This article appeared in a journal

This article appeared in a journal published by Elsevier. The attached
copy is furnished to the author for internal non-commercial research
and education use, including for instruction at the authors institution
and sharing with colleagues.
Other uses, including reproduction and distribution, or selling or
licensing copies, or posting to personal, institutional or third party
websites are prohibited.
In most cases authors are permitted to post their version of the
article (e.g. in Word or Tex form) to their personal website or
institutional repository. Authors requiring further information
regarding Elsevier’s archiving and manuscript policies are
encouraged to visit:
http://www.
The development of DNA-based quartz crystal microbalance integrated with
isothermal DNA amplification system for human papillomavirus type
58 detection
Preeda Prakrankamanant a,b, Chanvit Leelayuwat b, Chamras Promptmas c, Temduang Limpaiboon b,
Surasak Wanramd, Prinya Prasongdee e, Chamsai Pientong f, Jureerat Daduang b,
Patcharee Jearanaikoon b,n
a Graduate School, Khon Kaen University, Khon Kaen 40002, Thailand
b Centre for Research and Development of Medical Diagnostic Laboratories, Faculty of Associated Medical Sciences, Khon Kaen University, Khon Kaen 40002, Thailand
c Department of Clinical Chemistry, Faculty of Medical Technology, Mahidol University, Nakhon Pathom 73170, Thailand
d College of Medicine and Public Health, Ubon Ratchathani University, Ubon Ratchathani 34190, Thailand
e Clinical Chemistry Laboratory Unit, Srinagarind Hospital, Faculty of Medicine, Khon Kaen University, Khon Kaen 40002, Thailand
f Department of Microbiology, Faculty of Medicine, Khon Kaen University, Khon Kaen 40002, Thailand
a r t i c l e i n f o
Available online 17 August 2012
Keywords:
Quartz crystal microbalance (QCM)
Loop-mediated isothermal amplification
(LAMP)
Nested PCR
Human papillomavirus (HPV)
a b s t r a c t
To address the effect of dramatic change in temperature and viscosity during PCR process on quartz
crystal microbalance (QCM) sensor and to increase the sensitivity, isothermal amplification was
employed in the system. We combined loop-mediated isothermal amplification (LAMP) technique
with QCM, called as LAMP-QCM, for detection of high-risk human papillomavirus viral DNA type 58
(HPV-58) which is commonly found in Asian women. The liquid-phase LAMP-QCM prototype
comprised the frequency counter, a temperature control device and housing of the quartz crystal with
polished gold electrodes on both sides. QCM detection signal was monitored in real-time based on an
avidin–biotin binding between avidin coated QCM surface and specific biotinylated LAMP products.
Analytical performance was evaluated for precision, sensitivity and specificity. A plasmid clone
containing the HPV-58 sequence was diluted from 106 to 1 copy and used for detection limit. Cut-off
value was estimated at 28.8 Hz from negative viral template. The system could detect 100 copies with
Df at 34.073.6 Hz compared to 1000 copies detected by conventional LAMP. No cross-reaction was
observed with other HPV types. The HPV-58 detection was compared among LAMP-QCM, conventional
LAMP and nested PCR in 50 cervical cancer tissues. The positive rate of LAMP-QCM was higher than that
of conventional LAMP with 100% sensitivity and 90.5% specificity. The integrated LAMP-QCM system
has improved the detection limit up to ten times compared to conventional LAMP with less-time
consuming.
& 2012 Elsevier B.V. All rights reserved.
1. Introduction
Quartz crystal microbalance (QCM) has become one of the
most promising types of non-labeling sensors with high sensitivity
and fast assay. The relationship between observed frequency
decreases (Df) as deposited mass (m) on the crystal surface with
gas phase was firstly described and used for concentration
measurement (Sauerbrey, 1959). The relevance of concentration
estimation in liquid phase QCM affected by both viscosity and
density of solution was previously characterized (Kanazawa and
Gordon, 1985). Various molecular detections of specific nucleic
acid target using QCM sensor in general are based on the
detections of PCR amplicons using nucleic acid probe-target
hybridization by which optimization of probe hybridization is
required for each target (Dell’Atti et al., 2007; Hong et al., 2010;
Karamollao˘glu et al., 2009; Kleo et al., 2011; Wu et al., 2007).
However, PCR amplification on liquid phase QCM is limited by
dramatic change in temperature leading to unstable of resonance
frequency during thermal cycling. Recently, the loop-mediated
isothermal amplification (LAMP) has been reported as a novel
nucleic acid amplification method with high sensitivity, specificity
and rapidity. Bst DNA polymerase is employed as selfrecurring
strand-displacement synthesis primed by specially
designed set of target-specific primers under isothermal temperature
(Notomi et al., 2000; Tomita et al., 2008) which making
LAMP the most attractive technique to combine with QCM sensor.
The temperature of LAMP reaction can be optimized to overcome
unstable QCM signal. Moreover, the integration of LAMP on QCM
has not yet been studied.
To reduce the detection steps, the direct binding between
avidin coated QCM surface with biotinylated LAMP products was
used instead of immobilized probe. This approach provides QCM
as universal sensor. In this study, we have developed the realtime
detection of LAMP in closed liquid phase QCM system to
improve sensitivity and reduce assay time. We evaluated our
developed system by comparing with conventional LAMP on the
detection of high-risk human papillomavirus (HPV) type 58 which
is commonly found in Asian population and known as the risk
factor for development of cervical cancer. Our established method
was more sensitive and faster than the conventional LAMP
indicating the application of this technique for screening and
quantifying HPV in a large populatio2. Materials and methods
2.1. Primers
A type-specific primer set for HPV-58 detection by conventional
LAMP was designed as described previously (Saetiew et al.,
2011). Forward inner primer (FIP) was modified by 5’-biotinylation
(b-FIP) and used for LAMP on QCM detection instead of FIP.
The details of the sequence and location of each primer are shown
in Table 1. All primers were purchased from Pacific Science Co.
Ltd., Thailand.
2.2. Clinical samples
A total of 33 cervical dysplasia and 17 cervical cancer tissues
were collected at the tumor clinic of Srinagarind Hospital, Khon
Kaen University, Khon Kaen, Thailand. Informed consents and the
research protocol (HE531211) were approved by the Ethical Human
Research Committee of Khon Kaen University. The plasmid containing
the whole genome of HPV type 58 was used as a positive control
in this study. Genomic DNA was extracted using Wizards SV
Genomic DNA purification system (Promega Corporation, Madison,
WI). All DNA samples were stored at 20 1C until used.
2.3. QCM system and preparation
In this experiment, 9 MHz AT-cut quartz crystals of 1 in.
diameter with polished gold electrode (gold area¼1.34 cm2,
thickness¼185 mm) coated on both sides were purchased from
Maxtek (Maxtek Inc., Santa Fe Springs, CA). The system included
peristaltic pump Model ISM847E (Ismatec SA, Switzerland) and
in-house temperature control box housing with QCM chamber as
shown in Fig. 1. A heating block was designed for supporting a
QCM chamber at a constant temperature for the LAMP-QCM
reactions. The heating unit can conduct the temperature ranged
from 30 to 95 1C with accuracy 71 1C. The changes in frequency
of QCM were monitored using research quartz crystal microbalance
(RQCM, Maxtek Inc., Santa Fe Springs, CA).
For pre-treatment of QCM, the crystal was cleaned with
piranha solution (30% H2O2:H2SO4¼1:3) for 5 min. Then the
crystal was rinsed in distilled water and ethanol and immediatelyn.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

