- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
Although studies have revealed that
Although studies have revealed that contaminated cattle drinking water is an important vehicle in the persistence and dissemination of E. coli O157:H7 on cattle farms, highly effective,
Inactivation of Enterohemorrhagic Escherichia coli in Rumen Content- or Feces-Contaminated Drinking Water for Cattle
Tong Zhao, Ping Zhao, [...], and Michael P. Doyle
Additional article information
ABSTRACT
Cattle drinking water is a source of on-farm Escherichia coli O157:H7 transmission. The antimicrobial activities of disinfectants to control E. coli O157:H7 in on-farm drinking water are frequently neutralized by the presence of rumen content and manure that generally contaminate the drinking water. Different chemical treatments, including lactic acid, acidic calcium sulfate, chlorine, chlorine dioxide, hydrogen peroxide, caprylic acid, ozone, butyric acid, sodium benzoate, and competing E. coli, were tested individually or in combination for inactivation of E. coli O157:H7 in the presence of rumen content. Chlorine (5 ppm), ozone (22 to 24 ppm at 5°C), and competing E. coli treatment of water had minimal effects (3 log CFU/ml reduction) at 21°C in killing E. coli O157:H7, O26:H11, and O111:NM in water heavily contaminated with rumen content (10:1 water/rumen content ratio [vol/wt]) or feces (20:1 water/feces ratio [vol/wt]). Among them, treatments A, B, and C killed >5 log CFU E. coli O157:H7, O26:H11, and O111:NM/ml within 30 min in water containing rumen content or feces, whereas treatment D inactivated approximately 3 to 4 log CFU/ml under the same conditions. Cattle given water containing treatment A or C or untreated water (control) ad libitum for two 7-day periods drank 15.2, 13.8, and 30.3 liters/day, respectively, and cattle given water containing 0.1% lactic acid plus 0.9% acidic calcium sulfate (pH 2.1) drank 18.6 liters/day. The amounts of water consumed for all water treatments were significantly different from that for the control, but there were no significant differences among the water treatments. Such treatments may best be applied periodically to drinking water troughs and then flushed, rather than being added continuously, to avoid reduced water consumption by cattle.
Escherichia coli O157:H7 has emerged in the last 10 years as an important food-borne pathogen (12, 15, 22, 30, 32, 36), with an estimated 73,000 cases of E. coli O157 infection annually in the United States (23). Cattle are a major reservoir of E. coli O157:H7 (2, 4, 5, 7), and cattle water troughs are important sources of the pathogen on farms (2, 4, 5, 7, 17, 20, 21, 27, 28, 37). Studies have further revealed that when present in cattle drinking water, the pathogen was disseminated to other cattle consuming the contaminated water (19, 29).
Genomic subtyping by pulsed-field gel electrophoresis of E. coli O157:H7 isolates from farms revealed that a single O157:H7 strain was dominant among isolates from cohort and noncohort cattle, water, and other positive samples (i.e., from feed, flies, a pigeon, etc.) on a farm (29). This information demonstrates that drinking water is an important vehicle for disseminating E. coli O157:H7 on the farm and that methods for treatment of drinking water on farms are needed for reduction of the pathogen.
Studies indicate that E. coli O157:H7 can survive in cattle drinking water for a long time (up to 12 months) (13, 19, 29). A variety of treatments have been evaluated for efficacy in killing E. coli O157:H7 in drinking water contaminated with cattle feces (9, 10, 18, 24). The results revealed that most had minimal effects on killing the pathogen, in part because these treatments were neutralized by organic materials present in feces. The objective of this study was to identify practical treatments to eliminate or control E. coli O157:H7 in drinking water by simulating on-farm conditions.
MATERIALS AND METHODS
Bacterial strains. Five isolates of E. coli O157:H7, i.e., 932 (a human isolate), E009 (a beef isolate), E0018 (a cattle isolate), E0122 (a cattle isolate), and E0139 (a deer jerky isolate); five isolates of E. coli O26:H11, i.e., strains DEC10E (a cattle isolate), DEC9E (a cattle isolate), DEC10B (a cattle isolate), 3079-97 (a human isolate), and 3183-96 (a human isolate); and five strains of E. coli O111:NM, i.e., strains 3208-95 (a human isolate), 0944-95 (a cattle isolate), 3287-97 (a human isolate), 4543-95 (a cattle isolate), and 0073-92 (a cattle isolate), were used as five-strain mixtures specific to each serotype. To facilitate the enumeration of these bacterial isolates, all strains were selected for resistance to nalidixic acid (50 μg/ml) according to procedures described previously (37). Each strain was grown individually in 10 ml of tryptic soy broth (TSB) (Becton Dickinson Microbiology Systems, Sparks, MD) containing 50 μg of nalidixic acid (NA) (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) per ml (TSB-NA) for 16 to 18 h at 37°C with agitation (150 rpm). The bacterial cells were sedimented three times by centrifugation (4,000 × g; 20 min); washed in 0.1 M phosphate-buffered saline (PBS), pH 7.2; and resuspended in PBS. The cell suspensions were adjusted with PBS to an optical density at 630 nm of 0.5 (approximately 108 CFU/ml). Five strains of the same serotype were combined at approximately equal cell numbers, which, for each individual strain and the five-strain mixture, were enumerated on tryptic soy agar (TSA) and sorbitol MacConkey agar (SMA) or MacConkey agar plates (all obtained from Becton Dickinson Microbiology Systems).
Rumen contents and feces. Rumen contents or feces from three different cattle were combined and used as a mixture. Rumen contents were collected from beef cattle at slaughter, and feces were collected from cattle on a beef farm, held at 4°C, and used within 7 days. Different samples obtained from the same slaughterhouse or farm were used for different trials.
Treatment with competing bacteria. A five-strain mixture of E. coli O157:H7 at 105 CFU/ml and a mixture of three strains of competing bacteria (E. coli 271, 786, and 797) (37) antagonistic to E. coli O157:H7 at 107 CFU/ml were added to different flasks containing a mixture of water and rumen content at ratios of 100:1, 50:1, 25:1, 10:1, and 5:1 and held at 21°C.
Chlorine and chlorine dioxide treatments. Standard chlorine solutions obtained from HACH Company (Loveland, CO) were freshly diluted for each experiment in deionized water to the required concentration according to a method described previously (39). The free-chlorine concentrations in the diluted chlorine solutions were determined with a Digital Titrator (HACH Co.). The E. coli O157:H7 suspension (1 ml) at 108 to 109 CFU/ml was added to 199 ml of water containing rumen content at ratios of 100:1, 50:1, 25:1, and 10:1 (vol/wt) and 5 ppm chlorine solution (4 ppm chlorine is the maximum residual disinfectant level allowed in drinking water by the Environmental Protection Agency) at 21°C and stirred with a magnetic stir bar in a 500-ml Erlenmeyer flask. Studies with chlorine dioxide were conducted using similar procedures.
Ozone treatments. Ozone was produced by a laboratory scale ozone generator (model H-50; Hess Machine International, Ephrata, PA) equipped with an oxygen concentrator (model AS-12; AirSep, Buffalo, NY), and ozone concentrations (ppm) were measured by the indigo colorimeter method. Ozonated (22 to 24 ppm at 5°C) water was mixed within 5 min with rumen content at ratios of 100:1, 50:1, 25:1, 10:1, and 5:1. Milli-Q water (Milli-Q Synthesis A10; Millipore Corp., Billerica, MA) was used as the control. One milliliter of a mixture of five strains of E. coli O157:H7 (108 CFU/ml) was mixed with 199 ml of the ozonated water with rumen content at 5°C and sampled at 0 to 20 min.
