2.4. Enzyme assay2.4.1. Radial enzy

2.4. Enzyme assay
2.4.1. Radial enzyme diffusion
Keratinolytic protease activity of the crude extract was
initially detected and quantified by radial diffusion of the enzyme
through skim milk and keratin as substrate containing gel based
on a modified method of Walsh et al. (2005). Skim milk and
keratin gel plates were prepared as has been outlined in Section
2.2, with each Petri dish (diameter 85 cm) containing 20 mL of
media. For detection of keratinolytic protease activity during
screening, 0.1 mL aliquots of each sample were added to circular
wells (7 mm diameter) punched in the gels and the plates were
incubated at 45 C for 48 h. The plates were examined every 6 h
interval to measure the zones of hydrolysis by direct visual inspection
through an arbiter scale and contrast was improved by
flooding the plates with 10% tannic acid. Keratinolytic protease
activity was determined in a semi-quantitative manner by
measuring the diameters of the zones of hydrolysis observed. The
linear relationship between the diameter of the zone of hydrolysis
and the log of keratinolytic protease activity was confirmed
using a commercial protease product (SigmaeAldrich, USA)
(Walsh et al., 2005).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.4. เอนไซม์ทดสอบ2.4.1. รัศมีเอนไซม์แพร่Keratinolytic รติเอสกิจกรรมของสารสกัดหยาบได้ตอนแรกที่ตรวจพบ และวัดประจุรัศมีของเอนไซม์นมพร่องมันเนยและเคราเป็นพื้นผิวที่ประกอบด้วยเจตามในการวิธีการแก้ไขของวอลช์ et al. (2005) นมพร่องมันเนย และเคราเจจานวนมีการระบุในส่วน2.2 กับแต่ละจานเพาะเชื้อ (เส้นผ่าศูนย์กลาง 85 ซม.) ประกอบด้วย 20 มล.สื่อ สำหรับการตรวจหา keratinolytic รติเอสกิจกรรมระหว่างคัดกรอง aliquots 0.1 mL ของแต่ละอย่างเพิ่มวงกลมหลุม (เส้นผ่าศูนย์กลาง 7 มม.) เจาะรูในการเจล และมีแผ่นได้รับการกก 45 c เป็นเวลา 48 ชม แผ่นถูกตรวจสอบทุก 6 ชมช่วงการวัดโซนสลาย โดยการตรวจสอบโดยตรงผ่านการตัดสิน มาตราส่วนและความเปรียบต่างถูกปรับปรุงโดยน้ำท่วมแผ่น ด้วยกรดคสาร 10% Keratinolytic รติเอสกำหนดกิจกรรมในลักษณะกึ่งเชิงปริมาณด้วยวัดเส้นผ่าศูนย์กลางของโซนสลายสังเกต การความสัมพันธ์เชิงเส้นระหว่างเส้นผ่าศูนย์กลางของโซนสลายและบันทึกกิจกรรมรติเอส keratinolytic ได้รับการยืนยันใช้ผลิตภัณฑ์พาณิชย์รติเอส (SigmaeAldrich สหรัฐอเมริกา)(วอลช์และ al. 2005)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.4 เอนไซม์ทดสอบ
2.4.1 รัศมีเอนไซม์แพร่
Keratinolytic กิจกรรมโปรติเอสของสารสกัดหยาบถูก
ตรวจพบครั้งแรกและวัดโดยการแพร่รัศมีของเอนไซม์
ผ่านนมพร่องมันเนยและเคราตินเป็นสารตั้งต้นที่มีเจล
โดยวิธีการแก้ไขของวอลช์, et al (2005) นมพร่องมันเนยและ
เจลเคราตินแผ่นได้จัดทำขึ้นตามที่ได้รับการระบุไว้ในมาตรา
2.2 กับแต่ละจาน Petri (เส้นผ่าศูนย์กลาง 85 ซม.) ที่มี 20 มลของ
สื่อ สำหรับการตรวจสอบของกิจกรรมโปรติเอส keratinolytic ในระหว่างการ
ตรวจคัดกรอง 0.1 aliquots มลแต่ละตัวอย่างถูกเพิ่มเข้าไปในวงกลม
หลุม (เส้นผ่าศูนย์กลาง 7 มิลลิเมตร) เจาะในเจลและแผ่นที่ถูก
บ่มที่อุณหภูมิ 45 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง แผ่นมีการตรวจสอบทุก 6 ชั่วโมง
ช่วงเวลาในการวัดโซนของการย่อยสลายโดยการตรวจสอบภาพโดยตรง
ผ่านระดับผู้ตัดสินและความคมชัดได้รับการปรับปรุงโดย
น้ำท่วมแผ่นที่มีกรดแทนนิค 10% น้ำย่อย Keratinolytic
กิจกรรมที่ถูกกำหนดในลักษณะกึ่งเชิงปริมาณโดย
การวัดขนาดเส้นผ่าศูนย์กลางของโซนของไฮโดรไลซิสังเกต
ความสัมพันธ์เชิงเส้นตรงระหว่างเส้นผ่านศูนย์กลางของโซนของการย่อยสลายได้
และบันทึกกิจกรรมโปรติเอส keratinolytic ได้รับการยืนยัน
โดยใช้น้ำย่อยผลิตภัณฑ์ในเชิงพาณิชย์ (SigmaeAldrich, สหรัฐอเมริกา)
(วอลช์ et al., 2005)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.4 . เอนไซม์ การทดสอบเครื่องมือกำจัดเพื่อย้าย . เอนไซม์แบบรัศมีกิจกรรมของเอนไซม์โปรติเอสที่จะย่อยเคอราตินสกัด คือเริ่มตรวจพบและ quantified โดยการแพร่กระจายรัศมีของเอนไซม์ผ่านหางนมผงและ Keratin เป็นสับสเตรทที่มีเจลตามที่ดัดแปลงมาจากวิธีของวอลช์ et al . ( 2005 ) หางนมผงและเคราตินเจลแผ่นเตรียมไว้ตามที่มีการระบุไว้ในมาตรา2.2 กับ Petri แต่ละจาน ( ขนาด 85 ซม. ) บรรจุ 20 มล.สื่อ สำหรับการตรวจสอบกิจกรรมของเอนไซม์โปรติเอสที่จะย่อยเคอราตินในระหว่างการคัดกรอง , 0.1 ml เฉยๆของแต่ละตัวอย่างมีการเพิ่มวงกลมเวลส์ ( 7 มม. เส้นผ่าศูนย์กลาง ) เจาะในเจลและแผ่นคือบ่มที่อุณหภูมิ 45 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 48 ชั่วโมง แผ่นทดสอบทุก 6 ชม.ช่วงวัดโซนการย่อยโดยการตรวจสอบภาพโดยตรงผ่านการเดินทางขนาดและความคมชัดดีขึ้นโดยน้ำท่วมจานกับ 10% กรดแทนนิก . และเอนไซม์ที่จะย่อยเคอราตินกิจกรรมที่ถูกกำหนดในลักษณะกึ่งปริมาณ โดยวัดเส้นผ่าศูนย์กลางของโซนการย่อย ) ที่ความสัมพันธ์เชิงเส้นระหว่างเส้นผ่านศูนย์กลางของเขตของน้ำมันปาล์มและบันทึกกิจกรรมของเอนไซม์โปรติเอสยืนยันที่จะย่อยเคอราตินใช้ผลิตภัณฑ์เชิงพาณิชย์ ( sigmaealdrich , USA ) และเอนไซม์( วอช et al . , 2005 )