บทความนี้ปรากฏในสมุดรายวันที่เผยแพร่ โดย Elsevier ที่แนบตกแต่งคัดลอกการเขียนวิจัยไม่ใช่การค้าภายในและการศึกษา ใช้ รวมถึงการเรียนการสอนในสถาบันที่ผู้เขียนและร่วมกับเพื่อนร่วมงานการใช้งานอื่น ๆ รวมทั้งผลิตและจำหน่าย หรือขาย หรือคัดลอก การอนุญาตให้ใช้สิทธิ์ หรือลงรายการบัญชีส่วนบุคคล สถาบัน หรือบุคคลที่สามห้ามมีการเว็บไซต์ส่วนใหญ่ ผู้เขียนจะได้รับอนุญาตลงรุ่นของพวกเขาบทความ (เช่นอยู่ในแบบฟอร์ม Word หรือเท็กซ์) เว็บไซต์ส่วนบุคคลของพวกเขา หรือสถาบันที่เก็บ ผู้เขียนต้องการข้อมูลเพิ่มเติมElsevier เกี่ยวข้องของถาวร และนโยบายฉบับสนับสนุนให้ชม:http://wwwการพัฒนาของดีเอ็นเอโดยใช้ผลึกควอตซ์ microbalance รวมกับระบบขยายดีเอ็นเอ isothermal papillomavirus มนุษย์ชนิดตรวจ 58ปรีดา Prakrankamanant a, b, b Chanvit Leelayuwat, c Promptmas รคา Temduang Limpaiboon bสุรศักดิ์ Wanramd ปริญญา Prasongdee e, Chamsai Pientong f, b Jureerat DaduangJearanaikoon พัชรี b, nบัณฑิตวิทยาลัย มหาวิทยาลัยขอนแก่น จังหวัดขอนแก่น 40002 ไทยศูนย์วิจัยและพัฒนาของห้องปฏิบัติการวินิจฉัยทางการแพทย์ คณะสัมพันธ์วิทยาศาสตร์การแพทย์ มหาวิทยาลัยขอนแก่น ขอนแก่น 40002 ไทย bc ภาควิชาเคมีคลินิก คณะเทคโนโลยีทางการแพทย์ มหาวิทยาลัยมหิดล นครปฐม 73170 ประเทศไทยd วิทยาลัยการแพทย์และสาธารณสุข มหาวิทยาลัยอุบลราชธานี อุบลราชธานี 34190 ไทยอีเคมีคลินิกห้องปฏิบัติการหน่วย Srinagarind โรงพยาบาล คณะแพทยศาสตร์ มหาวิทยาลัยขอนแก่น ขอนแก่น 40002 ไทยf ภาควิชาจุลชีววิทยา คณะแพทยศาสตร์ มหาวิทยาลัยขอนแก่น ขอนแก่น 40002 ไทยr t ฉัน c l e ฉัน n f oมีออนไลน์ 17 2012 สิงหาคมคำสำคัญ:คริสตัลควอตซ์ microbalance (QCM)วน mediated isothermal ขยาย(โคมไฟ)PCR ที่ซ้อนกันมนุษย์ papillomavirus (HPV)แบบ b s t r c tเพื่อผลของการเปลี่ยนแปลงอุณหภูมิและความหนืดระหว่าง PCR ในควอตซ์คริสตัล microbalance (QCM) เซ็นเซอร์ และเพื่อเพิ่มระดับความสำคัญ ขยาย isothermal ถูกจ้างงานในระบบ เรารวมเทคนิควน mediated isothermal ขยาย (โคมไฟ)กับ QCM เรียกว่าโคมไฟ-QCM ตรวจดีเอ็นเอไวรัส papillomavirus มนุษย์อิกชนิด 58(มะเร็งปากมดลูก-58) ซึ่งมักพบในผู้หญิงเอเชีย ต้นแบบ QCM โคมไฟเฟสของเหลวประกอบด้วยตัวนับความถี่ อุปกรณ์ควบคุมอุณหภูมิ และหมู่บ้านของควอตซ์คริสตัลด้วยหุงตทองขัดเงาทั้งสองด้าน QCM ตรวจสัญญาณถูกตรวจสอบในเวลาจริงขึ้นอยู่กับการavidin-ไบโอตินรวมระหว่าง avidin เคลือบผลิตภัณฑ์โคมไฟ biotinylated ผิว และเฉพาะ QCMมีประเมินวิเคราะห์ประสิทธิภาพความแม่นยำ ความไว และ specificity โคลน plasmidประกอบด้วยลำดับ HPV-58 ถูกผสมจาก 106 1 สำเนา และใช้สำหรับตรวจสอบจำกัด ตัดค่าที่ประมาณที่ 28.8 Hz จากแม่ลบไวรัส ระบบสามารถตรวจสอบสำเนา 100 ด้วยDf ที่ 34.073.6 เปรียบเทียบกับสำเนา 1000 Hz พบ โดยทั่วไปโคมไฟ Cross-reaction ไม่ถูกพบ HPV ชนิดอื่น การตรวจพบมะเร็งปากมดลูก-58 ถูกเปรียบเทียบระหว่างโคมไฟ-QCM ทั่วไปโคมไฟและ PCR ซ้อนในเนื้อเยื่อมะเร็งปากมดลูก 50 อัตราค่าบวกของ QCM หลอดได้สูงกว่าที่ของหลอดไฟธรรมดามีความไวและ 90.5% specificity 100% ระบบไฟ-QCM รวมได้ปรับปรุงขีดจำกัดตรวจสอบถึง 10 ครั้งเมื่อเทียบกับหลอดไฟทั่วไป ด้วยเวลาน้อยใช้งานและ 2012 Elsevier b.v สงวนลิขสิทธิ์ทั้งหมด1. บทนำคริสตัลควอตซ์ microbalance (QCM) ได้กลายเป็นหนึ่งในชนิดที่ว่าไม่ติดฉลากเซนเซอร์มีความไวสูงและวิเคราะห์อย่างรวดเร็ว ความสัมพันธ์ระหว่างความถี่ที่สังเกตลด (Df) ที่ฝากมวล (m) บนพื้นผิวของผลึกด้วยแก๊สระยะแรกอธิบาย และใช้ในความเข้มข้นวัด (Sauerbrey, 1959) ความสำคัญของความเข้มข้นการประเมินในเฟสของเหลว QCM ที่รับผลกระทบจากทั้งความหนืด และก่อนหน้านี้มีลักษณะความหนาแน่นของโซลูชัน (คานาซาวะ และGordon, 1985) Detections โมเลกุลต่าง