Chemical treatments. Chemicals, including lactic acid (0.05 to 0.5%; Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ), hydrogen peroxide (0.5%; Sigma Chemicals Inc., St. Louis, MO), sodium benzoate (0.1%; Fisher Scientific), acidic calcium sulfate (0.9 to 4.5%; Mionix Inc., Naperville, IL), caprylic acid (0.05 to 1.5%; Aldrich Chemicals Inc., Milwaukee, WI), butyric acid (0.5 to 4%; Aldrich Chemicals Inc.), propionic acid (0.5 to 4%; Sigma Chemicals Inc.), and chlorine dioxide (10 to 1,000 ppm; Aldrich Chemicals Inc.), were evaluated separately or as a combination. The concentrations used for each chemical evaluated were based on the results of previous studies conducted with the chemicals and E. coli O157:H7 in deionized water. The chemicals were diluted to appropriate concentrations in Milli-Q water (Milli-Q Synthesis A10; Millipore Corp.) initially tested with the pure cultures of E. coli O157:H7. The effective chemical or combination of different chemicals was further tested for killing effects at 21°C on E. coli O157:H7 in tap water containing rumen content at the different ratios described above.
Enumeration of nalidixic acid-resistant E. coli. At predetermined sampling times, 1.0 ml of the treated bacterial suspension was removed and mixed with 9.0 ml of neutralizing buffer (Becton Dickinson Microbiology Systems). Bacteria were serially (1:10) diluted in 0.1% peptone water, and 0.1 ml of each dilution was surface plated onto TSA containing 50 μg NA/ml (TSA-NA) and SMA containing 50 μg NA/ml (SMA-NA) in duplicate and incubated at 37°C for 24 h. Colonies typical of E. coli O157:H7 (sorbitol negative) we
Inactivation of Enterohemorrhagic Escherichia coli in Rumen Content- or Feces-Contaminated Drinking Water for Cattle
Tong Zhao, Ping Zhao, [...], and Michael P. Doyle
Additional article information
ABSTRACT
Cattle drinking water is a source of on-farm Escherichia coli O157:H7 transmission. The antimicrobial activities of disinfectants to control E. coli O157:H7 in on-farm drinking water are frequently neutralized by the presence of rumen content and manure that generally contaminate the drinking water. Different chemical treatments, including lactic acid, acidic calcium sulfate, chlorine, chlorine dioxide, hydrogen peroxide, caprylic acid, ozone, butyric acid, sodium benzoate, and competing E. coli, were tested individually or in combination for inactivation of E. coli O157:H7 in the presence of rumen content. Chlorine (5 ppm), ozone (22 to 24 ppm at 5°C), and competing E. coli treatment of water had minimal effects (3 log CFU/ml reduction) at 21°C in killing E. coli O157:H7, O26:H11, and O111:NM in water heavily contaminated with rumen content (10:1 water/rumen content ratio [vol/wt]) or feces (20:1 water/feces ratio [vol/wt]). Among them, treatments A, B, and C killed >5 log CFU E. coli O157:H7, O26:H11, and O111:NM/ml within 30 min in water containing rumen content or feces, whereas treatment D inactivated approximately 3 to 4 log CFU/ml under the same conditions. Cattle given water containing treatment A or C or untreated water (control) ad libitum for two 7-day periods drank 15.2, 13.8, and 30.3 liters/day, respectively, and cattle given water containing 0.1% lactic acid plus 0.9% acidic calcium sulfate (pH 2.1) drank 18.6 liters/day. The amounts of water consumed for all water treatments were significantly different from that for the control, but there were no significant differences among the water treatments. Such treatments may best be applied periodically to drinking water troughs and then flushed, rather than being added continuously, to avoid reduced water consumption by cattle.
Escherichia coli O157:H7 has emerged in the last 10 years as an important food-borne pathogen (12, 15, 22, 30, 32, 36), with an estimated 73,000 cases of E. coli O157 infection annually in the United States (23). Cattle are a major reservoir of E. coli O157:H7 (2, 4, 5, 7), and cattle water troughs are important sources of the pathogen on farms (2, 4, 5, 7, 17, 20, 21, 27, 28, 37). Studies have further revealed that when present in cattle drinking water, the pathogen was disseminated to other cattle consuming the contaminated water (19, 29).
Genomic subtyping by pulsed-field gel electrophoresis of E. coli O157:H7 isolates from farms revealed that a single O157:H7 strain was dominant among isolates from cohort and noncohort cattle, water, and other positive samples (i.e., from feed, flies, a pigeon, etc.) on a farm (29). This information demonstrates that drinking water is an important vehicle for disseminating E. coli O157:H7 on the farm and that methods for treatment of drinking water on farms are needed for reduction of the pathogen.
Studies indicate that E. coli O157:H7 can survive in cattle drinking water for a long time (up to 12 months) (13, 19, 29). A variety of treatments have been evaluated for efficacy in killing E. coli O157:H7 in drinking water contaminated with cattle feces (9, 10, 18, 24). The results revealed that most had minimal effects on killing the pathogen, in part because these treatments were neutralized by organic materials present in feces. The objective of this study was to identify practical treatments to eliminate or control E. coli O157:H7 in drinking water by simulating on-farm conditions.
MATERIALS AND METHODS
Bacterial strains. Five isolates of E. coli O157:H7, i.e., 932 (a human isolate), E009 (a beef isolate), E0018 (a cattle isolate), E0122 (a cattle isolate), and E0139 (a deer jerky isolate); five isolates of E. coli O26:H11, i.e., strains DEC10E (a cattle isolate), DEC9E (a cattle isolate), DEC10B (a cattle isolate), 3079-97 (a human isolate), and 3183-96 (a human isolate); and five strains of E. coli O111:NM, i.e., strains 3208-95 (a human isolate), 0944-95 (a cattle isolate), 3287-97 (a human isolate), 4543-95 (a cattle isolate), and 0073-92 (a cattle isolate), were used as five-strain mixtures specific to each serotype. To facilitate the enumeration of these bacterial isolates, all strains were selected for resistance to nalidixic acid (50 μg/ml) according to procedures described previously (37). Each strain was grown individually in 10 ml of tryptic soy broth (TSB) (Becton Dickinson Microbiology Systems, Sparks, MD) containing 50 μg of nalidixic acid (NA) (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) per ml (TSB-NA) for 16 to 18 h at 37°C with agitation (150 rpm). The bacterial cells were sedimented three times by centrifugation (4,000 × g; 20 min); washed in 0.1 M phosphate-buffered saline (PBS), pH 7.2; and resuspended in PBS. The cell suspensions were adjusted with PBS to an optical density at 630 nm of 0.5 (approximately 108 CFU/ml). Five strains of the same serotype were combined at approximately equal cell numbers, which, for each individual strain and the five-strain mixture, were enumerated on tryptic soy agar (TSA) and sorbitol MacConkey agar (SMA) or MacConkey agar plates (all obtained from Becton Dickinson Microbiology Systems).
Rumen contents and feces. Rumen contents or feces from three different cattle were combined and used as a mixture. Rumen contents were collected from beef cattle at slaughter, and feces were collected from cattle on a beef farm, held at 4°C, and used within 7 days. Different samples obtained from the same slaughterhouse or farm were used for different trials.
Treatment with competing bacteria. A five-strain mixture of E. coli O157:H7 at 105 CFU/ml and a mixture of three strains of competing bacteria (E. coli 271, 786, and 797) (37) antagonistic to E. coli O157:H7 at 107 CFU/ml were added to different flasks containing a mixture of water and rumen content at ratios of 100:1, 50:1, 25:1, 10:1, and 5:1 and held at 21°C.
Chlorine and chlorine dioxide treatments. Standard chlorine solutions obtained from HACH Company (Loveland, CO) were freshly diluted for each experiment in deionized water to the required concentration according to a method described previously (39). The free-chlorine concentrations in the diluted chlorine solutions were determined with a Digital Titrator (HACH Co.). The E. coli O157:H7 suspension (1 ml) at 108 to 109 CFU/ml was added to 199 ml of water containing rumen content at ratios of 100:1, 50:1, 25:1, and 10:1 (vol/wt) and 5 ppm chlorine solution (4 ppm chlorine is the maximum residual disinfectant level allowed in drinking water by the Environmental Protection Agency) at 21°C and stirred with a magnetic stir bar in a 500-ml Erlenmeyer flask. Studies with chlorine dioxide were conducted using similar procedures.
