Analytical procedures
The concentration of norfloxacin in serum samples was estimated
by a standard microbiological assay using Escherichia coli ATCC
25922 as test micro-organism [8]. This method estimated the level
of drug having antibacterial activity, without differentiating between
the parent drug and its active metabolites. Standard curves were
constructed using antibacterial free serum collected from goldfishes.
The medium was prepared by dissolving 9.5 g Mueller–Hinton agar
in 250 ml distilled water in a 500 ml flat-bottomed flask, which was
autoclaved for 20 min. After cooling to 50°C in a water bath, 0.4 ml of
the diluted suspension of reference organism was added to the media.
Six wells, 8 mm in diameter were cut at equal distances in standard
Petri dishes containing 25 ml seeded agar. The wells were filled with
100 μl of either the test samples or norfloxacin standards. The plates
were kept at room temperature for 2 h before being incubated at 37°C
for 18 h. Zones of inhibition were measured using micrometers, and
the norfloxacin concentrations in the test samples were calculated
from the standard curve. The method was validated in terms of
linearity, sensitivity, recovery, intra-day and inter-day precision.
Semi-logarithmic plots of the inhibition zone diameter, versus
standard norfloxacin concentrations in serum, were linear between
0.05 and 20 μg ml-1, with a typical correlation coefficient of 0.990 (for
the standard curve). The limit of quantification of the norfloxacin
assay was 0.05 µg ml-1. The percentage recoveries were determined
by comparing the inhibition zones of blank samples spiked with
different amounts of drug and treated as any sample, with the
inhibition zones of the same standards prepared in phosphate buffer
(n=6). The mean percentage recovery of norfloxacin from serum was
96.17 ± 6.79%. Intra-assay variations were determined by measuring
six replicates (n=6) of three standard samples used for calibration
curves [low (0.1 µg ml-1), medium (1 µg ml-1), and high (10 µg ml-1)]
on the same day. The intra-assay variation coefficient was 3-5% for
serum. An inter-assay precision was determined by assaying the three
standard samples on three separate days. The inter-assay variation
coefficient was 5-8% for serum. The intra- and inter-day precision
and accuracy of the assay were determined by percent coefficient of
variation (CV). The coefficient of variation was calculated as follows:
CV (%) = (standard deviation/mean) ×100%
ขั้นตอนการวิเคราะห์ความเข้มข้นของ นอร์ฟล็อกซาซินในตัวอย่างซีรั่มประมาณโดยการใช้มาตรฐานทางจุลชีววิทยาใน Escherichia coli ATCCสามารถเป็นแบบทดสอบชีวิตขนาดเล็ก [ 8 ] วิธีนี้ประเมินระดับของยาที่มีฤทธิ์ต้านแบคทีเรีย ไม่มีความแตกต่างระหว่างผู้ปกครองและใช้ยาหลายชนิด . เส้นโค้งมาตรฐาน ได้แก่สร้างโดยใช้แบคทีเรียฟรีเซรั่มที่รวบรวมจากทอง .สื่อถูกเตรียมโดยละลาย 9.5 กรัม มูลเลอร์ และวุ้น ฮินตัน250 มล. น้ำกลั่นใน 500 มล. ขวดแบน bottomed , ซึ่งคือสังเคราะห์ 20 นาที หลังจากเย็น 50 ° C ในการอาบน้ำ , 0.4 มิลลิลิตรการเจือจางของสิ่งมีชีวิตอ้างอิงเพิ่มสื่อ6 บ่อ 8 มม. ที่ถูกตัดที่ระยะทางเท่ากันในมาตรฐานจานเลี้ยงเชื้อที่มี 25 ml seeded วุ้น บ่อที่เต็มไปด้วย100 μ L ของการทดสอบตัวอย่างมาตรฐาน หรือนอร์ฟล็อกซาซิน . ใส่แผ่นเก็บที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 2 ชั่วโมง ก่อนที่จะถูกบ่มที่ 37 ° C18 ชั่วโมง โซนของการยับยั้งการใช้ไมโครมิเตอร์วัด และการแยก ( ในตัวอย่างทดสอบได้จากการคำนวณจากเส้นโค้งมาตรฐาน วิธีตรวจสอบในแง่ของเป็นเส้นตรง , ไว , กู้คืน , วันภายในและระหว่างวันมีความแม่นยำกึ่งลอการิทึมแปลงในบริเวณยับยั้งเส้นผ่าศูนย์กลาง เมื่อเทียบกับมาตรฐานนอร์ฟล็อกซาซินความเข้มข้นในเลือดเป็นเส้นตรงระหว่าง0.05 และ 20 μ G แน่นอน ด้วยค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์โดยทั่วไปของ 0.990 ( สำหรับเส้นโค้งมาตรฐาน ) ขีดจำกัดของปริมาณของ นอร์ฟล็อกซาซินการทดสอบนัยสำคัญ 0.05 กรัมµแน่นอน . เปอร์เซ็นต์เมื่อสารละลายโดยการเปรียบเทียบการยับยั้งโซน C ตัวอย่างที่ว่างเปล่าแตกต่างของปริมาณยา และถือว่าเป็นตัวอย่างใด ๆ , กับและโซนของมาตรฐานเดียวกันในฟอสเฟตบัฟเฟอร์ที่เตรียมไว้( n = 6 ) ค่าเฉลี่ยร้อยละของการกู้คืนที่แยกจากซีรั่มคือ96.17 ± 6.79 % วิธีวิเคราะห์โดยการวัดการเปลี่ยนแปลงภายใน6 แบบ ( 6 ) 3 ตัวอย่างที่ใช้สำหรับการสอบเทียบมาตรฐานเส้นโค้ง [ ต่ำ ( 0.1 กรัมµแน่นอน ) กลาง ( 1 µกรัมแน่นอน ) และสูง ( 10 µกรัมแน่นอน ) ]ในวันเดียวกัน ภายในการเปลี่ยนแปลงค่าสัมประสิทธิ์ 3-5% สำหรับการทดสอบเซรั่ม เป็นวิธีวิเคราะห์ assaying ระหว่างความสามตัวอย่างมาตรฐานในสามวันที่แยกต่างหาก ระหว่างการทดสอบการเปลี่ยนแปลงจำนวน 5-8 % สำหรับ เซรั่ม ภายในระหว่างวันและความแม่นยำและความถูกต้องของวิธีวิเคราะห์โดยค่าร้อยละการเปลี่ยนแปลง ( CV ) สัมประสิทธิ์ของการแปรผันคำนวณได้ดังนี้CV ( % ) = ( ส่วนเบี่ยงเบนมาตรฐาน / หมายถึง ) × 100 %
การแปล กรุณารอสักครู่..