Procedure for EIA of progesterone i

Procedure for EIA of progesterone in feces and plasma was performed as described
by Isobe and Nakao (2003), with some modifications. The fecal solution (20
l) with
90
l of double distilled water, or plasma (100
l), was extracted with petroleum ether
(3 ml). The ether phase was decanted into another tube and evaporated. Borate buffer
(0.05M boric acid, 0.2% BSA [fraction V, Sigma, St. Louis, MO, USA] and 0.1 mg/ml
thimerosal) was added to the tube for suspension of progesterone. This extracted sample
was added to the well of plates that were previously coated with goat anti-rabbit IgG
antibody (ICN Biomedical, Aurora, OH, USA). Then, antibody against progesterone-3(E)-
carboxymethyloxime conjugated to BSA and horse radish peroxidase labeled-progesterone
(Sigma) were applied to the wells, followed by incubation at room temperature for 2 h. After
washing, substrate solution containing 4 mg/ml o-phenylenediamine, 0.2M citric acid
and 0.02% H2O2 was added to the wells followed by incubation for 30 min at room temperature.
The reaction was stopped by addition of 6N H2SO4. The optical density was
measured for its absorbance at 492 nm, using a microplate reader (MPR-A4i, TOSOH,
Tokyo)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ขั้นตอน EIA ของโปรเจสเตอโรในอุจจาระและพลาสม่าทำดังที่
โดย Isobe และ Nakao (2003), มีการปรับเปลี่ยนบางอย่าง โซลูชัน fecal (20 ลิตร) ด้วย
คู่ 90 ลิตรน้ำกลั่น หรือพลาสม่า (100 ลิตร), ถูกสกัด ด้วยปิโตรเลียมอีเทอร์
(3 ml) เฟสอีเทอร์ decanted เป็นหลอดอื่น และหายไป บัฟเฟอร์ borate
(0.05M boric กรด 0.2% บีเอสเอ [เศษ V ซิก St. Louis, MO สหรัฐอเมริกา] และ 0.1 mg/ml
thimerosal) ถูกเพิ่มหลอดสำหรับระงับเอกสารการ ตัวอย่างนี้แยก
ถูกเพิ่มด้วยของแผ่นที่ก่อนหน้านี้ถูกเคลือบ ด้วยครีมป้องกันกระต่าย IgG
แอนติบอดี (ICN ทางชีวการแพทย์ ออโรร่า OH สหรัฐอเมริกา) แล้ว แอนติบอดีต่อต้านโปรเจสเตอโร-3 (E) -
กลวง carboxymethyloxime บีเอสเอ และม้าหัวผักกาด peroxidase ป้ายโปรเจสเตอโร
(ซิกมา) ที่ใช้กับบ่อ ตาม ด้วยการบ่มที่อุณหภูมิห้องใน 2 h หลังจาก
ซักผ้า แก้ไขปัญหาพื้นผิวประกอบด้วย 4 mg/ml o phenylenediamine กรดซิตริก 0.2M
และเพิ่ม 0.02% H2O2 เพื่อบ่อตาม ด้วยฟักตัวใน 30 นาทีที่อุณหภูมิห้อง
หยุดปฏิกิริยา โดยเพิ่ม 6N กำมะถัน มีความหนาแน่นออปติคอล
วัด absorbance ของที่ 492 nm ใช้อ่าน microplate (MPR-A4i, TOSOH,
โตเกียว)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กระบวนการ EIA ของโปรเจสเตอโรนในอุจจาระและเลือดถูกดำเนินการตามที่อธิบายไว้
โดยโซเบะ และ นากาโอะ ( 2003 ) , มีการปรับเปลี่ยน โซลูชั่นโคลิ ( 20
L )

90 ลิตรคู่กลั่น หรือพลาสมา ( 100
L ) สาร
ปิโตรเลียมอีเทอร์ ( 3 ml . ) อีเทอร์ระยะคือ รินเข้าไปในท่ออีก และระเหย บอเรตบัฟเฟอร์
( 0.05m boric acid 0.2 % BSA [ ) V , Sigma , เซนต์ หลุยส์ โมประเทศสหรัฐอเมริกา ] และ 0.1 มก. / มล.
3 ) คือการเพิ่มหลอดสำหรับช่วงล่างของโพรเจสเทอโรน นี้สกัดตัวอย่าง
ถูกเพิ่มเข้าไปในจานที่เคยเคลือบป้องกันกระต่ายแพะ
แอนติบอดี IgG ( ICN ชีวการแพทย์ , ออโรร่า , โอ้ , USA ) จากนั้นแอนติบอดี progesterone-3 ( E ) -
carboxymethyloxime conjugated กับ BSA และม้าหัวไชเท้ามีฮอร์โมนโปรเจสเตอโรน
ติดป้าย( Sigma ) มาใช้กับ เวลส์ ตามด้วยการบ่มที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 2 ชั่วโมง หลังจาก
ล้างพื้นผิวโซลูชั่นที่มี 4 มก. / มล. o-phenylenediamine 0.2m
, กรดซิตริกและ 0.02 % แบตเติมบ่อตามบ่มเป็นเวลา 30 นาที ที่อุณหภูมิห้อง
ปฏิกิริยาที่ถูกหยุดโดยการทัวร์กรดซัลฟิวริก . ความหนาแน่นของแสง คือ วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ของ
492 นาโนเมตรการใช้เครื่องอ่านพื้นที่ภาคเหนือของประเทศไทย ( mpr-a4i TOSOH
, , โตเกียว )