The filtrate samples were diluted i

The filtrate samples were diluted in HEPES buffer to give potassium levels that could be detected at the midpoint on the calibration graph. The potassium standards were remeasured periodically during the experiment to verify instrument accuracy. Filtration and the presence of ADBAC, DDAC, and HEPES buffer did not interfere with potassium analysis.

Analysis of 260-nm-absorbing material.
For each filtrate sample, 260-nm-absorbing material was detected using a Perkin-Elmer lambda 2 UV/VIS spectrophotometer at a wavelength of 260 nm. A matched pair of UV silica cuvettes (Hellma precision synthetic far-UV quartz, 200 to 2,500 nm; light path, 10 mm) was used to measure each filtrate sample against HEPES buffer. After each measurement, the cuvette was washed in HEPES buffer.

Survival levels and 260-nm leakage from cells demonstrating autolysis.
Three separate reaction vessels containing an 18-ml volume of ADBAC, DDAC, and HEPES buffer were prepared. The final reaction concentration of each biocide was 9 μg/ml, and both reaction vessel and stock suspension (2 × 1010 CFU/ml) were maintained at 35°C. Two milliliters of the stock suspension was added to each reaction vessel to give a final concentration of 2 × 109 CFU/ml. The reaction vessels were then maintained at 35°C for 4 h (Mickle shaking water bath at 100 oscillations min−1, with an amplitude of 10 cm) to initiate autolysis. After 4 h, 20 ml of double-strength neutralizer (HEPES buffer consisting of 0.14% [wt/vol] lecithin and 1.0% [wt/vol] Tween 80) was added to each reaction vessel for 10 min. The reaction vessel contents were then centrifuged at 1,508 × g for 20 min (Sorvell RT6000B; DuPont, Stevenage, Hertfordshire, England) at room temperature. The pellet was then resuspended in 40 ml HEPES buffer, centrifuged, and finally resuspended in 20 ml HEPES buffer. The harvested cells were then held at 35°C for the duration of the experiment. Sample volumes of 3 ml were removed at 0, 2, 4, 18, 22, and 24 h and filtered (Acrodisc [32-mm, 0.45 μm] filter with a Supor membrane; Pall Gelman, MI), and the absorbance at 260 nm was measured.

To assess survivor levels, the procedure described above was followed, except that at 0, 2, 4, 6, 18, 22, 24, and 48 h, a 1-ml sample was removed from each reaction vessel and serially diluted in HEPES buffer, and 100 μl was plated onto TSA and incubated at 37°C. After 18 h of incubation, colony counts were recorded and converted to CFU/ml survivors.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตัวอย่างกรองเจือจางในบัฟเฟอร์ HEPES ให้โพแทสเซียมที่อาจถูกตรวจพบที่จุดกึ่งกลางบนกราฟการสอบเทียบ มาตรฐานโพแทสเซียมถูก remeasured เป็นระยะ ๆ ในระหว่างการทดลองเพื่อตรวจสอบความเที่ยงตรงของเครื่อง การกรองและการปรากฏตัวของ adbac, ddac และ HEPES บัฟเฟอร์ไม่ได้ยุ่งเกี่ยวกับการวิเคราะห์โพแทสเซียม.

การวิเคราะห์จาก 260 นาโนเมตร-วัสดุดูดซับ
สำหรับแต่ละตัวอย่างกรอง, 260 นาโนเมตร-วัสดุดูดซับถูกตรวจพบโดยใช้ Perkin-Elmer แลมบ์ดา 2 UV / Vis Spectrophotometer ที่ความยาวคลื่น 260 นาโนเมตรของ จับคู่ของ cuvettes ซิลิกายูวี (hellma ความแม่นยำสังเคราะห์ไกล UV ควอทซ์, 200 ถึง 2500 นาโนเมตร; เส้นทางแสง 10 มม. ) ถูกนำมาใช้ในการวัดแต่ละตัวอย่างกรองกับบัฟเฟอร์ HEPES หลังจากการวัดแต่ละ Cuvette ถูกล้างในบัฟเฟอร์ HEPES.