ๆ ของ nucleic เฉพาะเป้าหมายกรดใช้เซ็นเซอร์ QCM โดยทั่วไปจะขึ้นอยู่กับการdetections ของ amplicons PCR โดยใช้เอ็นเอโพรบเป้าหมายโดยการเพิ่มประสิทธิภาพของโพรบมี hybridization hybridizationจำเป็นสำหรับแต่ละเป้าหมาย (Dell'Atti et al., 2007 Hong et al., 2010Karamollao˘glu et al., 2009 Kleo et al., 2011 Wu et al., 2007)อย่างไรก็ตาม PCR ขยายในเฟสของเหลว QCM ถูกจำกัดโดยเปลี่ยนแปลงอุณหภูมิที่นำไปสู่การไม่เสถียรของการสั่นพ้องความถี่ระหว่างขี่จักรยานความร้อน เมื่อเร็ว ๆ นี้ การวน-mediatedมีการรายงานขยาย isothermal (โคมไฟ) เป็นนวนิยายวิธีขยายกรดนิวคลีอิก มีความไวสูง specificityและ rapidity Bst ดีเอ็นเอพอลิเมอเรสจะทำงานเป็น selfrecurringสังเคราะห์แทนที่สแตรนด์งเยียโดยพิเศษออกแบบชุดของเป้าหมายเฉพาะไพรเมอร์ภายใต้อุณหภูมิ isothermal(Notomi et al., 2000 Tomita et al., 2008) ทำการโคมไฟเทคนิคน่าสนใจมากที่สุดรวมเข้ากับเซ็นเซอร์ QCMสามารถปรับอุณหภูมิของปฏิกิริยาในหลอดไฟเพื่อเอาชนะเสถียร QCM สัญญาณ นอกจากนี้ รวมของโคมไฟบน QCMได้ไม่ได้ถูกศึกษาเพื่อลดขั้นตอนตรวจสอบ รวมโดยตรงระหว่างถูกผิว QCM avidin ที่เคลือบ ด้วยผลิตภัณฑ์โคมไฟ biotinylatedใช้แทนเอนไซม์โพรบ วิธีการนี้ช่วยให้ QCMเป็นเซ็นเซอร์สากล ในการศึกษานี้ เราได้พัฒนาแบบเรียลไทม์ตรวจหาไฟในระบบปิดของเหลวระยะ QCMเพิ่มความไว และลดเวลาในการทดสอบ เราประเมินของเราพัฒนาระบบ โดยเปรียบเทียบกับหลอดไฟทั่วไปในการ58 พิมพ์ตรวจอิกมนุษย์ papillomavirus (HPV) ซึ่งจะพบบ่อยในประชากรเอเชียและรู้จักกันเป็นความเสี่ยงปัจจัยสำหรับการพัฒนาของมะเร็งปากมดลูก วิธีการสร้างของเราสำคัญมาก และเร็วกว่าหลอดธรรมดาแสดงการประยุกต์ใช้เทคนิคนี้ในการคัดกรอง และquantifying HPV ใน populatio2 ขนาดใหญ่ วัสดุและวิธีการ2.1. ไพรเมอร์รองพื้นชนิดเฉพาะที่ตั้ง โดยทั่วไปสำหรับการตรวจหามะเร็งปากมดลูก-58หลอดถูกออกแบบตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Saetiew et al.,2011) มีการปรับเปลี่ยนพื้นไปข้างหน้าภายใน (เช่น FIP) โดย 5'-biotinylation(b-เช่น FIP) และใช้การตรวจหา QCM แทนเช่น FIP โคมไฟแสดงรายละเอียดของลำดับที่และตำแหน่งของพื้นแต่ละในตารางที่ 1 ไพรเมอร์ทั้งหมดซื้อจากแปซิฟิกวิทยาศาสตร์ จำกัดจำกัด ไทย2.2 ตัวอย่างทางคลินิกจำนวน 33 แบบไม่สามารถที่ปากมดลูกและเนื้อเยื่อมะเร็งปากมดลูก 17ถูกรวบรวมไว้ที่คลินิกโรคเนื้องอกของโรงพยาบาล Srinagarind ขอนแก่นมหาวิทยาลัยขอนแก่น ขอนแก่น ไทย Consents แจ้งความและวิจัย (HE531211) ได้รับการอนุมัติ โดยจริยธรรมมนุษย์กรรมการวิจัยมหาวิทยาลัยขอนแก่น ประกอบด้วย plasmidใช้เป็นตัวควบคุมบวกจีโนมทั้งของ HPV ชนิด 58ในการศึกษานี้ Genomic DNA ถูกสกัดโดยใช้ตัวช่วยสร้างญาGenomic DNA ระบบ (Promega Corporation เมดิสันอินเตอร์) ตัวอย่างดีเอ็นเอทั้งหมดถูกเก็บไว้ที่ 1C 20 จนใช้2.3 QCM ระบบและเตรียมความพร้อมในนี้ทดลอง ผลึกควอตซ์ MHz ที่ตัด 9 1 ในนั้นเส้นผ่าศูนย์กลางเงาทองอิเล็กโทรด (area¼1.34 ทอง cm2thickness¼185 mm) เคลือบบนซื้อจากทั้งสองด้านMaxtek (Maxtek Inc. ซานตาเฟ่สปริงส์ CA) ระบบที่รวมปั๊ม peristaltic รุ่น ISM847E (Ismatec SA สวิตเซอร์แลนด์) และบ้านกล่องควบคุมอุณหภูมิภายในกับห้อง QCM เป็นแสดงใน Fig. 1 บล็อกทำความร้อนถูกออกแบบมาเพื่อสนับสนุนการหอการค้า QCM ที่อุณหภูมิคงที่สำหรับหลอด-QCMปฏิกิริยาการ หน่วยเครื่องทำความร้อนสามารถทำอุณหภูมิอยู่ในช่วงจาก 30 ถึง 95 1C ความแม่นยำ 71 1C. เปลี่ยนแปลงความถี่ของ QCM ถูกตรวจสอบโดยใช้วิจัยคริสตัลควอตซ์ microbalance(RQCM, Maxtek Inc. ซานตาเฟ่สปริงส์ CA)การรักษาก่อนของ QCM คริสตัลมีความสะอาดด้วยปลาปิรันยา (30% H2O2:H2SO4¼1:3) โซลูชันสำหรับ 5 นาที นั้นคริสตัลถูก rinsed ในน้ำกลั่น และเอทานอล และ immediatelyn

