2. Material and methods2.1. The fru

2. Material and methods
2.1. The fruit used
Naturally infected mango fruit aged 110e115 days after flower
was carefully harvested early in the morning at an orchard in
Quezon, Nueva Ecija about 149 km N of Manila. Fruit were transported
to the laboratory (25 km from the orchard) immediately
after harvest. The working space in the laboratory was surface
sterilized with chlorox solution (5e6% sodium hypochlorite)
(Golden Bat, Manila, Philippines) a day before the fruit arrived. Fruit
were washed in running tap water to remove impurities and air
dried for 30 min before use in the succeeding experiments. Fruit
were used for the experiments within 12 h after harvest.
2.2. The test pathogens
Matured naturally infected fruit, yellow in color, obtained from
the local market were the sources of anthracnose- (C. gloeosporioides)
and stem end rot-causing (L. theobromae) pathogens. Using a
sterile scalpel, five 1-cm2 of surface tissue from each disease
symptom were excised from the fruit. Three fruit were used for
each disease symptom. The tissue pieces were surface sterilized
with chlorox solution for 30 s, rinsed twice in sterilewater for 1 min
and blotted dry on sterile filter paper. Five tissue pieces per plate
were placed on fresh potato dextrose agar (PDA) plates and incubated
for 3e7 days at 25
C. Fungal colonies clearly developing from
the fruit tissues were isolated and identified by cultural and
morphological methods. The pathogenicity of C. gloeosporioides and
L. theobromae was established on naturally infected green matured
mangoes.
2.3. Tolerance of pathogens to hot water
An electric water bath (Memmert, Germany) of 22 L capacity
with usable dimension of 350  290  220 mm (l  w  d) was
used. The effect of different temperatures (48, 50, 52, 53, 55
C) and
exposures (10, 20, 30, and 50 min) were tested on conidial germination
and mycelial growth of the pathogens.
C. gloeosporioides was grown on PDA plates at 25
C until
conidial masses were visible for harvest. Spores were gently
scraped-off with a sterile spatula and washed-off from culture
plates with 10 mL sterile distilled water (SDW). The spore suspension
was decanted and filtered through four layers of sterile
cheesecloth to remove mycelium and agar pieces. The resulting
filtrate was suspended in 100 mL SDW in a beaker and adjusted
with a haemacytometer (Hausser, Horsham, PA, USA) to give a final
count of 106 spores m L1. Ten milliliters of spore suspension was
transferred separately in six (18  150 mm) sterile glass test tubes
and dipped in hotwater at the exposure times described above. Test
tubes were hydro-cooled for 10 min and incubated at 25
C for 48 h,
after which 2 mL of spore suspension from each test tube was
separately poured in six 9 cm sterile watch glasses for microscopic