Ozone treatments. Ozone was produced by a laboratory scale ozone generator (model H-50; Hess Machine International, Ephrata, PA) equipped with an oxygen concentrator (model AS-12; AirSep, Buffalo, NY), and ozone concentrations (ppm) were measured by the indigo colorimeter method. Ozonated (22 to 24 ppm at 5°C) water was mixed within 5 min with rumen content at ratios of 100:1, 50:1, 25:1, 10:1, and 5:1. Milli-Q water (Milli-Q Synthesis A10; Millipore Corp., Billerica, MA) was used as the control. One milliliter of a mixture of five strains of E. coli O157:H7 (108 CFU/ml) was mixed with 199 ml of the ozonated water with rumen content at 5°C and sampled at 0 to 20 min.
Chemical treatments. Chemicals, including lactic acid (0.05 to 0.5%; Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ), hydrogen peroxide (0.5%; Sigma Chemicals Inc., St. Louis, MO), sodium benzoate (0.1%; Fisher Scientific), acidic calcium sulfate (0.9 to 4.5%; Mionix Inc., Naperville, IL), caprylic acid (0.05 to 1.5%; Aldrich Chemicals Inc., Milwaukee, WI), butyric acid (0.5 to 4%; Aldrich Chemicals Inc.), propionic acid (0.5 to 4%; Sigma Chemicals Inc.), and chlorine dioxide (10 to 1,000 ppm; Aldrich Chemicals Inc.), were evaluated separately or as a combination. The concentrations used for each chemical evaluated were based on the results of previous studies conducted with the chemicals and E. coli O157:H7 in deionized water. The chemicals were diluted to appropriate concentrations in Milli-Q water (Milli-Q Synthesis A10; Millipore Corp.) initially tested with the pure cultures of E. coli O157:H7. The effective chemical or combination of different chemicals was further tested for killing effects at 21°C on E. coli O157:H7 in tap water containing rumen content at the different ratios described above.
Enumeration of nalidixic acid-resistant E. coli. At predetermined sampling times, 1.0 ml of the treated bacterial suspension was removed and mixed with 9.0 ml of neutralizing buffer (Becton Dickinson Microbiology Systems). Bacteria were serially (1:10) diluted in 0.1% peptone water, and 0.1 ml of each dilution was surface plated onto TSA containing 50 μg NA/ml (TSA-NA) and SMA containing 50 μg NA/ml (SMA-NA) in duplicate and incubated at 37°C for 24 h. Colonies typical of E. coli O157:H7 (sorbitol negative) we
0/5000
แม้ว่าการศึกษาได้เปิดเผยว่า น้ำดื่มปนเปื้อนวัวเป็นพาหนะสำคัญในการคงอยู่และเผยแพร่ O157:H7 E. coli ในฟาร์มวัว มีประสิทธิภาพสูง,
ยกเลิกการเรียก Enterohemorrhagic Escherichia coli ในต่อเนื้อหาหรือ Feces-Contaminated น้ำดื่มสำหรับสัตว์เลี้ยง
ทองเจียว เส้าปิง, [...], และไมเคิล ดอยล์ P.
รายละเอียดเพิ่มเติม
นามธรรม
น้ำดื่มสัตว์เลี้ยงเป็นแหล่งของในฟาร์ม Escherichia coli O157:H7 ส่ง กิจกรรมจุลินทรีย์ของ disinfectants ควบคุม O157:H7 E. coli ในน้ำดื่มในฟาร์มมีบ่อย neutralized โดยสถานะของเนื้อหาต่อและมูลที่ปนเปื้อนในน้ำดื่มโดยทั่วไป รักษาเคมีต่าง ๆ รวมถึงกรดแลกติก กรดแคลเซียมซัลเฟต คลอรีน คลอรีนไดออกไซด์ ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ กรด caprylic โอโซน กรด butyric โซเดียม benzoate และแข่งขัน E. coli ถูกทดสอบแยกกัน หรือร่วมในการยกเลิกการเรียก O157:H7 E. coli ในต่อหน้าของเนื้อหาต่อ คลอรีน (5 ppm), โอโซน (22-24 แผ่นต่อนาทีที่ 5° C), และแข่งขัน E. coli บำบัดน้ำมีผลกระทบน้อยที่สุด (< ล็อก 1 CFU/ml ลด) บนฆ่า E. coli O157:H7 ในต่อหน้าของเนื้อหาต่อในน้ำต่ออัตราส่วนเนื้อหาของ 50:1 (vol/wt) และต่ำกว่า 4 เคมีบำบัดชุด รวม (i) 0.1% กรด 0.9% กรดแคลเซียมซัลเฟต และกรด caprylic 0.05% (รักษา A); (ii) 0.1% กรด 0.9% กรดแคลเซียมซัลเฟต และ benzoate 0.1% โซเดียม (รักษา B); (iii) 0.1% กรด 0.9% กรดแคลเซียมซัลเฟต และ 0กรด butyric 5% (รักษา C); และ (iv) 0.1% กรด 0.9% กรดแคลเซียมซัลเฟต และ 100 ppm คลอรีนไดออกไซด์ (รักษา D); มีประสิทธิภาพสูง (> 3 ล็อกลด CFU/ml) ที่ 21° C ในการฆ่า O157:H7 E. coli, O26:H11 และ O111:NM ในน้ำหนักปนเนื้อหาต่อ (10:1 น้ำ/ต่อเนื้อหาอัตรา [vol/wt]) หรืออุจจาระ (อัตรา 20:1 น้ำ/อุจจาระ [vol/wt]) ในหมู่พวกเขา การรักษา A, B และ C ฆ่า > 5 ล็อก O157:H7 CFU E. coli, O26:H11 และ O111:NM / ml ภายใน 30 