The first trial assessed the feasibility of the assay and involved
irradiating purified DNA from salmon sperm using a transilluminator.
The rationale for using such an intense ultraviolet light source
was simply to generate a large number of thymine dimers to ensure
a positive response in the assay. Decreasing concentrations of irradiated
and non-irradiated DNA were loaded onto nylon membrane
with a dot blot apparatus before Western blotting utilizing antithymine
dimer monoclonal antibody. As illustrated in Fig. 5, Panel
A1–3, salmon sperm DNA irradiated by ultraviolet light gave a
robust, concentration dependent signal, whereas non-irradiated
salmon sperm DNA at higher concentrations demonstrated no signal
(Fig. 5, Panel A4–6).
In the second trial, purified DNA from F. candida was irradiated
similarly to the salmon sperm DNA in the first trial using
the transilluminator. The positive signal that was generated (Fig. 5,
Panel B1) indicated that the assay could be used on DNA isolated
from F. candida. To determine whether the assay could be used
to study thymine dimers generated within living F. candida, live
adults were irradiated under the transilluminator for periods of
0, 5, 10 and 20 min before DNA was purified and loaded onto the
membrane. DNA for each interval was assayed for thymine dimers
(Fig. 5, Panel B3–6). Live adults that were irradiated and DNA subsequently
extracted were also positive for thymine dimers, with
damage being evident in as little as 5 min of exposure. DNA isolated
from F. candida that had not been irradiated (Fig. 5, Panel B6)
was negative for the presence of thymine dimers.
การพิจารณาคดีครั้งแรกในการประเมินความเป็นไปได้ของการทดสอบและมีส่วนร่วม
ฉายรังสีดีเอ็นเอบริสุทธิ์จากสเปิร์มโดยใช้ปลาแซลมอน transilluminator.
เหตุผลในการใช้เช่นแหล่งกำเนิดแสงอัลตราไวโอเลตที่รุนแรง
เป็นเพียงการสร้างจำนวนมากของ dimers มีนเพื่อให้แน่ใจว่า
การตอบสนองในเชิงบวกในการทดสอบ การลดความเข้มข้นของรังสี
ดีเอ็นเอและไม่ฉายรังสีถูกโหลดไปยังเมมเบรนไนลอน
กับอุปกรณ์ blot จุดก่อนที่จะใช้วิธี western blotting antithymine
แอนติบอดี dimer ดังแสดงในรูปที่ 5 แผง
A1-3, ดีเอ็นเอของอสุจิปลาแซลมอนฉายรังสีจากแสงอัลตราไวโอเลตให้
แข็งแกร่งขึ้นอยู่กับความเข้มข้นของสัญญาณในขณะที่ไม่ได้ฉายรังสี
ปลาแซลมอนดีเอ็นเอสเปิร์มที่ระดับความเข้มข้นที่สูงขึ้นแสดงให้เห็นถึงไม่มีสัญญาณ
(รูปที่. 5, แผง A4-6).
ในคดีที่สอง ดีเอ็นเอบริสุทธิ์จากเอฟได้รับการฉายรังสีเชื้อราแคนดิดา
ในทำนองเดียวกันกับดีเอ็นเอของอสุจิปลาแซลมอนในการทดลองครั้งแรกที่ใช้
transilluminator สัญญาณบวกที่ถูกสร้างขึ้น (รูปที่. 5,
แผง B1) ชี้ให้เห็นว่าการทดสอบสามารถนำมาใช้ในการแยกดีเอ็นเอ
จากเอฟเชื้อราแคนดิดา การตรวจสอบว่าการทดสอบสามารถนำมาใช้
เพื่อการศึกษา dimers มีนที่สร้างขึ้นภายในชีวิต F. Candida สด
ผู้ใหญ่ได้รับการฉายรังสีภายใต้ transilluminator สำหรับระยะเวลาของ
0, 5, 10 และ 20 นาทีก่อนที่จะดีเอ็นเอบริสุทธิ์และโหลดไปยัง
เมมเบรน ดีเอ็นเอสำหรับแต่ละช่วงเวลาที่ได้รับการวิเคราะห์สำหรับ dimers มีน
(รูปที่. 5, แผง B3-6) ผู้ใหญ่สดที่ได้รับการฉายรังสีและดีเอ็นเอต่อมา
สกัดก็ยังบวกสำหรับ dimers มีนมี
ความเสียหายเป็นที่เห็นได้ชัดในการเป็นเพียง 5 นาทีของการสัมผัส ดีเอ็นเอที่แยกได้
จากเชื้อราแคนดิดาเอฟที่ไม่ได้รับการฉายรังสี (รูปที่. 5, แผง B6)
เป็นลบการปรากฏตัวของ dimers มีน
การแปล กรุณารอสักครู่..