examination. Five hundred spores were counted for each watch
glass and the percent germination was estimated by dividing the
number of germinated spores by the total number of spores
counted. Percentage reduction in spore germination was evaluated
by the difference of the spore germination of the control and the
spore germination of the treatment divided by the spore

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2. วัสดุและวิธีการ2.1.ผลไม้ที่ใช้ธรรมชาติติดไวรัสมะม่วงอายุวัน 110e115 หลังจากดอกไม้ถูกอย่างเก็บเกี่ยวในตอนเช้าช่วงที่สวนในเกซอน ลนูว่า Ecija ประมาณ 149 กิโลเมตร N ของมะนิลา มีการขนส่งผลไม้การปฏิบัติการ (25 กม.จากสวน) ทันทีหลังการเก็บเกี่ยว พื้นที่ทำงานในห้องปฏิบัติการมีพื้นผิวsterilized ด้วยโซลูชัน chlorox (5e6% ฟอก)(ค้างคาวทอง มะนิลา ฟิลิปปินส์) วันก่อนการมาถึงของผลไม้ ผลไม้มีเครื่องซักผ้าในการทำน้ำประปาเพื่อเอาสิ่งสกปรกและอากาศแห้งสำหรับ 30 นาทีก่อนที่จะใช้ในการทดลองถัดไป ผลไม้ใช้สำหรับการทดลองภายใน 12 h หลังการเก็บเกี่ยว2.2. การทดสอบโรคMatured ผลไม้ติดเชื้อตามธรรมชาติ เหลืองสี ได้จากตลาดท้องถิ่นมีแหล่งมาของ anthracnose- (C. gloeosporioides)และเกิดสิ้น rot ทำให้เกิดโรค (L. theobromae) โดยใช้การใส่ scalpel, 1 cm2 5 ของเนื้อเยื่อผิวจากแต่ละโรคอาการถูก excised จากผลไม้ ใช้ผลไม้ 3 สำหรับอาการแต่ละโรค ชิ้นเนื้อเยื่อผิว sterilizedด้วยโซลูชั่น chlorox สำหรับ 30 s, rinsed สองใน sterilewater ใน 1 นาทีและ blotted แห้งบนกระดาษกรองฆ่าเชื้อ 5 เนื้อเยื่อชิ้นต่อแผ่นวางบนแผ่นมันฝรั่งสดขึ้น agar (PDA) และ incubatedวัน 3e7 ที่อาณานิคมเชื้อรา 25 C. ชัดเจนพัฒนาจากเนื้อเยื่อผลไม้แยกต่างหาก และระบุวัฒนธรรม และวิธีการของการ Pathogenicity ของ C. gloeosporioides และL. theobromae ก่อ matured เขียวติดเชื้อตามธรรมชาติมะม่วง2.3. ค่าเผื่อของโรคทั้งน้ำร้อนมีห้องน้ำไฟฟ้า (ความ เยอรมนี) ของกำลังการผลิต 22 Lมีมิติใช้ 350 290 220 มม. (l w d) ได้ใช้ ผลของอุณหภูมิที่แตกต่างกัน (48, 50, 52, 53, 55 C) และภาพทดสอบในการงอก conidial (10, 20, 30 และ 50 นาที)และ mycelial การเจริญเติบโตของโรคC. gloeosporioides ได้เติบโตบนแผ่น PDA ที่ 25 C จนถึงฝูง conidial มองเห็นได้สำหรับเก็บเกี่ยวได้ เพาะเฟิร์นถูกเบา ๆขูดออก ด้วยพายที่ฆ่าเชื้อ และล้างออกจากวัฒนธรรมแผ่น ด้วยน้ำกลั่น 10 มล.ผ่านการฆ่าเชื้อ (SDW) การระงับสปอร์decanted และกรองผ่านชั้นสี่ของกอซcheesecloth เอาชิ้น mycelium และ agar การส่งผลสารกรองที่ถูกระงับใน 100 mL SDW ในบีกเกอร์การ และปรับปรุงด้วย haemacytometer (Hausser เฮอร์แชม PA สหรัฐอเมริกา) ให้ตัวสุดท้ายจำนวนเพาะเฟิร์น 106 m L 1 Milliliters สิบของสปอร์ระงับได้โอนย้ายแยกต่างหากในหก (18 มม. 150) หลอดทดสอบกอซและนั่งจุ่มลงในเวลาแสงที่อธิบายไว้ข้างต้น ทดสอบท่อระบายความร้อนด้วยน้ำสำหรับ 10 นาทีได้ และ incubated ที่ 25 C สำหรับ 48 hหลังจากที่ถูกมล 2 การระงับสปอร์จากหลอดทดสอบแต่ละpoured แยกต่างหากใน 6 9 ซมใส่นาฬิกาแว่นตาสำหรับกล้องจุลทรรศน์ตรวจสอบ เพาะเฟิร์นห้าร้อยนับได้สำหรับนาฬิกาแต่ละแก้วและการงอกเปอร์เซ็นต์ถูกประเมิน โดยแบ่งการจำนวนเพาะเฟิร์นเปลือกงอกโดยเพาะเฟิร์นจำนวนนับ ลดเปอร์เซ็นต์การงอกสปอร์ถูกประเมินโดยความแตกต่างของการงอกสปอร์ของตัวควบคุมและการงอกของสปอร์ของการรักษาหาร ด้วยสปอร์