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บทความนี้ปรากฏในวารสารที่ตีพิมพ์โดยเอลส์ แนบ
สำเนาถูกตกแต่งไปยังผู้เขียนสำหรับการวิจัยที่ไม่ใช่เชิงพาณิชย์ภายใน
และการใช้การศึกษารวมทั้งการเรียนการสอนที่สถาบันการศึกษาผู้เขียน
และแบ่งปันกับเพื่อนร่วมงาน.
ใช้อื่น ๆ รวมทั้งการทำสำเนาและการจัดจำหน่ายหรือขายหรือ
สำเนาใบอนุญาตหรือโพสต์ส่วนบุคคล, สถาบัน หรือบุคคลที่สาม
เว็บไซต์ไม่ได้รับอนุญาต.
ในกรณีส่วนใหญ่ผู้เขียนได้รับอนุญาตให้โพสต์รุ่นของพวกเขา
บทความ (เช่นในรูปแบบ Word หรือเท็กซ์) ในเว็บไซต์ส่วนตัวของพวกเขาหรือ
พื้นที่เก็บข้อมูลของสถาบัน ผู้เขียนต้องมีข้อมูลเพิ่มเติม
เกี่ยวกับการจัดเก็บข้อมูลของเอลส์และนโยบายที่เขียนด้วยลายมือมีการ
สนับสนุนเพื่อเข้าชม:
http: // www.
การพัฒนาของดีเอ็นเอที่ใช้ผลึกคริสตัลไมโครบูรณาการกับ
ระบบดีเอ็นเอ isothermal สำหรับ papillomavirus มนุษย์ชนิด
58 การตรวจสอบ
ปรีดา Prakrankamanant A, B, ชาญ Leelayuwat ขจำรัส Promptmas C, ลิ้ม Limpaiboon ข
สุรศักดิ์ Wanramd อีปริญญา Prasongdee, แจ่มใส Pientong ฉ, จุรี Daduang B,
พัชรี Jearanaikoon ข n
บัณฑิต, มหาวิทยาลัยขอนแก่น, ขอนแก่น 40002 ประเทศไทย
ขศูนย์เพื่อการวิจัยและพัฒนา แพทย์วินิจฉัยห้องปฏิบัติการ, คณะเทคนิคการแพทย์มหาวิทยาลัยขอนแก่นขอนแก่น 40002 ประเทศไทย
คภาควิชาเคมีคลินิกคณะเทคนิคการแพทย์มหาวิทยาลัยมหิดลนครปฐม 73170
งของวิทยาลัยการแพทย์และสาธารณสุข, มหาวิทยาลัยอุบลราชธานี, อุบลราชธานี 34190 ประเทศไทย
อีเมล์เคมีคลินิกห้องปฏิบัติการโรงพยาบาลศรีนครินทร์คณะแพทยศาสตร์มหาวิทยาลัยขอนแก่น, ขอนแก่น 40002, ประเทศไทย
ฉภาควิชาจุลชีววิทยาคณะแพทยศาสตร์มหาวิทยาลัยขอนแก่น, ขอนแก่น 40002, ประเทศไทย
rticleinfo
จำหน่ายออนไลน์ 17 สิงหาคม 2012
คำสำคัญ:
ควอตซ์คริสตัลไมโคร (QCM)
isothermal amplification การห่วง -mediated
(ไฟ)
ที่ซ้อนกัน PCR
มนุษย์ papillomavirus (HPV)
ที่เป็นนามธรรม
ที่อยู่ที่ผลของการเปลี่ยนแปลงอย่างมากในอุณหภูมิและความหนืดในระหว่างกระบวนการ PCR ในผลึก
คริสตัลไมโคร (QCM) เซ็นเซอร์และการ เพิ่มความไว, isothermal amplification การได้รับการ
จ้างงานในระบบ เรารวมวงพึ่ง isothermal amplification การ (LAMP) เทคนิค
กับ QCM เรียกว่าเป็นโคมไฟ QCM สำหรับการตรวจสอบของมนุษย์ papillomavirus มีความเสี่ยงสูงชนิดดีเอ็นเอไวรัส 58
(HPV-58) ซึ่งพบได้บ่อยในผู้หญิงเอเชีย ของเหลวเฟสต้นแบบ LAMP-QCM
ประกอบด้วยความถี่เคาน์เตอร์, อุปกรณ์ควบคุมอุณหภูมิและที่อยู่อาศัยของผลึกคริสตัลที่มี
ขั้วไฟฟ้าทองขัดเงาทั้งสองด้าน QCM สัญญาณการตรวจสอบได้รับการตรวจสอบในเวลาจริงบนพื้นฐานของ
avidin-ไบโอตินมีผลผูกพันระหว่าง avidin เคลือบพื้นผิว QCM และเฉพาะเจาะจงผลิตภัณฑ์โคมไฟ biotinylated.
วิเคราะห์ผลการดำเนินงานได้รับการประเมินเพื่อความแม่นยำความไวและความจำเพาะ โคลนพลาสมิด
ที่มีลำดับการติดเชื้อ HPV-58 ถูกเจือจาง 106-1 สำเนาและใช้สำหรับการตรวจสอบวงเงิน ตัด
ค่าอยู่ที่ประมาณ 28.8 Hz จากแม่แบบของไวรัสในเชิงลบ ระบบสามารถตรวจสอบ 100 ชุดกับ
Df ที่ 34.073.6 เฮิร์ตซ์เมื่อเทียบกับ 1000 สำเนาตรวจพบโดยหลอดไฟธรรมดา ไม่มีปฏิกิริยาข้ามชนิดได้รับการ
ตั้งข้อสังเกตกับ HPV ชนิดอื่น ๆ HPV-58 การตรวจสอบได้รับการเปรียบเทียบกับกลุ่มที่ LAMP-QCM, ธรรมดา
ไฟและซ้อนกัน PCR ใน 50 เนื้อเยื่อมะเร็งปากมดลูก อัตราการบวกของ LAMP-QCM สูงกว่า
หลอดไฟธรรมดาที่มีความไว 100% และความจำเพาะ 90.5% ระบบ LAMP-QCM แบบบูรณาการ
ที่มีการปรับปรุงการตรวจสอบวงเงินถึงสิบเท่าเมื่อเทียบกับหลอดไฟแบบเดิมที่มีเวลาน้อย
การบริโภค.
& 2012 Elsevier BV สงวนลิขสิทธิ์.
1 บทนำ
ควอตซ์คริสตัลไมโคร (QCM) ได้กลายเป็นหนึ่งใน
ประเภทมีแนวโน้มมากที่สุดของเซ็นเซอร์ที่ไม่ติดฉลากที่มีความไวสูง
และการทดสอบอย่างรวดเร็ว ความสัมพันธ์ระหว่างความถี่ที่สังเกต
ลดลง (Df) ขณะที่มวลฝาก (เมตร) บนพื้นผิวผลึกที่มี
ก๊าซได้อธิบายไว้ในตอนแรกและใช้สำหรับความเข้มข้นของ
การวัด (Sauerbrey 1959) ความสัมพันธ์ของความเข้มข้น
ในการประมาณค่า QCM ของเหลวรับผลกระทบจากทั้งความหนืดและ
ความหนาแน่นของการแก้ปัญหาก่อนหน้านี้ก็มีลักษณะ (Kanazawa และ