ระดับการอยู่รอดและการรั่วไหล 260 นาโนเมตรจากเซลล์ที่แสดงให้เห็นถึงย่อยสลาย
สามลำปฏิกิริยาแยกที่มีปริมาณ 18 มล. จาก adbac, ddac และ HEPES บัฟเฟอร์ถูกจัดเตรียม ปฏิกิริยาความเข้มข้นสุดท้ายของแมลงแต่ละ 9 mg / ml และเรือปฏิกิริยาทั้งหุ้นและระงับ (2 × 1010 CFU / ml) ถูกเก็บรักษาที่อุณหภูมิ 35 ° Cสองมิลลิลิตรระงับหุ้นถูกบันทึกอยู่ในเรือแต่ละปฏิกิริยาที่จะให้ความเข้มข้นสุดท้ายของ 2 × 109 CFU / ml เรือปฏิกิริยาถูกเก็บรักษาแล้วที่ 35 ° C นาน 4 ชั่วโมง (Mickle สั่นอาบน้ำที่ 100 แนบแน่น Min-1 กับความกว้างของ 10 ซม. ) เพื่อเริ่มต้นการย่อยสลาย หลังจาก 4 ชั่วโมง, 20 มล. ของ neutralizer สองแรง (buffer HEPES ประกอบด้วย 0.14% [น้ำหนัก / ปริมาตร] เลซิตินและ 10% [น้ำหนัก / ปริมาตร] ท​​วี 80) ถูกบันทึกอยู่ในเรือแต่ละปฏิกิริยาเป็นเวลา 10 นาที เนื้อหาเรือปฏิกิริยาถูกปั่นแล้วที่ 1,508 × g เป็นเวลา 20 นาที (sorvell rt6000b; Dupont, Stevenage, Hertfordshire, England) ที่อุณหภูมิห้อง เม็ดถูก resuspended แล้วใน 40 มล. HEPES บัฟเฟอร์, ปั่น, และนำมาเลี้ยงในที่สุด 20 มล. HEPES บัฟเฟอร์เซลล์เก็บเกี่ยวถูกจัดขึ้นแล้วที่ 35 ° C ในช่วงระยะเวลาของการทดลอง ปริมาณตัวอย่าง 3 มล. ถูกถอดออกที่ 0, 2, 4, 18, 22, และ 24 ชั่วโมงและกรอง (acrodisc [32 มม. , 0.45 ไมโครเมตร] กรองด้วยเมมเบรน Supor; ศพ Gelman, ไมล์) และการดูดกลืนแสงที่ 260 นาโนเมตรถูกวัด.

เพื่อประเมินระดับรอดชีวิตขั้นตอนที่อธิบายข้างต้นตามมายกเว้นว่าที่ 0, 2, 4, 6, 18, 22, 24, และ 48 ชั่วโมง,ตัวอย่าง 1 มล. ถูกลบออกจากเรือปฏิกิริยาแต่ละคนและเจือจางอนุกรมในบัฟเฟอร์ HEPES, และ 100 ไมโครลิตรถูกชุบลงบน TSA และบ่มที่อุณหภูมิ 37 ° C หลังจาก 18 ชั่วโมงของการบ่มนับอาณานิคมถูกบันทึกไว้และแปลงให้เป็นผู้รอดชีวิต CFU / ml.

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ตัวอย่างของ filtrate ที่ผสมในบัฟเฟอร์ HEPES ให้ระดับโพแทสเซียมที่พบในจุดกึ่งกลางบนกราฟปรับเทียบ มาตรฐานโพแทสเซียมถูก remeasured เป็นระยะ ๆ ในระหว่างการทดลองเพื่อตรวจสอบความถูกต้องของเครื่องมือ การกรองและการเป็น ADBAC, DDAC และ HEPES บัฟเฟอร์ไม่รบกวนกับการวิเคราะห์โพแทสเซียม

วิเคราะห์วัสดุ 260-nm-ดูด
สำหรับตัวอย่างแต่ละ filtrate, 260-nm-ดูดวัสดุถูกตรวจพบโดยใช้เครื่องทดสอบกรดด่าง UV/VIS แลมบ์ดา 2 เอลเมอเพอร์ที่ความยาวคลื่น 260 nm คู่ของ UV นส่วน cuvettes (Hellma ความแม่นยำในการสังเคราะห์ไกล UV ควอตซ์ 200-2500 nm เส้นทางแสง 10 mm) ใช้ในการวัดแต่ละตัวอย่าง filtrate กับ HEPES บัฟเฟอร์ หลังจากแต่ละการประเมิน cuvette ถูกล้างในบัฟเฟอร์ HEPES

