S. aureus and Y. enterocolitica, fr

S. aureus and Y. enterocolitica, from 102 cfu/mL to less than 10 cfu/mL for L. monocytogenes with an overnight enrichment step in culture media. The results were confirmed by further tests on which 103 cfu/mL could reliably
be estimated as the detection limit of the system when applied to bacterial cultures (data not shown).
Application to pork
After centrifuged, the bacterial pellet using the TIANamp Bacteria DNA Kit was preliminary tested for their efficacy
in obtaining amplifiable DNA from pork. The samples were then tested using the multiplex PCR assay. For comparison of the same samples were also amplified by duplex PCR (targets: 16S rRNA and each of the pathogenspecific genes separately using the same conditions as the multiplex PCR) to evaluate how multiple pathogen detection affected the performance of the system. In this study, the detection limit by duplex PCR after enrichment for Salmonella, S. aureus, L. monocytogenes, Y. enterocolitca and E. coli O157:H7 inoculated individually onto pork were 59, 23, 3, 12 and 35 cfu/mL (Table 3a). The detection limit by multiplex PCR after enrichment for Salmonella, S. aureus, L. monocytogenes, Y. enterocolitca and E. coli O157:H7 were detected at levels of 142, 51, 9, 33 and 670 cfu/mL, respectively, in the pork (Table 3b). For pork inoculated with the five organisms together, increased sensitivity was achieved for E. coli O157:H7
when duplex PCR was used instead of multiplex PCR. Fortunately, the multiplex PCR worked best for the four
bacteria that had been reported to occur on pork. The lower sensitivity of the multiplex PCR for E. coli O157:H7 can
be addressed by employing the same enrichment process used for the other four species, but then analyzing the
extracted DNA using a duplex PCR.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

หมอเทศข้างลาย S. และ Y. enterocolitica จาก 102 cfu/mL การ cfu น้อยกว่า 10 mL สำหรับ L. monocytogenes กับขอที่ค้างคืนขั้นตอนสื่อวัฒนธรรม ผลถูกยืนยัน โดยการทดสอบเพิ่มเติมที่ 103 cfu/mL ไม่ได้จะประมาณเป็นจำนวนตรวจสอบระบบเมื่อใช้กับแบคทีเรียวัฒนธรรม (ข้อมูลไม่แสดง) ใช้เนื้อหมูหลังจาก centrifuged เม็ดแบคทีเรียโดยใช้ชุดดีเอ็นเอของแบคทีเรีย TIANamp ถูกเบื้องต้นทดสอบประสิทธิภาพของพวกเขาในการรับดีเอ็นเอ amplifiable จากหมู ตัวอย่างแล้วทดสอบใช้การ multiplex PCR assay สำหรับการเปรียบเทียบอย่างเดียวกันก็ยังขยาย โดย PCR ดูเพล็กซ์ (เป้าหมาย: 16S rRNA และแต่ละยีน pathogenspecific โดยเงื่อนไขเดียวเป็นแบบ multiplex PCR) การประเมินหลายวิธีการศึกษาตรวจสอบประสิทธิภาพของระบบที่ได้รับผลกระทบ ในการศึกษานี้ วงเงินตรวจ ด้วย PCR หน้าหลังโดดเด่นสำหรับซัล S. หมอเทศข้างลาย L. monocytogenes, Y. enterocolitca และ O157:H7 E. coli inoculated ละลงบนหมู 59, 23, 3, 12 และ 35 cfu/mL (ตาราง 3a) จำกัดตรวจสอบ โดย multiplex PCR หลังจากเติมเต็มสำหรับซัล S. หมอเทศข้างลาย L. monocytogenes, Y. enterocolitca และ O157:H7 E. coli ตรวจพบระดับของ 142, 51, 9, 33 และ 670 cfu/mL ตามลำดับ ในหมู (ตาราง 3b) สำหรับหมู inoculated มีชีวิตห้ากัน สำเร็จความไวเพิ่มขึ้นสำหรับ O157:H7 E. coliเมื่อดูเพล็กซ์ PCR ถูกใช้แทน multiplex PCR โชคดี การ multiplex PCR ทำงานส่วน 4แบคทีเรียที่มีรายงานการเกิดในหมู ความไวต่ำของ PCR multiplex สำหรับ E. coli O157:H7 สามารถการใช้กระบวนการบ่อเดียวกันที่ใช้สำหรับอื่น ๆ 4 ชนิด แต่แล้ว วิเคราะห์การสกัดดีเอ็นเอโดยใช้ PCR ดูเพล็กซ์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

S . aureus และ y enterocolitica CFU / ml จาก 102 ในน้อยกว่า 10 CFU / ml monocytogenes ลิตร กับขั้นตอนการค้างคืนในสื่อวัฒนธรรม ผลที่ได้รับการยืนยันโดยการทดสอบเพิ่มเติมที่ 103 CFU / ml สามารถเชื่อถือ
ถูกประเมินเป็นขีดจำกัดของระบบเมื่อใช้กับเชื้อแบคทีเรีย ( ข้อมูลไม่แสดง )

หลังจากระดับการหมู ,การใช้แบคทีเรียแบคทีเรีย เม็ด tianamp ดีเอ็นเอการทดสอบประสิทธิภาพของชุดทดสอบในการขอรับ
amplifiable DNA จากเนื้อหมู ตัวอย่างที่ทดสอบโดยใช้วิธี PCR มัลติเพล็กซ์ สำหรับการเปรียบเทียบตัวอย่างเดียวกันนี้ยังถูกขยายโดยวิธี PCR ( เป้าหมาย : ดูเพล็กซ์ 16S rRNA and each of the pathogenspecific genes separately using the same conditions as the multiplex PCR) to evaluate how multiple pathogen detection affected the performance of the system. In this study, the detection limit by duplex PCR after enrichment for Salmonella, S. aureus, L. monocytogenes, Y. enterocolitca and E. coli O157:H7 inoculated individually onto pork were 59, 23, 3, 12 and 35 cfu/mL (Table 3a). The detection limit by multiplex PCR after enrichment for Salmonella, S. aureus, L. monocytogenes, Y. enterocolitca and E. coli O157:H7 were detected at levels of 142, 51, 9, 33 and 670 cfu/mL, respectively, in the pork (Table 3b). For pork inoculated with the five organisms together, increased sensitivity was achieved for E. coli O157:H7
เมื่อเพล็กซ์ PCR ใช้แทน multiplex PCR โชคดี , เทคนิค multoplex PCR ทำงานที่ดีที่สุดสำหรับ 4
แบคทีเรียที่ได้รับการรายงานที่จะเกิดขึ้นในหมู ลดความไวของเชื้อ E . coli multiplex เป็นสมาชิก : H7 สามารถ
addressed โดยใช้กระบวนการที่ใช้สำหรับการเดียวกันอีก 4 ชนิด แต่วิเคราะห์
สกัดดีเอ็นเอโดยใช้ Duplex PCR