กอร์ดอน, 1985) การตรวจจับโมเลกุลต่างๆของเฉพาะนิวคลีอิก
กรดเป้าหมายโดยใช้เซ็นเซอร์ QCM โดยทั่วไปจะขึ้นอยู่กับ
การตรวจจับของ amplicons PCR โดยใช้กรดนิวคลีอิกสอบสวนเป้าหมาย
การผสมพันธุ์โดยที่การเพิ่มประสิทธิภาพของการผสมข้ามพันธุ์สืบสวนสอบสวน
ที่จำเป็นสำหรับแต่ละเป้าหมาย (Dell'Atti et al, 2007;. ฮ่องกง และคณะ, 2010;.
Karamollao˘glu et al, 2009;. Kleo, et al, 2011;... Wu et al, 2007)
อย่างไรก็ตามขยาย PCR ในเฟสของเหลว QCM ถูก จำกัด ด้วย
การเปลี่ยนแปลงอย่างมากในอุณหภูมิที่นำไปสู่ความไม่แน่นอนของเสียงสะท้อน
ความถี่ในระหว่างการขี่จักรยานการระบายความร้อน เมื่อเร็ว ๆ นี้วงพึ่ง
isothermal amplification การ (ไฟ) ได้รับรายงานว่าเป็นนวนิยายเรื่อง
วิธีการขยายกรดนิวคลีอิกที่มีความไวสูงความจำเพาะ
และความรวดเร็ว โพลิเมอร์ Bst ดีเอ็นเอเป็นลูกจ้างเป็น selfrecurring
เส้นใยสังเคราะห์กระจัด primed พิเศษโดย
การออกแบบชุดของไพรเป้าหมายที่เฉพาะเจาะจงภายใต้อุณหภูมิ isothermal
(Notomi et al, 2000;. โทมิตะ, et al, 2008.) ซึ่งการทำ
โคมไฟเทคนิคที่น่าสนใจที่สุดที่จะรวมกับ QCM เซ็นเซอร์.
อุณหภูมิของการเกิดปฏิกิริยาไฟสามารถเพิ่มประสิทธิภาพในการเอาชนะ
สัญญาณ QCM ไม่แน่นอน นอกจากนี้การรวมกลุ่มของไฟบน QCM
ยังไม่ได้รับการศึกษา.
เพื่อลดขั้นตอนการตรวจสอบ, โดยตรงผูกพันระหว่าง
avidin เคลือบพื้นผิว QCM กับผลิตภัณฑ์ biotinylated ไฟถูก
นำมาใช้แทนการสอบสวนตรึง วิธีการนี้จะให้ QCM
เป็นเซ็นเซอร์สากล ในการศึกษาครั้งนี้เราได้มีการพัฒนาเรียลไทม์
การตรวจสอบของไฟในของเหลวปิดระบบ QCM ที่จะ
ปรับปรุงความไวและลดเวลาในการทดสอบ เราประเมินของเรา
ระบบที่พัฒนาโดยเปรียบเทียบกับหลอดไฟแบบเดิมใน
การตรวจสอบความเสี่ยงสูง Human Papillomavirus (HPV) พิมพ์ 58 ซึ่ง
มักจะพบในกลุ่มประชากรในเอเชียและเป็นที่รู้จักกันความเสี่ยง
ปัจจัยสำหรับการพัฒนาของมะเร็งปากมดลูก วิธีการจัดตั้งของเรา
ก็มีความไวและเร็วกว่าเดิมไฟ
แสดงให้เห็นการประยุกต์ใช้เทคนิคนี้ในการคัดกรองและ
ปริมาณเชื้อ HPV ใน populatio2 ขนาดใหญ่ วัสดุและวิธีการ
2.1 ไพรเมอร์
เซ็ตรองพื้นชนิดที่เฉพาะเจาะจงสำหรับการติดเชื้อ HPV-58 การตรวจสอบโดยทั่วไป
ไฟได้รับการออกแบบตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Saetiew et al.,
2011) รองพื้นด้านในไปข้างหน้า (FIP) ได้รับการแก้ไขโดย 5'-biotinylation
(B-FIP) และใช้สำหรับโคมไฟบน QCM การตรวจสอบแทน FIP.
รายละเอียดของลำดับและที่ตั้งของแต่ละไพรเมอร์จะแสดง
ในตารางที่ 1 ไพรทั้งหมดที่ซื้อมาจาก Pacific Science Co.
Ltd. ไทย.
2.2 ตัวอย่างทางคลินิก
รวม 33 dysplasia ปากมดลูกและ 17 เนื้อเยื่อมะเร็งปากมดลูก
ได้ถูกรวบรวมที่คลินิกเนื้องอกของโรงพยาบาลศรีนครินทร์ขอนแก่น
มหาวิทยาลัยขอนแก่น, ขอนแก่น, ประเทศไทย ยินยอมทราบและ
โครงร่างการวิจัย (HE531211) ได้รับอนุมัติจากมนุษย์จริยธรรม
คณะกรรมการวิจัยของมหาวิทยาลัยขอนแก่น พลาสมิดที่มี
จีโนมทั้งหมดของการติดเชื้อ HPV ชนิด 58 ถูกนำมาใช้เป็นตัวควบคุมเชิงบวก
ในการศึกษานี้ ดีเอ็นเอที่ถูกสกัดโดยใช้วิซาร์ดเอ
จีโนมระบบฟอกดีเอ็นเอ (Promega คอร์ปอเรชั่น Madison,
WI) ตัวอย่างดีเอ็นเอทั้งหมดถูกเก็บไว้ที่? 20 1C จนใช้.
2.3 ระบบ QCM และการเตรียมความพร้อม
ในการทดลองนี้ 9 MHz AT-ตัดผลึกควอทซ์ 1 ใน.
เส้นผ่าศูนย์กลางกับขั้วทองขัดเงา (ทองarea¼1.34 cm2,
thickness¼185มม) เคลือบทั้งสองด้านที่ซื้อมาจาก
Maxtek (Maxtek อิงค์ซานตาเฟสปริงส์ , CA) ระบบรวม
ปั๊ม peristaltic รุ่น ISM847E (Ismatec SA, วิตเซอร์แลนด์) และ
การควบคุมอุณหภูมิในบ้านที่อยู่อาศัยกล่องที่มีห้อง QCM เป็น
ที่แสดงในรูป 1. บล็อกความร้อนได้รับการออกแบบสำหรับการสนับสนุน
ห้อง QCM ที่อุณหภูมิคงที่สำหรับ LAMP-QCM
ปฏิกิริยา หน่วยความร้อนสามารถทำอุณหภูมิอยู่ระหว่าง
30-95 1C ด้วยความถูกต้อง 71 1C การเปลี่ยนแปลงในความถี่
ของ QCM ถูกตรวจสอบโดยใช้ผลึกคริสตัลวิจัยไมโคร
. (RQCM, Maxtek อิงค์ Santa Fe Springs, CA)
สำหรับการรักษาล่วงหน้าของ QCM คริสตัลได้รับการทำความสะอาดด้วย
วิธีการแก้ปัญหาปลาปิรันย่า (30% H2O2: H2SO4¼1: 3) เป็นเวลา 5 นาที จากนั้น
คริสตัลถูกล้างในน้ำกลั่นและเอทานอลและ immediatelyn

