeled พลาส ptyh20.7 เรือง tandemly ซ้ำ
สำเนาโคลนจีโนมของการแยกจากอิสราเอล ( 15 ) .
ไวรัสดีเอ็นเอถูกตรวจพบโดยการทำ Southern blot analysis ( 1 ) และโดยวิธีพีซีอาร์ ( PCR ) ( 16 )