นาทีน้ำที่ประกอบด้วยต่อเนื้อหาหรืออุจจาระ ขณะรักษา D ยกเลิกประมาณ 3-4 ล็อก CFU/ml ภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน วัวที่ให้น้ำที่ประกอบด้วยการรักษา A หรือ C หรือไม่ถูกรักษาน้ำ (ควบคุม) ad libitum สำหรับสองรอบระยะเวลา 7 วันได้ดื่ม 15.2, 13.8 และ 30.3 ลิตร/วัน ตามลำดับ และวัวที่ให้น้ำประกอบด้วย 0.1% กรดบวก 0.9% กรดแคลเซียมซัลเฟต (pH 2.1) ดื่ม 18.6 ลิตร/วัน จำนวนน้ำที่ใช้สำหรับบำบัดน้ำทั้งหมดแตกต่างอย่างมากจากที่ตัวควบคุม แต่มีไม่แตกต่างกันระหว่างการรักษาน้ำ การรักษาดังกล่าวอาจดีที่สุดเป็นระยะ ๆ กับ troughs ดื่มน้ำ และ ล้างแล้ว แทนที่จะถูกเพิ่มอย่างต่อเนื่อง เพื่อหลีกเลี่ยงลดปริมาณการใช้น้ำ โดยวัว
Escherichia coli O157:H7 ได้ผงาดขึ้นใน 10 ปีที่ผ่านมาเป็นสำคัญอาหารโดยเชื่อว่าการศึกษา (12, 15, 22, 30, 32, 36), กับกรณี 73,000 การประเมินของเชื้อ E. coli O157 ในสหรัฐอเมริกา (23) วัวควายเป็นอ่างเก็บน้ำหลักของ O157:H7 E. coli (2, 4, 5, 7), และควายน้ำ troughs เป็นแหล่งสำคัญของการศึกษาในฟาร์ม (2, 4, 5, 7, 17, 20, 21, 27, 28, 37) การศึกษาได้เปิดเผยเพิ่มเติมว่า เมื่ออยู่ในน้ำดื่มสัตว์เลี้ยง การศึกษาที่ถูกเผยแพร่วัวอื่น ๆ น้ำปนเปื้อน (19, 29) ใช้
ลูกผสมสาม Genomic โดยฟิลด์สูงเจ electrophoresis ของ E. coli O157:H7 แยกจากฟาร์มเปิดเผยที่ O157 เดียว:ต้องใช้ H7 ถูกหลักระหว่างแยกจากวัวผู้ผ่านและ noncohort น้ำ และอื่น ๆ ตัวอย่างบวก (เช่น จากอาหาร แมลงวัน เป็นนกพิราบ ฯลฯ) ในฟาร์ม (29) ข้อมูลนี้แสดงให้เห็นว่าน้ำดื่มเป็นยานพาหนะสำคัญสำหรับลุง O157:H7 E. coli ในฟาร์ม และว่า วิธีการบำบัดน้ำดื่มในฟาร์มจำเป็นสำหรับการลดลงของการศึกษา
การศึกษาบ่งชี้ว่า O157:H7 E. coli สามารถอยู่รอดในน้ำดื่มสัตว์เลี้ยงเป็นเวลานาน (เกิน 12 เดือน) (13, 19, 29) ได้รับการประเมินความหลากหลายของบริการสำหรับประสิทธิภาพในการฆ่า O157:H7 E. coli ในน้ำดื่มที่ปนเปื้อนอุจจาระวัว (9, 10, 18, 24) ผลการเปิดเผยว่า ส่วนใหญ่มีผลน้อยที่สุดฆ่าศึกษา ส่วนหนึ่งเนื่องจากการรักษาเหล่านี้ถูก neutralized โดยวัสดุอินทรีย์ อยู่ในอุจจาระ วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้คือการ ระบุปฏิบัติบำบัดกำจัด หรือควบคุม O157:H7 E. coli ในน้ำดื่ม โดยจำลองสภาพในฟาร์ม
วิธีการและวัสดุ
สายพันธุ์แบคทีเรีย ห้าแยกของ E. coli O157:H7 เช่น 932 (เป็นมนุษย์แยก), E009 (แยกเป็นเนื้อ), E0018 (แยกเป็นวัว), E0122 (แยกเป็นวัว), และ E0139 (deer กระตุกแยก); ห้าแยก O26:H11 E. coli เช่น สายพันธุ์ DEC10E (แยกเป็นวัว), DEC9E (แยกเป็นวัว), DEC10B (วัวแยก), 3079-97 (เป็นมนุษย์แยก), และ (เป็นมนุษย์แยก); 96 3183 ความห้า O111:NM E. coli เช่น 3208 สายพันธุ์- (มนุษย์แยก) 95, 0944-95 (การปศุสัตว์แยก), 3287-97 (เป็นมนุษย์แยก), (การปศุสัตว์แยก) 95 4543 และ 0073-92 (การปศุสัตว์แยก), ถูกใช้เป็นส่วนผสม 5 ต้องใช้เฉพาะแต่ละ serotype เพื่อความสะดวกในการแจงนับแยกแบคทีเรียเหล่านี้ สายพันธุ์ทั้งหมดถูกเลือกสำหรับความต้านทานต่อกรดนาลิดิซิก (50 μg/ml) ตามขั้นตอนอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (37) ต้องใช้แต่ละถูกปลูกทีละ 10 ml ของซุปถั่วเหลือง tryptic (TSB) (ระบบจุลสัน Becton สปาร์ค MD) มี 50 μg ของกรดนาลิดิซิก (นา) (ซิกเคมี Co. เซนต์หลุยส์ MO) ต่อมิลลิลิตร (TSB-นา) สำหรับ h 16-18 ที่ 37° C มีอาการกังวลต่อ (150 รอบต่อนาที) เซลล์แบคทีเรียได้สามครั้ง โดย centrifugation (4000 × g; 20 นาที); sedimented ล้างใน 01 M buffered ฟอสเฟตน้ำเกลือ (PBS), ค่า pH 7.2 และ resuspended ใน PBS บริการเซลล์ถูกปรับปรุง ด้วย PBS จะมีความหนาแน่นออปติคัลที่ 630 nm 0.5 (ประมาณ 108 CFU/ml) สายพันธุ์ที่ห้าของ serotype เดียวถูกรวมที่ประมาณเท่าเซลล์หมายเลข ที่ ต้องใช้แต่ละแต่ละรายการและส่วนผสมต้องใช้ห้า ได้ระบุในถั่วเหลือง tryptic agar (TSA) และซอร์บิทอล MacConkey agar (SMA) หรือแผ่น MacConkey agar (ทั้งหมดได้จากระบบจุลสัน Becton) .
เนื้อหาต่อและอุจจาระ ต่อเนื้อหาหรืออุจจาระจากวัวสามต่าง ๆ ถูกรวม และใช้เป็นส่วนผสม มีการรวบรวมเนื้อหาต่อจากเนื้อวัวที่ฆ่า และอุจจาระถูกเก็บรวบรวมจากวัวในฟาร์มเนื้อ 4° C และใช้ภายใน 7 วัน ใช้สำหรับการทดลองต่าง ๆ ตัวอย่างอื่นที่ได้รับจากบิดาเดียวกันหรือฟาร์ม
รักษากับแบคทีเรียที่แข่งขัน 5 ต้องใช้ส่วนผสมของ O157:H7 E. coli ที่ 105 CFU/ml และผสมระหว่าง 3 สายพันธุ์ของแบคทีเรียแข่งขัน (E. coli 271, 786 และ 797) (37) เป็นปรปักษ์กับ E. coli O157:H7 ที่ 107 CFU/ml ได้น้ำเพิ่มเติมอื่นที่ประกอบด้วยส่วนผสมของน้ำและต่อเนื้อหาที่อัตราส่วนของ 100:1, 50:1 ศิรา 10:1 และ 5:1 และจัดขึ้นที่ 21 ° C.