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

บทความนี้ปรากฏในวารสารที่ตีพิมพ์โดยเอลส์ . สำเนาแนบ
ตกแต่งให้กับผู้เขียนเพื่อการวิจัยที่ไม่ใช่เชิงพาณิชย์และการศึกษาใช้
ภายใน รวมถึงการสอนในสถาบันและผู้เขียน

ใช้ร่วมกันกับเพื่อนร่วมงานอื่น ๆรวมทั้งการสืบพันธุ์และการกระจาย หรือการขาย หรือสำเนาใบอนุญาต
หรือโพสต์ไปยังบุคคล สถาบัน หรือบุคคลที่สาม
เว็บไซต์ห้าม
ในกรณีส่วนใหญ่ผู้เขียนได้รับอนุญาตให้โพสต์รุ่นของพวกเขาของ
บทความ ( เช่น Word หรือเท็กซ์ ) แบบฟอร์มเว็บไซต์ส่วนตัวของพวกเขาหรือ
ข้อมูลสถาบัน ผู้ที่ต้องการข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับนโยบายของบริษัทคือการจัดเก็บต้นฉบับ

ให้กำลังใจและเยี่ยมชม :
http : / / www .
การพัฒนาดีเอ็นเอคริสตัลควอตซ์ microbalance รวมเข้ากับ
ตามดีเอ็นเอแบบคงที่ระบบ Human papillomavirus ประเภท