ระดับอยู่รอดและรั่ว 260 nm จากเซลล์เห็น autolysis
สามแยกปฏิกิริยาเรือประกอบด้วยปริมาณ 18 ml เป็น ADBAC, DDAC และ HEPES บัฟเฟอร์เตรียมไว้ ความเข้มข้นสุดท้ายปฏิกิริยาของ biocide ละถูก 9 μg/ml และเรือปฏิกิริยา และระงับหุ้น (2 × 1010 CFU/ml) ถูกจัดเก็บอยู่ที่ 35 องศาเซลเซียส Milliliters ที่สองของการระงับหุ้นเพิ่มให้เรือแต่ละปฏิกิริยาจะให้ความเข้มข้นสุดท้ายของ 2 × 109 CFU/ml เรือปฏิกิริยาแล้วได้รักษาที่ 35° C สำหรับ 4 h (Mickle งก ๆ น้ำน้ำที่แกว่ง min−1 100 ด้วยการคลื่น 10 cm) ประเดิม autolysis หลังจาก 4 h, 20 ml ของคู่แข็ง neutralizer (HEPES บัฟเฟอร์ประกอบด้วยเลซิติน 0.14% [wt/vol] และ 10% [wt/vol] Tween 80) ถูกเพิ่มเข้ามาในเรือแต่ละปฏิกิริยาสำหรับ 10 นาที เนื้อหาเรือปฏิกิริยาถูก centrifuged แล้วที่ 1,508 × g สำหรับ 20 นาที (Sorvell RT6000B ดูปองท์ สตีเวนิจ ฮาร์ทฟอร์ดเชอร์ อังกฤษ) ที่อุณหภูมิห้อง เม็ดถูกแล้ว resuspended ในบัฟเฟอร์ HEPES 40 ml, centrifuged และในที่สุด resuspended ในบัฟเฟอร์ HEPES 20 ml แล้วเซลล์ harvested ถูกจัดที่ 35° C สำหรับช่วงเวลาของการทดลอง ตัวอย่างปริมาณ 3 ml ออกที่ 0, 2, 4, 18, 22 และ 24 ชม และกรอง (Acrodisc [32 mm, 0.45 μm] กรอง ด้วยเมมเบรน Supor Pall เกลแมน MI), และ absorbance ที่ 260 nm ที่วัด

เพื่อประเมินระดับของผู้รอดชีวิต ขั้นตอนที่อธิบายไว้ข้างต้นถูกตาม ยกเว้นที่ 0, 2, 4, 6, 18, 22, 24 และ 48 h ตัวอย่าง 1 ml ถูกเอาออกจากเรือแต่ละปฏิกิริยา serially ผสมในบัฟเฟอร์ HEPES และ 100 μl ถูกชุบบน TSA และ incubated ที่ 37 องศาเซลเซียส หลังจาก h 18 ของคณะทันตแพทยศาสตร์ ตรวจนับโคโลนีได้บันทึก และแปลงเป็น CFU/ml ผู้รอดชีวิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ตัวอย่าง filtrate ได้เจือจางลงในบัฟเฟอร์ hepes เพื่อทำให้ระดับโปแตสเซียมที่จะได้รับการตรวจพบที่ณตรงจุดกึ่งกลางในการปรับเทียบกราฟที่ มาตรฐาน,โปแตสเซียมที่เป็น remeasured เป็นระยะๆในระหว่างการทดลองที่จะตรวจสอบความถูกต้องเครื่องมือ การกรองและการมีอยู่ของ adbac ddac hepes depth buffer ,และไม่ได้เข้าไปแทรกแซงด้วยการวิเคราะห์โปแตสเซียม.

การวิเคราะห์ของวัสดุ 260 - NM - การดูดซับแรงกระแทก
สำหรับตัวอย่าง filtrate วัสดุแต่ละ 260 - NM - การดูดซับแรงกระแทกได้ตรวจพบการใช้ใช้ใน 2 UV /เผชิญหน้ากับ lambda perkin-elmer ที่ความยาวคลื่น 260 นิวตันเมตร ทั้งคู่เข้ากันได้ของ cuvettes ซิลิกา UV (แก้วทำจากเส้นใยสังเคราะห์ไกล - UV ได้อย่างแม่นยำ hellma 200 ถึง 2 , 500 นาโนเมตรพาธไฟ 10 มม.)ถูกใช้ในการวัดตัวอย่าง filtrate แต่ละคนกับ hepes บัฟเฟอร์ หลังจากชั่งน้ำหนักแต่ละครั้ง cuvette ที่ถูกล้างใน hepes บัฟเฟอร์.

