To determine the analytical sensiti

To determine the analytical sensitivity of the assay, the
limit of detection was identified using a plasmid containing part of the 18 S rRNA gene from P. knowlesi.
Ten-fold serial dilutions of this plasmid were prepared
and served as the template in both the Plasprobe and Pk
probe real-time PCR assays (Table 1). Based on the cycle threshold (Ct) values, the Pk probe was more sensitive in detecting the target DNA sequence compared
with the Plasprobe. This was observed in all dilutions
tested. Despite this, the limit of detection was 10 copies
of template per PCR reaction for both real-time assays
and the efficiencies of the two PCR reactions were very
similar (94% for Plasprobe and 95% for Pk probe). Both
assays were linear between 10 and 106 copies of template DNA The dynamic range of the assay was determined using
serial dilutions of genomic DNA extracted from a
patient sample infected with P. knowlesi (Table 1). As
observed with the plasmid DNA, the Pk probe reaction
had lower Ct values, yet the overall sensitivity of the
two assays was similar. Both real-time PCR assays
detected P. knowlesi template over a dynamic range of 5
log dilution

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เพื่อกำหนดระดับความลับของวิเคราะห์ วิเคราะห์การขีดจำกัดของการตรวจสอบที่ระบุใช้ plasmid ที่ประกอบด้วยส่วนของยีน S rRNA 18 จาก P. knowlesiTen-fold dilutions ประจำของ plasmid นี้ถูกเตรียมไว้และเป็นแบบ Plasprobe และ Pkโพรบแบบเรียลไทม์ PCR assays (ตาราง 1) ขึ้นอยู่กับค่าขีดจำกัด (Ct) ของวงจร โพรบ Pk สำคัญมากในการตรวจหาดีเอ็นเอเป้าหมายลำดับเปรียบเทียบกับ Plasprobe นี้ถูกพบในทั้งหมด dilutionsทดสอบ แม้นี้ ขีดจำกัดของการตรวจสอบคือ สำเนา 10ของแม่ต่อปฏิกิริยา PCR สำหรับ assays ทั้งแบบเรียลไทม์และประสิทธิภาพของปฏิกิริยา PCR 2 ถูกมากคล้ายกัน (94% สำหรับ Plasprobe ก 95% สำหรับโพรบ Pk) ทั้งสองอย่างassays มีเส้นระหว่าง 10 และ 106 สำเนาของแม่แบบกำหนดช่วงแบบไดนามิกของการวิเคราะห์โดยใช้ดีเอ็นเอdilutions ประจำของ genomic DNA ที่สกัดจากการตัวอย่างผู้ป่วยที่ติดเชื้อ P. knowlesi (ตาราง 1) เป็นสังเกต มี plasmid DNA ปฏิกิริยาโพรบ Pkมีค่า Ct ล่าง แต่ความไวรวมของการassays สองคล้ายกันได้ Assays ทั้ง PCR แบบเรียลไทม์แม่ตรวจพบ P. knowlesi ช่วงแบบไดนามิกของ 5ล็อกเจือจาง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การตรวจสอบความไวของการวิเคราะห์ทดสอบ,
ขีด จำกัด ของการตรวจสอบที่ถูกระบุโดยใช้พลาสมิดที่มีส่วนของยีน S rRNA 18 จาก P. knowlesi.
สิบเท่าเจือจางอนุกรมของพลาสมิดที่ถูกจัดทำขึ้นนี้
และทำหน้าที่เป็นแม่แบบในทั้ง Plasprobe และ Pk
สอบสวนเวลาจริงการตรวจ PCR (ตารางที่ 1) ขึ้นอยู่กับเกณฑ์วงจร (กะรัต) ค่าสอบสวน Pk ก็มีความไวในการตรวจหาลำดับดีเอ็นเอเป้าหมายเมื่อเทียบ
กับ Plasprobe นี้ได้รับการตั้งข้อสังเกตในการเจือจางทั้งหมด
ผ่านการทดสอบ อย่างไรก็ตามเรื่องนี้ขีด จำกัด ของการตรวจสอบคือ 10 สำเนา
ของแม่ต่อปฏิกิริยา PCR สำหรับการตรวจทั้งเรียลไทม์
และมีประสิทธิภาพของทั้งสองปฏิกิริยา PCR มีมาก
ที่คล้ายกัน (94% สำหรับ Plasprobe และ 95% สำหรับการสอบสวน Pk) ทั้ง
การตรวจเป็นเชิงเส้นระหว่าง 10 และ 106 สำเนาของแม่แบบดีเอ็นเอช่วงแบบไดนามิกของการทดสอบที่ถูกกำหนดโดยใช้
เจือจางอนุกรมของดีเอ็นเอที่สกัดได้จาก
กลุ่มตัวอย่างผู้ป่วยที่ติดเชื้อ P. knowlesi (ตารางที่ 1) ในฐานะที่เป็น
ข้อสังเกตที่มีพลาสมิดดีเอ็นเอปฏิกิริยาสอบสวน Pk
มีค่าต่ำกว่ากะรัตยังไวโดยรวมของ
ทั้งสองชุดตรวจที่มีความคล้ายคลึง ทั้งสองแบบ real-time การตรวจ PCR
ตรวจพบ P. knowlesi แม่แบบในช่วงแบบไดนามิกของ 5
บันทึกการเจือจาง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เพื่อศึกษาวิเคราะห์ความไวของการทดสอบขีดจำกัดของการตรวจหา ,
ถูกระบุโดยใช้พลาสมิดที่มีส่วนหนึ่งของ 18 s rRNA ยีนจากหน้า knowlesi .
เจือจางอนุกรมสิบพับพลาสมิดนี้เตรียม
และการทํางานเป็นแม่แบบทั้งในและ plasprobe PK
โพรบเรียลไทม์ PCR ) ( ตารางที่ 1 ) ตามวัฏจักรธรณี ( CT ) ค่าPK สอบสวนมีความอ่อนไหวในการตรวจหาดีเอ็นเอ เปรียบเทียบกับเป้าหมายตาม
plasprobe . นี้พบว่าทุกวิธีการ
ทดสอบ แม้นี้ , ขีด จำกัด ของการตรวจสอบเป็น 10 ฉบับต่อปฏิกิริยา PCR
แม่แบบสำหรับทั้ง 2 วิธีเรียลไทม์
และประสิทธิภาพของทั้งสองเทคนิคปฏิกิริยาคล้ายกันมาก
( 94 ) plasprobe และ 95% สำหรับ PK probe ) ทั้ง
หรือเป็นเส้นตรงระหว่าง 10 และ 106 สำเนาดีเอ็นเอแม่แบบช่วงแบบไดนามิกของการทดสอบคือการพิจารณาวิธีการ
อนุกรมดีเอ็นเอที่ได้จากผู้ป่วยติดเชื้อ P
ตัวอย่าง knowlesi ( ตารางที่ 1 ) โดย
สังเกตกับดีเอ็นเอพลาสมิด , PK ตรวจสอบปฏิกิริยา
ได้ค่า CT ลดลง แต่ความไวโดยรวมของ
2 วิธีใกล้เคียงกันคือ ทั้งแบบ PCR สามารถตรวจพบ
Pแม่แบบ knowlesi ช่วงแบบไดนามิกของ 5
( เข้าสู่ระบบ