คลอรีนและคลอรีนไดออกไซด์รักษา โซลูชั่นมาตรฐานคลอรีนที่ได้รับจาก บริษัท HACH (Loveland CO) ถูกทำให้เจือจางสำหรับแต่ละการทดลองในความเข้มข้นต้องตามวิธีอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (39) น้ำ deionized สด ความเข้มข้นของคลอรีนอิสระในโซลูชั่นคลอรีนแตกออกถูกกำหนด ด้วย Titrator ดิจิตอล (HACH จำกัด) มีเพิ่มระงับ O157:H7 E. coli (1 ml) ที่ 108-109 CFU/ml: ml 199 ของน้ำที่ประกอบด้วยต่อเนื้อหาที่อัตราส่วนของ 100:1, 501 ศิรา และ 10:1 (vol/wt) และโซลูชันคลอรีน 5 ppm (คลอรีน 4 ppm เป็นระดับสูงสุดเหลือยาฆ่าเชื้อในน้ำดื่มได้ โดยหน่วยงานป้องกันสิ่งแวดล้อม) ที่ 21 ° C และคนแถบแม่เหล็กกวนในหนาว Erlenmeyer 500 ml ศึกษากับคลอรีนไดออกไซด์ได้ดำเนินการโดยใช้วิธีคล้ายกัน
รักษาโอโซน โอโซนถูกผลิต โดยการปฏิบัติระดับโอโซน (รุ่น H-50 นานาชาติเครื่อง Hess, Ephrata, PA) พร้อมอาทิตย์หัวออกซิเจน (รุ่น AS-12 AirSep ควาย NY), และโอโซนความเข้มข้น (ppm) ถูกวัด โดยวิธีอินดิโก้เครื่อง น้ำ Ozonated (22-24 แผ่นต่อนาทีที่ 5° C) เป็นผสมภายใน 5 นาที ด้วยเนื้อหาต่อในอัตราส่วน 100:1, 50:1 ศิรา 10:1 และ 5:1 น้ำ Q (Q สังเคราะห์ A10 มีใช้มาก Corp., Billerica, MA) เป็นตัวควบคุม Milliliter หนึ่งผสมระหว่างสายพันธุ์ที่ห้าของ O157:H7 E. coli (108 CFU/ml) ผสมกับ ml 199 ของน้ำ ozonated ต่อเนื้อหาที่ 5 ° C และความที่ 0 ถึง 20 นาที
เคมีบำบัด เคมีภัณฑ์ รวมถึงกรดแลกติก (0.05 0.5% Fisher วิทยาศาสตร์ งานสนามหญ้า NJ), ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ (0.5% ซิกเคมี Inc. เซนต์หลุยส์ MO), โซเดียม benzoate (0.1% Fisher วิทยาศาสตร์), กรดแคลเซียมซัลเฟต (0.9-4.5% Mionix Inc., Naperville, IL), กรด caprylic (0.05 ถึง 1.5% Aldrich เคมี Inc. มิลวอกี WI), กรด butyric (0.5-4% อิงค์เคมี Aldrich), propionic กรด (0.5-4% ซิกเคมี Inc.), และคลอรีนไดออกไซด์ (10-1000 ppm Aldrich เคมี Inc.), ถูกประเมินแยกต่างหาก หรือ เป็นชุด ความเข้มข้นที่ใช้สำหรับสารเคมีแต่ละประเมินได้ตามผลการศึกษาก่อนหน้านี้ดำเนินการ ด้วยสารเคมีและ O157:H7 E. coli ในน้ำ deionized มีผสมสารเคมีเพื่อความเข้มข้นที่เหมาะสมน้ำ Q (Q สังเคราะห์ A10 Corp.มาก) เริ่มทดสอบกับวัฒนธรรมบริสุทธิ์ของ E. coli O157:H7 สารเคมีที่มีประสิทธิภาพการผสมของสารเคมีต่าง ๆ ได้เพิ่มเติมทดสอบฆ่าผลที่ 21° C O157:H7 E. coli ในน้ำประปาที่ประกอบด้วยต่อเนื้อหาที่อัตราส่วนต่าง ๆ ที่อธิบายไว้ข้างต้น
แจงนับของทนกรดนาลิดิซิก E. coli สุ่มตัวอย่างกำหนดไว้เวลา 1.0 ml ของระงับแบคทีเรียบำบัดถูกเอาออก และผสมกับ 9มล 0 ของ neutralizing บัฟเฟอร์ (Becton สันจุลชีววิทยาระบบ) แบคทีเรียมี serially (1:10) ผสมในน้ำ peptone 0.1, 0.1 ml ของแต่ละการเจือจางเป็นผิวเคลือบลงบน TSA ประกอบด้วย μg 50 ml นา (TSA-นา) และ SMA ที่ประกอบด้วย 50 μg นา/ml (SMA-นา) ในซ้ำ และ incubated ที่ 37° C ใน 24 h. อาณานิคมของ E. coli O157:H7 (ชนิดลบ) เรา
ยกเลิกการเรียก Enterohemorrhagic Escherichia coli ในต่อเนื้อหาหรือ Feces-Contaminated น้ำดื่มสำหรับสัตว์เลี้ยง
ทองเจียว เส้าปิง, [...], และไมเคิล ดอยล์ P.
รายละเอียดเพิ่มเติม
นามธรรม
น้ำดื่มสัตว์เลี้ยงเป็นแหล่งของในฟาร์ม Escherichia coli O157:H7 ส่ง กิจกรรมจุลินทรีย์ของ disinfectants ควบคุม O157:H7 E. coli ในน้ำดื่มในฟาร์มมีบ่อย neutralized โดยสถานะของเนื้อหาต่อและมูลที่ปนเปื้อนในน้ำดื่มโดยทั่วไป รักษาเคมีต่าง ๆ รวมถึงกรดแลกติก กรดแคลเซียมซัลเฟต คลอรีน คลอรีนไดออกไซด์ ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ กรด caprylic โอโซน กรด butyric โซเดียม benzoate และแข่งขัน E. coli ถูกทดสอบแยกกัน หรือร่วมในการยกเลิกการเรียก O157:H7 E. coli ในต่อหน้าของเนื้อหาต่อ คลอรีน (5 ppm), โอโซน (22-24 แผ่นต่อนาทีที่ 5° C), และแข่งขัน E. coli บำบัดน้ำมีผลกระทบน้อยที่สุด (< ล็อก 1 CFU/ml ลด) บนฆ่า E. coli O157:H7 ในต่อหน้าของเนื้อหาต่อในน้ำต่ออัตราส่วนเนื้อหาของ 50:1 (vol/wt) และต่ำกว่า 4 เคมีบำบัดชุด รวม (i) 0.1% กรด 0.9% กรดแคลเซียมซัลเฟต และกรด caprylic 0.05% (รักษา A); (ii) 0.1% กรด 0.9% กรดแคลเซียมซัลเฟต และ benzoate 0.1% โซเดียม (รักษา B); (iii) 0.1% กรด 0.9% กรดแคลเซียมซัลเฟต และ 0กรด butyric 5% (รักษา C); และ (iv) 0.1% กรด 0.9% กรดแคลเซียมซัลเฟต และ 100 ppm คลอรีนไดออกไซด์ (รักษา D); มีประสิทธิภาพสูง (> 3 ล็อกลด CFU/ml) ที่ 21° C ในการฆ่า O157:H7 E. coli, O26:H11 และ O111:NM ในน้ำหนักปนเนื้อหาต่อ (10:1 น้ำ/ต่อเนื้อหาอัตรา [vol/wt]) หรืออุจจาระ (อัตรา 20:1 น้ำ/อุจจาระ [vol/wt]) ในหมู่พวกเขา การรักษา A, B และ C ฆ่า > 5 ล็อก O157:H7 CFU E. coli, O26:H11 