ปรีดา prakrankamanant 58 ตรวจสอบ A , B , นพ ชาญวิทย์ leelayuwat B , จำรัส promptmas C , เต็มดวง เรือนนะการ B ,
wanramd สุรศักดิ์ , chamsai pientong ปริญญา prasongdee E , F , จุรีรัตน์ daduang B ,
พัชรีย์ ชุติมาสกุล B , N : บัณฑิตวิทยาลัย มหาวิทยาลัยขอนแก่น ขอนแก่น 40002 ประเทศไทย
บี ศูนย์วิจัยและพัฒนาห้องปฏิบัติการตรวจวินิจฉัยทางการแพทย์ คณะเทคนิคการแพทย์ มหาวิทยาลัยขอนแก่น ขอนแก่น 40002
b ภาควิชาเคมีคลินิก คณะ เทคโนโลยี การแพทย์ มหาวิทยาลัยมหิดล จ. นครปฐม 73170
D วิทยาลัยแพทยศาสตร์และการสาธารณสุข มหาวิทยาลัยอุบลราชธานี จ. อุบลราชธานี 34190 , ไทย
หน่วยปฏิบัติการเคมีคลินิก และ โรงพยาบาลศรีนครินทร์ คณะแพทยศาสตร์ มหาวิทยาลัยขอนแก่น ขอนแก่น 40002
F ภาควิชาจุลชีววิทยา คณะแพทยศาสตร์ มหาวิทยาลัยขอนแก่น ขอนแก่น 40002
r t i C L E n f o
ออนไลน์ 17 สิงหาคม 2012

คำสำคัญ : ควอตซ์ คริสตัล microbalance ( QCM )

( ( ห่วงคงที่ ( โคมไฟ ) ซ้อนกัน

)Human papillomavirus ( HPV )
B S T R A C T
ที่อยู่ผลกระทบของการเปลี่ยนแปลงอย่างมากในอุณหภูมิและความหนืดในระหว่างกระบวนการเทคนิคควอตซ์คริสตัล microbalance
( QCM ) เซ็นเซอร์ และเพื่อเพิ่มความไวคงที่ ( คือ
ที่ใช้ในระบบ เรารวมวงเพื่อคำนวณ ( ( โคมไฟ ) ด้วยเทคนิคที่เรียกว่าเป็น lamp-qcm QCM
, ,การตรวจหาไวรัสที่มีความเสี่ยงสูง Human papillomavirus DNA 58
( hpv-58 ) ซึ่งพบบ่อยในผู้หญิงเอเชีย ส่วนของเหลว lamp-qcm ต้นแบบ
ประกอบด้วยเคาน์เตอร์ความถี่ , การควบคุมอุณหภูมิและอุปกรณ์ที่อยู่อาศัยของผลึกควอตซ์กับ
ขัดขั้วไฟฟ้าทองทั้งสองด้าน สัญญาณการตรวจสอบ QCM ถูกตรวจสอบในเวลาจริงขึ้นอยู่กับ
วิดิน - ไบโอตินผูกพันระหว่างวิดินเคลือบพื้นผิวและเฉพาะผลิตภัณฑ์โคมไฟ QCM ไล .
) ได้ทำการวิเคราะห์ความไวและความจำเพาะ . เป็นพลาสมิดโคลน
ที่มีลำดับ hpv-58 เจือจางจาก 106 1 คัดลอกและใช้เพื่อจำกัดการค้นหา . ตัด
มูลค่าประมาณ 28.8 Hz จากแม่แบบไวรัสลบ ระบบสามารถตรวจจับด้วย
100 แผ่นส่วนที่ 34.073.6 Hz เมื่อเทียบกับ 1 , 000 เล่ม ตรวจพบโดยไฟปกติ ไม่มีปฏิกิริยาข้ามชนิด HPV คือ
และอื่น ๆ การ hpv-58 สามารถเปรียบเทียบระหว่าง lamp-qcm ปกติ
โคมไฟและซ้อน PCR ใน 50 เนื้อเยื่อมะเร็งปากมดลูก อัตราการบวกของ lamp-qcm สูงกว่า
โคมไฟธรรมดาที่มีความไวและความจำเพาะ 100% 90.5 % . บูรณาการระบบ lamp-qcm
มีการปรับปรุงการตรวจสอบ สูงสุดถึง 10 เท่า เมื่อเปรียบเทียบกับหลอดไฟธรรมดาด้วยเสียเวลา

& 2012 ลูกค้าน้อยลง นอกจากนี้สงวนลิขสิทธิ์ .
1 บทนำ
คริสตัลควอตซ์ microbalance ( QCM ) ได้กลายเป็นหนึ่งในแนวโน้มมากที่สุดชนิดของการติดฉลาก

