In the present investigation, we ha

In the present investigation, we have modified a Wt (wild type) lipase
gene (JkP01) by error prone PCR, which was initially cloned from
metagenomic DNA, extracted and purified from hot spring (Sharma et
al., 2007). Our results on Wt lipase demonstrated that enzyme was
stable up to 50 °C, and its activity declined sharply at 60 °C
(t1/2 ~ 5 min) (Sharma et al., 2011). Attempts were therefore made
to generate a thermostable mutant lipase using Wt gene, by error
prone PCR. A mutagenic library was constructed and screened, functional
screening of the library resulted in a mutant lipase (lip M1),
with mutation N355K in the mature polypeptide. The lip M1 demonstrated
144 folds enhanced thermostability over the Wt enzyme,
when assayed at 60 °C. Both enzymes (lip M1 and Wt) were characterized
in detail using biochemical, biophysical and computational
approaches.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ในปัจจุบัน เราได้ปรับเปลี่ยนเป็นเอนไซม์ไลเปส Wt (ไวลด์ไทป์)ยีน (JkP01) โดยข้อผิดพลาดเสี่ยง PCR ซึ่งถูกเริ่มโคลนจากmetagenomic DNA สกัด และบริสุทธิ์จากสปริง (Sharma ร้อยเอ็ดal., 2007) แสดงผลของเราบนเอนไซม์ไลเปส Wt เอนไซม์ที่ถูกมีเสถียรภาพถึง 50 ° C และกิจกรรมของปฏิเสธอย่างรวดเร็วที่ 60 ° C(t1/2 ~ 5 นาที) (Sharma et al., 2011) จึงได้ทำความพยายามการสร้างเอนไซม์ไลเปสกลายพันธุ์ thermostable ใช้ยีน Wt ข้อผิดพลาดPCR มัก สร้าง และ ฉาย งานรี mutagenicคัดกรองของไลบรารีให้เอนไซม์ไลเปสที่กลายพันธุ์ (lip M1),มีการกลายพันธุ์ N355K ใน polypeptide ผู้ใหญ่ แสดงให้เห็นว่า lip M1144 พับเพิ่ม thermostability ผ่านเอนไซม์ Wtเมื่อ assayed ที่ 60 องศาเซลเซียส เอนไซม์ทั้งสอง (ปาก M1 และ Wt) มีลักษณะรายละเอียดใช้ชีวเคมี biophysical และคำนวณแนวทางการ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ในการตรวจสอบปัจจุบันเรามีการปรับเปลี่ยนน้ำหนัก (ป่าชนิด) เอนไซม์ไลเปส
ยีน (JkP01) จากข้อผิดพลาดที่มีแนวโน้ม PCR ซึ่งเป็นโคลนมาครั้งแรกจาก
ดีเอ็นเอ Metagenomic สกัดบริสุทธิ์จากน้ำพุร้อน (Sharma และ
al., 2007) ผลของเราเกี่ยวกับเอนไซม์ไลเปส ธ แสดงให้เห็นถึงการทำงานของเอนไซม์ที่เป็น
มีเสถียรภาพสูงสุดถึง 50 องศาเซลเซียสและกิจกรรมลดลงอย่างรวดเร็วที่ 60 ° C
(T1 / 2 ~ 5 นาที) (Sharma et al., 2011) พยายามทำให้ดังนั้น
ในการสร้างเอนไซม์ไลเปสที่กลายพันธุ์ที่ทนความร้อนโดยใช้ยีนน้ำหนักโดยข้อผิดพลาด
PCR คว่ำ ห้องสมุดกลายพันธุ์ที่ถูกสร้างและคัดกรองการทำงาน
การตรวจคัดกรองของห้องสมุดส่งผลให้เอนไซม์ไลเปสที่กลายพันธุ์ (ริมฝีปาก M1)
ที่มีการกลายพันธุ์ใน N355K polypeptide ผู้ใหญ่ ริมฝีปาก M1 แสดงให้เห็นถึง
144 เท่าเพิ่มขึ้นทนร้อนกว่าเอนไซม์น้ำหนัก,
เมื่อ assayed ที่ 60 ° C ทั้งเอนไซม์ (ริมฝีปาก M1 และน้ำหนัก) มีลักษณะ
ในรายละเอียดโดยใช้ทางชีวเคมีและชีวฟิสิกส์คำนวณ
วิธี

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ในการตรวจสอบปัจจุบันเรามีการแก้ไข WT ( ไพรม์ไทม์ ) ยีนไลเปส
( jkp01 ) โดยวิธี PCR มักจะผิดพลาด ซึ่งตอนแรกโคลน
เมตาจีโนมิค DNA ที่สกัดบริสุทธิ์จากบ่อน้ำพุร้อน ( Sharma et
al . , 2007 ) ผลของเราแสดงให้เห็นว่าเอนไซม์ไลเปสใน WT
มั่นคงถึง 50 ° C และกิจกรรมของมันลดลงอย่างรวดเร็วใน 60 ° C
( T1 / 2 ~ 5 นาที ) ( Sharma et al . , 2011 ) ความพยายามที่ได้ทำ
ดังนั้นการใช้ยีนกลายพันธุ์ในแบคทีเรีย โดยน้ำหนัก โดยข้อผิดพลาด
PCR ได้ง่าย ห้องสมุดถูกสร้างขึ้นจากสารก่อกลายพันธุ์และการทำงาน
การคัดเลือกห้องสมุดมีผลทำให้เอนไซม์กลายพันธุ์ ( ริมฝีปาก M1 )
n355k กับการกลายพันธุ์ในผู้ใหญ่ polypeptide . ริมฝีปาก M1 แสดง
144 เท่าเพิ่มทดลกว่า WT เอนไซม์
เมื่อปริมาณที่ 60 องศา ทั้งเอนไซม์ ( M1 ริมฝีปากและ WT ) มีลักษณะ
ในรายละเอียดการใช้งานคอมพิวเตอร์
ชีวกายภาพและวิธี