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2. วัสดุและวิธีการ
2.1 ผลไม้ที่ใช้ผลไม้มะม่วงติดเชื้อตามธรรมชาติอายุ 110e115 ดอกไม้วันหลังจากเก็บเกี่ยวอย่างระมัดระวังในช่วงเช้าที่สวนผลไม้ในQuezon นูซิจาประมาณ 149 กม. ยังไม่มีของกรุงมะนิลา ผลไม้ถูกส่งไปยังห้องปฏิบัติการ (25 กิโลเมตรจากสวนผลไม้) ทันทีหลังการเก็บเกี่ยว พื้นที่ทำงานในห้องปฏิบัติการได้รับการพื้นผิวที่ผ่านการฆ่าเชื้อด้วยน้ำยา chlorox (5e6% โซเดียมไฮโปคลอไรต์) (โกลเด้นค้างคาว, มะนิลา, ฟิลิปปินส์) วันก่อนผลไม้มาถึง ผลไม้ที่ถูกล้างในน้ำไหลประปาเพื่อเอาสิ่งสกปรกและอากาศแห้งเป็นเวลา30 นาทีก่อนที่จะใช้ในการทดลองที่ประสบความสำเร็จ ผลไม้ถูกนำมาใช้สำหรับการทดลองภายใน 12 ชั่วโมงหลังการเก็บเกี่ยว. 2.2 เชื้อโรคทดสอบครบกำหนดติดเชื้อตามธรรมชาติผลไม้สีเหลืองได้จากตลาดในประเทศแหล่งที่มาของมีanthracnose- (C. gloeosporioides) และลำต้นเน่าปลายที่ก่อให้เกิด (L. theobromae) เชื้อโรค ใช้มีดผ่าตัดหมันห้า 1 cm2 ของเนื้อเยื่อผิวจากโรคแต่ละอาการที่ถูกตัดจากผลไม้ ผลไม้ที่สามถูกนำมาใช้สำหรับอาการแต่ละโรค ชิ้นเนื้อเยื่อผิวผ่านการฆ่าเชื้อด้วยน้ำยา chlorox สำหรับ 30 วินาทีล้างครั้งที่สองใน sterilewater เวลา 1 นาทีและเปื้อนแห้งบนกระดาษกรองผ่านการฆ่าเชื้อ ห้าชิ้นเนื้อเยื่อต่อแผ่นถูกวางไว้บนเดกซ์โทรสมันฝรั่งสดวุ้น (PDA) แผ่นและบ่มวัน3e7 ที่ 25 องศาเซลเซียส อาณานิคมของเชื้อราได้อย่างชัดเจนจากการพัฒนาเนื้อเยื่อผลไม้แยกและระบุทางวัฒนธรรมและวิธีการทางสัณฐานวิทยา ทำให้เกิดโรคซี gloeosporioides และแอล theobromae ก่อตั้งขึ้นเมื่อวันที่ติดเชื้อตามธรรมชาติสีเขียวสุกมะม่วง. 2.3 ความอดทนของเชื้อโรคในน้ำร้อนอาบน้ำอุ่นไฟฟ้า (MEMMERT, เยอรมนี) ความจุ 22 ลิตรที่มีมิติที่สามารถใช้งานได้350? 290? 220 มิลลิเมตร (ลิตร? W? ง) ถูกนำมาใช้ ผลของอุณหภูมิที่แตกต่างกัน (48, 50, 52, 53, 55? C) และความเสี่ยง(10, 20, 30, และ 50 นาที) ได้มีการทดสอบการงอกเชื้อราและการเจริญเติบโตของเส้นใยของเชื้อโรค. ซี gloeosporioides ปลูกบนจาน PDA ที่ 25 องศาเซลเซียสจนฝูงเชื้อราได้เห็นสำหรับการเก็บเกี่ยว สปอร์เบา ๆ ถูกขูดออกด้วยไม้พายผ่านการฆ่าเชื้อและล้างออกจากการเพาะเลี้ยงแผ่นมี10 มิลลิลิตรน้ำกลั่นปลอดเชื้อ (SDW) ระงับสปอร์ถูก decanted และกรองผ่านสี่ชั้นของการฆ่าเชื้อผ้าที่จะเอาเส้นใยและชิ้นวุ้น ส่งผลให้กรองถูกระงับใน 100 มล SDW ในบีกเกอร์และปรับด้วยhaemacytometer (ที่ Hausser, Horsham, PA, USA) เพื่อให้เป็นครั้งสุดท้ายนับ106 สปอร์ m L 1 สิบมิลลิลิตรสปอร์แขวนลอยถูกโอนแยกต่างหากในหก (18? 150 มิลลิเมตร) หลอดทดลองแก้วผ่านการฆ่าเชื้อและจุ่มลงในHotwater ในช่วงเวลาการเปิดรับแสงที่อธิบายข้างต้น ทดสอบท่อน้ำถูกระบายความร้อนด้วยเวลา 10 นาทีและบ่มที่อุณหภูมิ 25 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมงหลังจากที่2 มิลลิลิตรสปอร์แขวนลอยจากหลอดทดลองแต่ละเทแยกต่างหากในหก9 ซมแว่นตานาฬิกาผ่านการฆ่าเชื้อด้วยกล้องจุลทรรศน์สำหรับการตรวจสอบ สปอร์ห้าร้อยนับนาฬิกาแต่ละแก้วและงอกร้อยละประมาณโดยการหารจำนวนสปอร์งอกด้วยจำนวนของสปอร์นับ ลดลงร้อยละการงอกของสปอร์ได้รับการประเมินโดยความแตกต่างของการงอกของสปอร์ของการควบคุมและการงอกของสปอร์ของการรักษาโดยแบ่งออกเป็นสปอร์