และ O111:NM / ml ภายใน 30 นาทีน้ำที่ประกอบด้วยต่อเนื้อหาหรืออุจจาระ ขณะรักษา D ยกเลิกประมาณ 3-4 ล็อก CFU/ml ภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน วัวที่ให้น้ำที่ประกอบด้วยการรักษา A หรือ C หรือไม่ถูกรักษาน้ำ (ควบคุม) ad libitum สำหรับสองรอบระยะเวลา 7 วันได้ดื่ม 15.2, 13.8 และ 30.3 ลิตร/วัน ตามลำดับ และวัวที่ให้น้ำประกอบด้วย 0.1% กรดบวก 0.9% กรดแคลเซียมซัลเฟต (pH 2.1) ดื่ม 18.6 ลิตร/วัน จำนวนน้ำที่ใช้สำหรับบำบัดน้ำทั้งหมดแตกต่างอย่างมากจากที่ตัวควบคุม แต่มีไม่แตกต่างกันระหว่างการรักษาน้ำ การรักษาดังกล่าวอาจดีที่สุดเป็นระยะ ๆ กับ troughs ดื่มน้ำ และ ล้างแล้ว แทนที่จะถูกเพิ่มอย่างต่อเนื่อง เพื่อหลีกเลี่ยงลดปริมาณการใช้น้ำ โดยวัว
Escherichia coli O157:H7 ได้ผงาดขึ้นใน 10 ปีที่ผ่านมาเป็นสำคัญอาหารโดยเชื่อว่าการศึกษา (12, 15, 22, 30, 32, 36), กับกรณี 73,000 การประเมินของเชื้อ E. coli O157 ในสหรัฐอเมริกา (23) วัวควายเป็นอ่างเก็บน้ำหลักของ O157:H7 E. coli (2, 4, 5, 7), และควายน้ำ troughs เป็นแหล่งสำคัญของการศึกษาในฟาร์ม (2, 4, 5, 7, 17, 20, 21, 27, 28, 37) การศึกษาได้เปิดเผยเพิ่มเติมว่า เมื่ออยู่ในน้ำดื่มสัตว์เลี้ยง การศึกษาที่ถูกเผยแพร่วัวอื่น ๆ น้ำปนเปื้อน (19, 29) ใช้
ลูกผสมสาม Genomic โดยฟิลด์สูงเจ electrophoresis ของ E. coli O157:H7 แยกจากฟาร์มเปิดเผยที่ O157 เดียว:ต้องใช้ H7 ถูกหลักระหว่างแยกจากวัวผู้ผ่านและ noncohort น้ำ และอื่น ๆ ตัวอย่างบวก (เช่น จากอาหาร แมลงวัน เป็นนกพิราบ ฯลฯ) ในฟาร์ม (29) ข้อมูลนี้แสดงให้เห็นว่าน้ำดื่มเป็นยานพาหนะสำคัญสำหรับลุง O157:H7 E. coli ในฟาร์ม และว่า วิธีการบำบัดน้ำดื่มในฟาร์มจำเป็นสำหรับการลดลงของการศึกษา
การศึกษาบ่งชี้ว่า O157:H7 E. coli สามารถอยู่รอดในน้ำดื่มสัตว์เลี้ยงเป็นเวลานาน (เกิน 12 เดือน) (13, 19, 29) ได้รับการประเมินความหลากหลายของบริการสำหรับประสิทธิภาพในการฆ่า O157:H7 E. coli ในน้ำดื่มที่ปนเปื้อนอุจจาระวัว (9, 10, 18, 24) ผลการเปิดเผยว่า ส่วนใหญ่มีผลน้อยที่สุดฆ่าศึกษา ส่วนหนึ่งเนื่องจากการรักษาเหล่านี้ถูก neutralized โดยวัสดุอินทรีย์ อยู่ในอุจจาระ วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้คือการ ระบุปฏิบัติบำบัดกำจัด หรือควบคุม O157:H7 E. coli ในน้ำดื่ม โดยจำลองสภาพในฟาร์ม
วิธีการและวัสดุ
สายพันธุ์แบคทีเรีย ห้าแยกของ E. coli O157:H7 เช่น 932 (เป็นมนุษย์แยก), E009 (แยกเป็นเนื้อ), E0018 (แยกเป็นวัว), E0122 (แยกเป็นวัว), และ E0139 (deer กระตุกแยก); ห้าแยก O26:H11 E. coli เช่น สายพันธุ์ DEC10E (แยกเป็นวัว), DEC9E (แยกเป็นวัว), DEC10B (วัวแยก), 3079-97 (เป็นมนุษย์แยก), และ (เป็นมนุษย์แยก); 96 3183 ความห้า O111:NM E. coli เช่น 3208 สายพันธุ์- (มนุษย์แยก) 95, 0944-95 (การปศุสัตว์แยก), 3287-97 (เป็นมนุษย์แยก), (การปศุสัตว์แยก) 95 4543 และ 0073-92 (การปศุสัตว์แยก), ถูกใช้เป็นส่วนผสม 5 ต้องใช้เฉพาะแต่ละ serotype เพื่อความสะดวกในการแจงนับแยกแบคทีเรียเหล่านี้ สายพันธุ์ทั้งหมดถูกเลือกสำหรับความต้านทานต่อกรดนาลิดิซิก (50 μg/ml) ตามขั้นตอนอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (37) ต้องใช้แต่ละถูกปลูกทีละ 10 ml ของซุปถั่วเหลือง tryptic (TSB) (ระบบจุลสัน Becton สปาร์ค MD) มี 50 μg ของกรดนาลิดิซิก (นา) (ซิกเคมี Co. เซนต์หลุยส์ MO) ต่อมิลลิลิตร (TSB-นา) สำหรับ h 16-18 ที่ 37° C มีอาการกังวลต่อ (150 รอบต่อนาที) เซลล์แบคทีเรียได้สามครั้ง โดย centrifugation (4000 × g; 20 นาที); sedimented ล้างใน 01 M buffered ฟอสเฟตน้ำเกลือ (PBS), ค่า pH 7.2 และ resuspended ใน PBS บริการเซลล์ถูกปรับปรุง ด้วย PBS จะมีความหนาแน่นออปติคัลที่ 630 nm 0.5 (ประมาณ 108 CFU/ml) สายพันธุ์ที่ห้าของ serotype เดียวถูกรวมที่ประมาณเท่าเซลล์หมายเลข ที่ ต้องใช้แต่ละแต่ละรายการและส่วนผสมต้องใช้ห้า ได้ระบุในถั่วเหลือง tryptic agar (TSA) และซอร์บิทอล MacConkey agar (SMA) หรือแผ่น MacConkey agar (ทั้งหมดได้จากระบบจุลสัน Becton) .
เนื้อหาต่อและอุจจาระ ต่อเนื้อหาหรืออุจจาระจากวัวสามต่าง ๆ ถูกรวม และใช้เป็นส่วนผสม มีการรวบรวมเนื้อหาต่อจากเนื้อวัวที่ฆ่า และอุจจาระถูกเก็บรวบรวมจากวัวในฟาร์มเนื้อ 4° C และใช้ภายใน 7 วัน ใช้สำหรับการทดลองต่าง ๆ ตัวอย่างอื่นที่ได้รับจากบิดาเดียวกันหรือฟาร์ม
รักษากับแบคทีเรียที่แข่งขัน 5 ต้องใช้ส่วนผสมของ O157:H7 E. coli ที่ 105 CFU/ml และผสมระหว่าง 3 สายพันธุ์ของแบคทีเรียแข่งขัน (E. coli 271, 786 และ 797) (37) เป็นปรปักษ์กับ E. coli O157:H7 ที่ 107 CFU/ml ได้น้ำเพิ่มเติมอื่นที่ประกอบด้วยส่วนผสมของน้ำและต่อเนื้อหาที่อัตราส่วนของ 100:1, 50:1 ศิรา 10:1 และ 5:1 และจัดขึ้นที่ 21 ° C.