เซ็นเซอร์ความไวสูงและรวดเร็วด้วยวิธีไม่ ความสัมพันธ์ระหว่างความถี่
สังเกตลดลง ( DF ) ฝากมวล ( m ) บนพื้นผิวผลึกกับ
ระยะก๊าซเดิมทีอธิบายและใช้สำหรับวัดปริมาณ
( sauerbrey 1959 ) ความสัมพันธ์ของความเข้มข้น
ประมาณการในเฟสของเหลว QCM ผลกระทบจากทั้งค่าความหนืดและความหนาแน่นของสารละลาย
ก่อนหน้านี้ลักษณะ ( คานาซาว่าและ
กอร์ดอน , 1985 ) การตรวจจับโมเลกุลของกรดนิวคลีอิกต่างๆ
ที่เฉพาะเจาะจงเป้าหมายการใช้เซ็นเซอร์ในกรด QCM ทั่วไปตาม
amplicons การตรวจจับของ PCR โดยใช้กรดนิวคลีอิกตรวจสอบเป้าหมาย
hybridization ซึ่งเพิ่มประสิทธิภาพของโพรบ hybridization คือ
ที่จําเป็นสําหรับแต่ละเป้าหมาย ( dell'atti et al . , 2007 ; ฮง et al . , 2010 ;
karamollao ˘ GLU et al . , 2009 ; kleo et al . 2554 ; Wu et al . , 2007 ) .
แต่สามารถขยายในเฟสของเหลวจะถูก จำกัด โดย
QCMการเปลี่ยนแปลงอย่างมากในอุณหภูมิที่นำไปสู่เสถียรของความถี่เรโซแนนซ์
ช่วงวัฏจักร . เมื่อเร็วๆ นี้ วง (
( อุณหภูมิ ( โคมไฟ ) ได้รับรายงานเป็นนวนิยาย
กรดนิวคลีอิกขยายวิธีที่มีความไวและความจำเพาะสูง
รวดเร็ว . ส่วน DNA polymerase ใช้เป็น selfrecurring
เส้นการกระจัดการสังเคราะห์ primed เป็นพิเศษ
โดยออกแบบชุดโดยเฉพาะเป้าหมายภายใต้
อุณหภูมิคงที่ ( notomi et al . , 2000 ; โทมิตะ et al . , 2008 ) ซึ่งทำให้
โคมไฟน่าสนใจมากที่สุดเทคนิครวมกับ QCM เซ็นเซอร์ อุณหภูมิของปฏิกิริยา
โคมไฟสามารถเหมาะที่จะเอาชนะ
สัญญาณ QCM เสถียร นอกจากนี้ การรวมกลุ่มของโคมไฟ QCM
ยังไม่ได้รับการศึกษา .
เพื่อลดการตรวจสอบตามขั้นตอน โดยรวมระหว่าง
วิดิน QCM เคลือบพื้นผิวด้วยผลิตภัณฑ์หลอดไฟ คือ ไล
ใช้แทนที่ตรึงด้วย วิธีการนี้มี QCM
เป็นสากล เซ็นเซอร์ ในการศึกษานี้จึงได้มีการพัฒนาการตรวจหาไฟในระบบเรียลไทม์


เฟสของเหลว QCM ปิดปรับปรุงความไวและลดเวลาการทดสอบ ระบบที่พัฒนาขึ้น โดยเราประเมินของเรา

ปกติเปรียบเทียบกับโคมไฟการตรวจหาความเสี่ยงสูง Human papillomavirus ( HPV ) ชนิด 58 ซึ่ง
พบบ่อยในประชากรเอเชีย และเป็นที่รู้จักปัจจัยเสี่ยง
สำหรับการพัฒนาของมะเร็งปากมดลูก ของเราก่อตั้งขึ้นโดย
อ่อนไหวมากขึ้นและเร็วขึ้นกว่าปกติ โคมไฟ
แสดงการประยุกต์ใช้เทคนิคนี้ในการคัดกรองและ
ค่า HPV ใน populatio2 ขนาดใหญ่ วัสดุและวิธีการ
2.1 . ไพรเมอร์
ชนิดรองพื้นตั้ง hpv-58 ตรวจจับด้วยโคมไฟธรรมดา
ออกแบบตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( รัตน์ เอี่ยมสะอาด et al . ,
2011 ) ส่งต่อรองพื้นด้านใน หยอด ) ถูกแก้ไขโดย 5 ' - biotinylation
( b-fip ) และใช้สำหรับโคมไฟตรวจจับ QCM แทนไอพี .
รายละเอียดของลำดับและตำแหน่งของแต่ละคู่จะแสดง
ในตารางที่ 1 ทั้งหมด โดยซื้อจากบริษัทแปซิฟิกวิทยาศาสตร์
จำกัดประเทศไทย .
22 . ตัวอย่างคลินิก
33 dysplasia ปากมดลูกและเนื้อเยื่อมะเร็งปากมดลูกจำนวน 17
ที่เนื้องอก โรงพยาบาลศรีนครินทร์ มหาวิทยาลัยขอนแก่น
มหาวิทยาลัยขอนแก่น , ขอนแก่น , ประเทศไทย รับทราบและยินยอม
โครงร่างการวิจัย ( he531211 ) ได้รับการอนุมัติโดยคณะกรรมการจริยธรรมการวิจัยในมนุษย์
มหาวิทยาลัยขอนแก่น ที่ประกอบด้วย
พลาสมิดจีโนมทั้งหมดของประเภทของการติดเชื้อ HPV 58 ถูกใช้เป็นตัวควบคุมบวก
ในการศึกษานี้ จีโนมดีเอ็นเอโดยใช้ตัวช่วยสร้าง SV
ดีเอ็นเอบริสุทธิ์ระบบ ( promega Corporation , Madison ,
WI ) ตัวอย่างดีเอ็นเอทั้งหมดถูกเก็บไว้ที่  20 c จนใช้ .
2.3 ระบบ QCM และการเตรียม
ในการทดลองนี้ 9 MHz ที่ตัดควอตซ์รัตนากร 1 .
เส้นผ่าศูนย์กลางกับขั้วไฟฟ้าทองขัดเงา ( พื้นที่ทอง¼ 1.34 cm2
¼ 185 มม. ) ความหนาเคลือบทั้งสองด้าน ซื้อมาจาก
maxtek ( maxtek อิงค์ , Santa Fe Springs ( CA ) ระบบรวม
ism847e แบบจำลองปั๊ม peristaltic ( ismatec ซา , สวิตเซอร์แลนด์ ) และอุณหภูมิภายในกล่องควบคุม ที่อยู่อาศัยด้วย

แสดงในรูปเป็น QCM ห้อง 1 ป้องกันความร้อนถูกออกแบบมาเพื่อสนับสนุน
QCM ห้องที่อุณหภูมิคงที่สำหรับ lamp-qcm
ปฏิกิริยาหน่วยความร้อนสามารถนำอุณหภูมิมีค่า
30 95 1C กับความถูกต้อง 71 1C . การเปลี่ยนแปลงความถี่ของมอเตอร์โดยใช้การวิจัย
QCM คริสตัลควอตซ์ microbalance
( rqcm maxtek , Inc , Santa Fe Springs ( CA ) .
สำหรับการบำบัด QCM คริสตัลสะอาดกับ
ปิรันย่า โซลูชั่น ( 30% แบตเตอรี่ : กรดซัลฟิวริก¼ 3 5 นาทีแล้ว
คริสตัลถูกล้างในน้ำกลั่นและแอลกอฮอล์และ immediatelyn .