ระดับการมีชีวิตรอดและ 260 - การรั่วซึมของนาโนเมตรจากเซลล์ autolysis แสดงให้เห็นถึง
สามเครื่องปฏิกริยาแบบแยกพื้นที่ที่มีระดับเสียง 18 - มล.ของ adbac ddac hepes บัฟเฟอร์และได้เตรียมความพร้อม การตอบสนองความเข้มข้นของสารฆ่าเชื้อแต่ละตัวมี 9 ไมโครกรัม/ ML และ ภาชนะ การตอบสนองและระบบกันสะเทือนหุ้น( 2 × 1010 CFU ,/มล.)ทั้งสองเป็นได้รับการดูแลรักษาเป็นอย่างดีที่ 35 °2 มิลลิลิตรของระบบกันสะเทือนแบบหุ้นที่ถูกเพิ่มในเรือปฏิกริยาแต่ละรายเพื่อช่วยให้การทำสมาธิขั้นสุดท้ายของ 2 × 109 CFU ,/ ml . เรือปฏิกริยาที่ได้รับการดูแลรักษาเป็นอย่างดีเป็นที่ 35 ° C สำหรับ 4 ชั่วโมง( mickle เขย่าอ่างอาบน้ำน้ำที่ 100 การแกว่งนาที 1 พร้อมด้วยแอมพลิจูดของ 10 ซม.)เพื่อเริ่มต้น autolysis แล้ว หลังจากนั้น 4 ชั่วโมง 20 มล.ของแบบเตียงนอนเดี่ยวขนาดใหญ่หนึ่งเตียง - ความแรงของ neutralizer ( hepes บัฟเฟอร์ประกอบด้วย 0.14% [,ฉบับที่ WT /]วัตถุธาตุเลซ - อิธินและ 10% [ WT / vol ]ส่วนกลาง 80 )ได้ถูกเพิ่มลงในแต่ละการตอบสนองเรือสำหรับ 10 นาทีที่เรือเนื้อหาเป็นการตอบสนองแล้ว centrifuged ที่ 1,508 × g สำหรับ 20 นาที( sorvell Rt 6000 b ; Dupont , stevenage ,มีความมุ่งมั่น,อังกฤษ)ที่ อุณหภูมิ ห้อง. ไทยโอเลฟินส์ก็ resuspended ใน 40 มล. hepes บัฟเฟอร์ centrifuged และสุดท้าย resuspended hepes ใน 20 มล.บัฟเฟอร์เซลล์ที่เก็บเกี่ยวอยู่ที่ 35 ° C สำหรับช่วงเวลาที่มีการทดลองแล้ว ตัวอย่างมีปริมาณของ 3 มล.ได้ถูกลบออกที่ 0 , 2 , 4 , 18 , 22 ,และ 24 ชั่วโมงและมีการกรองสัญญาณ( acrodisc [ 32 มม., 0.45 μ m )แผ่นกรองด้วย supor เยื่อ;คลุม gelman ,ไมล์),และ absorbance ที่ 260 nm ,วัดได้.

เพื่อประเมินคนรอดตายระดับ,ที่ตามขั้นตอนที่อธิบายข้างต้นเป็นตามด้วยเว้นแต่ว่าที่ 0 , 2 , 4 , 6 , 18 , 22 , 24 ,และ 48 ชั่วโมง,ตัวอย่าง 1 - มล.ที่ถูกลบออกจากเรือและการตอบสนองแต่ละแบบอนุกรมเจือจางลงในบัฟเฟอร์ hepes และ 100 μl เป็นตัวเสียบเคลือบทองลงบน incubated และ TSA C 37 ° หลังจาก 18 ชั่วโมงของอบนับถอยหลังอาณานิคมที่บันทึกและแปลงเป็นผู้รอดชีวิตมล. CFU ,/..