คลอรีนและคลอรีนไดออกไซด์รักษา โซลูชั่นมาตรฐานคลอรีนที่ได้รับจาก บริษัท HACH (Loveland CO) ถูกทำให้เจือจางสำหรับแต่ละการทดลองในความเข้มข้นต้องตามวิธีอธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (39) น้ำ deionized สด ความเข้มข้นของคลอรีนอิสระในโซลูชั่นคลอรีนแตกออกถูกกำหนด ด้วย Titrator ดิจิตอล (HACH จำกัด) มีเพิ่มระงับ O157:H7 E. coli (1 ml) ที่ 108-109 CFU/ml: ml 199 ของน้ำที่ประกอบด้วยต่อเนื้อหาที่อัตราส่วนของ 100:1, 501 ศิรา และ 10:1 (vol/wt) และโซลูชันคลอรีน 5 ppm (คลอรีน 4 ppm เป็นระดับสูงสุดเหลือยาฆ่าเชื้อในน้ำดื่มได้ โดยหน่วยงานป้องกันสิ่งแวดล้อม) ที่ 21 ° C และคนแถบแม่เหล็กกวนในหนาว Erlenmeyer 500 ml ศึกษากับคลอรีนไดออกไซด์ได้ดำเนินการโดยใช้วิธีคล้ายกัน
รักษาโอโซน โอโซนถูกผลิต โดยการปฏิบัติระดับโอโซน (รุ่น H-50 นานาชาติเครื่อง Hess, Ephrata, PA) พร้อมอาทิตย์หัวออกซิเจน (รุ่น AS-12 AirSep ควาย NY), และโอโซนความเข้มข้น (ppm) ถูกวัด โดยวิธีอินดิโก้เครื่อง น้ำ Ozonated (22-24 แผ่นต่อนาทีที่ 5° C) เป็นผสมภายใน 5 นาที ด้วยเนื้อหาต่อในอัตราส่วน 100:1, 50:1 ศิรา 10:1 และ 5:1 น้ำ Q (Q สังเคราะห์ A10 มีใช้มาก Corp., Billerica, MA) เป็นตัวควบคุม Milliliter หนึ่งผสมระหว่างสายพันธุ์ที่ห้าของ O157:H7 E. coli (108 CFU/ml) ผสมกับ ml 199 ของน้ำ ozonated ต่อเนื้อหาที่ 5 ° C และความที่ 0 ถึง 20 นาที
เคมีบำบัด เคมีภัณฑ์ รวมถึงกรดแลกติก (0.05 0.5% Fisher วิทยาศาสตร์ งานสนามหญ้า NJ), ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ (0.5% ซิกเคมี Inc. เซนต์หลุยส์ MO), โซเดียม benzoate (0.1% Fisher วิทยาศาสตร์), กรดแคลเซียมซัลเฟต (0.9-4.5% Mionix Inc., Naperville, IL), กรด caprylic (0.05 ถึง 1.5% Aldrich เคมี Inc. มิลวอกี WI), กรด butyric (0.5-4% อิงค์เคมี Aldrich), propionic กรด (0.5-4% ซิกเคมี Inc.), และคลอรีนไดออกไซด์ (10-1000 ppm Aldrich เคมี Inc.), ถูกประเมินแยกต่างหาก หรือ เป็นชุด ความเข้มข้นที่ใช้สำหรับสารเคมีแต่ละประเมินได้ตามผลการศึกษาก่อนหน้านี้ดำเนินการ ด้วยสารเคมีและ O157:H7 E. coli ในน้ำ deionized มีผสมสารเคมีเพื่อความเข้มข้นที่เหมาะสมน้ำ Q (Q สังเคราะห์ A10 Corp.มาก) เริ่มทดสอบกับวัฒนธรรมบริสุทธิ์ของ E. coli O157:H7 สารเคมีที่มีประสิทธิภาพการผสมของสารเคมีต่าง ๆ ได้เพิ่มเติมทดสอบฆ่าผลที่ 21° C O157:H7 E. coli ในน้ำประปาที่ประกอบด้วยต่อเนื้อหาที่อัตราส่วนต่าง ๆ ที่อธิบายไว้ข้างต้น
แจงนับของทนกรดนาลิดิซิก E. coli สุ่มตัวอย่างกำหนดไว้เวลา 1.0 ml ของระงับแบคทีเรียบำบัดถูกเอาออก และผสมกับ 9มล 0 ของ neutralizing บัฟเฟอร์ (Becton สันจุลชีววิทยาระบบ) แบคทีเรียมี serially (1:10) ผสมในน้ำ peptone 0.1, 0.1 ml ของแต่ละการเจือจางเป็นผิวเคลือบลงบน TSA ประกอบด้วย μg 50 ml นา (TSA-นา) และ SMA ที่ประกอบด้วย 50 μg นา/ml (SMA-นา) ในซ้ำ และ incubated ที่ 37° C ใน 24 h. อาณานิคมของ E. coli O157:H7 (ชนิดลบ) เรา
การแปล กรุณารอสักครู่..
Although studies have revealed that contaminated cattle drinking water is an important vehicle in the persistence and dissemination of E. coli O157:H7 on cattle farms, highly effective,
Inactivation of Enterohemorrhagic Escherichia coli in Rumen Content- or Feces-Contaminated Drinking Water for Cattle
Tong Zhao, Ping Zhao, [...], and Michael P. Doyle
Additional article information
ABSTRACT
Cattle drinking water is a source of on-farm Escherichia coli O157:H7 transmission. The antimicrobial activities of disinfectants to control E. coli O157:H7 in on-farm drinking water are frequently neutralized by the presence of rumen content and manure that generally contaminate the drinking water. Different chemical treatments, including lactic acid, acidic calcium sulfate, chlorine, chlorine dioxide, hydrogen peroxide, caprylic acid, ozone, butyric acid, sodium benzoate, and competing E. coli, were tested individually or in combination for inactivation of E. coli O157:H7 in the presence of rumen content. Chlorine (5 ppm), ozone (22 to 24 ppm at 5°C), and competing E. coli treatment of water had minimal effects (<1 log CFU/ml reduction) on killing E. coli O157:H7 in the presence of rumen content at water-to-rumen content ratios of 50:1 (vol/wt) and lower. Four chemical-treatment combinations, including (i) 0.1% lactic acid, 0.9% acidic calcium sulfate, and 0.05% caprylic acid (treatment A); (ii) 0.1% lactic acid, 0.9% acidic calcium sulfate, and 0.1% sodium benzoate (treatment B); (iii) 0.1% lactic acid, 0.9% acidic calcium sulfate, and 0.5% butyric acid (treatment C); and (iv) 0.1% lactic acid, 0.9% acidic calcium sulfate, and 100 ppm chlorine dioxide (treatment D); were highly effective (>3 log CFU/ml reduction) at 21°C in killing E. coli O157:H7, O26:H11, and O111:NM in water heavily contaminated with rumen content (10:1 water/rumen content ratio [vol/wt]) or feces (20:1 water/feces ratio [vol/wt]). Among them, treatments A, B, and C killed >5 log CFU E. coli O157:H7, O26:H11, and O111:NM/ml within 30 min in water containing rumen content or feces, whereas treatment D inactivated approximately 3 to 4 log CFU/ml under the same conditions. Cattle given water containing treatment A or C or untreated water (control) ad libitum for two 7-day periods drank 15.2, 13.8, and 30.3 liters/day, respectively, and cattle given water containing 0.1% lactic acid plus 0.9% acidic calcium sulfate (pH 2.1) drank 18.6 liters/day. The amounts of water consumed for all water treatments were significantly different from that for the control, but there were no significant differences among the water treatments. Such treatments may best be applied periodically to drinking water troughs and then flushed, rather than being added continuously, to avoid reduced water consumption by cattle.
Escherichia coli O157:H7 has emerged in the last 10 years as an important food-borne pathogen (12, 15, 22, 30, 32, 36), with an estimated 73,000 cases of E. coli O157 infection annually in the United States (23). Cattle are a major reservoir of E. coli O157:H7 (2, 4, 5, 7), and cattle water troughs are important sources of the pathogen on farms (2, 4, 5, 7, 17, 20, 21, 27, 28, 37). Studies have further revealed that when present in cattle drinking water, the pathogen was disseminated to other cattle consuming the contaminated water (19, 29).
Genomic subtyping by pulsed-field gel electrophoresis of E. coli O157:H7 isolates from farms revealed that a single O157:H7 strain was dominant among isolates from cohort and noncohort cattle, water, and other positive samples (i.e., from feed, flies, a pigeon, etc.) on a farm (29). This information demonstrates that drinking water is an important vehicle for disseminating E. coli O157:H7 on the farm and that methods for treatment of drinking water on farms are needed for reduction of the pathogen.
Studies indicate that E. coli O157:H7 can survive in cattle drinking water for a long time (up to 12 months) (13, 19, 29). A variety of treatments have been evaluated for efficacy in killing E. coli O157:H7 in drinking water contaminated with cattle feces (9, 10, 18, 24). The results revealed that most had minimal effects on killing the pathogen, in part because these treatments were neutralized by organic materials present in feces. The objective of this study was to identify practical treatments to eliminate or control E. coli O157:H7 in drinking water by simulating on-farm conditions.
MATERIALS AND METHODS
Bacterial strains. Five isolates of E. coli O157:H7, i.e., 932 (a human isolate), E009 (a beef isolate), E0018 (a cattle isolate), E0122 (a cattle isolate), and E0139 (a deer jerky isolate); five isolates of E. coli O26:H11, i.e., strains DEC10E (a cattle isolate), DEC9E (a cattle isolate), DEC10B (a cattle isolate), 3079-97 (a human isolate), and 3183-96 (a human isolate); and five strains of E. coli O111:NM, i.e., strains 3208-95 (a human isolate), 0944-95 (a cattle isolate), 3287-97 (a human isolate), 4543-95 (a cattle isolate), and 0073-92 (a cattle isolate), were used as five-strain mixtures specific to each serotype. To facilitate the enumeration of these bacterial isolates, all strains were selected for resistance to nalidixic acid (50 μg/ml) according to procedures described previously (37). Each strain was grown individually in 10 ml of tryptic soy broth (TSB) (Becton Dickinson Microbiology Systems, Sparks, MD) containing 50 μg of nalidixic acid (NA) (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) per ml (TSB-NA) for 16 to 18 h at 37°C with agitation (150 rpm). The bacterial cells were sedimented three times by centrifugation (4,000 × g; 20 min); washed in 0.1 M phosphate-buffered saline (PBS), pH 7.2; and resuspended in PBS. The cell suspensions were adjusted with PBS to an optical density at 630 nm of 0.5 (approximately 108 CFU/ml). Five strains of the same serotype were combined at approximately equal cell numbers, which, for each individual strain and the five-strain mixture, were enumerated on tryptic soy agar (TSA) and sorbitol MacConkey agar (SMA) or MacConkey agar plates (all obtained from Becton Dickinson Microbiology Systems).
Rumen contents and feces. Rumen contents or feces from three different cattle were combined and used as a mixture. Rumen contents were collected from beef cattle at slaughter, and feces were collected from cattle on a beef farm, held at 4°C, and used within 7 days. Different samples obtained from the same slaughterhouse or farm were used for different trials.
Treatment with competing bacteria. A five-strain mixture of E. coli O157:H7 at 105 CFU/ml and a mixture of three strains of competing bacteria (E. coli 271, 786, and 797) (37) antagonistic to E. coli O157:H7 at 107 CFU/ml were added to different flasks containing a mixture of water and rumen content at ratios of 100:1, 50:1, 25:1, 10:1, and 5:1 and held at 21°C.
Chlorine and chlorine dioxide treatments. Standard chlorine solutions obtained from HACH Company (Loveland, CO) were freshly diluted for each experiment in deionized water to the required concentration according to a method described previously (39). The free-chlorine concentrations in the diluted chlorine solutions were determined with a Digital Titrator (HACH Co.). The E. coli O157:H7 suspension (1 ml) at 108 to 109 CFU/ml was added to 199 ml of water containing rumen content at ratios of 100:1, 50:1, 25:1, and 10:1 (vol/wt) and 5 ppm chlorine solution (4 ppm chlorine is the maximum residual disinfectant level allowed in drinking water by the Environmental Protection Agency) at 21°C and stirred with a magnetic stir bar in a 500-ml Erlenmeyer flask. Studies with chlorine dioxide were conducted using similar procedures.
Ozone treatments. Ozone was produced by a laboratory scale ozone generator (model H-50; Hess Machine International, Ephrata, PA) equipped with an oxygen concentrator (model AS-12; AirSep, Buffalo, NY), and ozone concentrations (ppm) were measured by the indigo colorimeter method. Ozonated (22 to 24 ppm at 5°C) water was mixed within 5 min with rumen content at ratios of 100:1, 50:1, 25:1, 10:1, and 5:1. Milli-Q water (Milli-Q Synthesis A10; Millipore Corp., Billerica, MA) was used as the control. One milliliter of a mixture of five strains of E. coli O157:H7 (108 CFU/ml) was mixed with 199 ml of the ozonated water with rumen content at 5°C and sampled at 0 to 20 min.
Chemical treatments. Chemicals, including lactic acid (0.05 to 0.5%; Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ), hydrogen peroxide (0.5%; Sigma Chemicals Inc., St. Louis, MO), sodium benzoate (0.1%; Fisher Scientific), acidic calcium sulfate (0.9 to 4.5%; Mionix Inc., Naperville, IL), caprylic acid (0.05 to 1.5%; Aldrich Chemicals Inc., Milwaukee, WI), butyric acid (0.5 to 4%; Aldrich Chemicals Inc.), propionic acid (0.5 to 4%; Sigma Chemicals Inc.), and chlorine dioxide (10 to 1,000 ppm; Aldrich Chemicals Inc.), were evaluated separately or as a combination. The concentrations used for each chemical evaluated were based on the results of previous studies conducted with the chemicals and E. coli O157:H7 in deionized water. The chemicals were diluted to appropriate concentrations in Milli-Q water (Milli-Q Synthesis A10; Millipore Corp.) initially tested with the pure cultures of E. coli O157:H7. The effective chemical or combination of different chemicals was further tested for killing effects at 21°C on E. coli O157:H7 in tap water containing rumen content at the different ratios described above.
Enumeration of nalidixic acid-resistant E. coli. At predetermined sampling times, 1.0 ml of the treated bacterial suspension was removed and mixed with 9.0 ml of neutralizing buffer (Becton Dickinson Microbiology Systems). Bacteria were serially (1:10) diluted in 0.1% peptone water, and 0.1 ml of each dilution was surface plated onto TSA containing 50 μg NA/ml (TSA-NA) and SMA containing 50 μg NA/ml (SMA-NA) in duplicate and incubated at 37°C for 24 h. Colonies typical of E. coli O157:H7 (sorbitol negative) we
Inactivation of Enterohemorrhagic Escherichia coli in Rumen Content- or Feces-Contaminated Drinking Water for Cattle
Tong Zhao, Ping Zhao, [...], and Michael P. Doyle
Additional article information
ABSTRACT
Cattle drinking water is a source of on-farm Escherichia coli O157:H7 transmission. The antimicrobial activities of disinfectants to control E. coli O157:H7 in on-farm drinking water are frequently neutralized by the presence of rumen content and manure that generally contaminate the drinking water. Different chemical treatments, including lactic acid, acidic calcium sulfate, chlorine, chlorine dioxide, hydrogen peroxide, caprylic acid, ozone, butyric acid, sodium benzoate, and competing E. coli, were tested individually or in combination for inactivation of E. coli O157:H7 in the presence of rumen content. Chlorine (5 ppm), ozone (22 to 24 ppm at 5°C), and competing E. coli treatment of water had minimal effects (<1 log CFU/ml reduction) on killing E. coli O157:H7 in the presence of rumen content at water-to-rumen content ratios of 50:1 (vol/wt) and lower. Four chemical-treatment combinations, including (i) 0.1% lactic acid, 0.9% acidic calcium sulfate, and 0.05% caprylic acid (treatment A); (ii) 0.1% lactic acid, 0.9% acidic calcium sulfate, and 0.1% sodium benzoate (treatment B); (iii) 0.1% lactic acid, 0.9% acidic calcium sulfate, and 0.5% butyric acid (treatment C); and (iv) 0.1% lactic acid, 0.9% acidic calcium sulfate, and 100 ppm chlorine dioxide (treatment D); were highly effective (>3 log CFU/ml reduction) at 21°C in killing E. coli O157:H7, O26:H11, and O111:NM in water heavily contaminated with rumen content (10:1 water/rumen content ratio [vol/wt]) or feces (20:1 water/feces ratio [vol/wt]). Among them, treatments A, B, and C killed >5 log CFU E. coli O157:H7, O26:H11, and O111:NM/ml within 30 min in water containing rumen content or feces, whereas treatment D inactivated approximately 3 to 4 log CFU/ml under the same conditions. Cattle given water containing treatment A or C or untreated water (control) ad libitum for two 7-day periods drank 15.2, 13.8, and 30.3 liters/day, respectively, and cattle given water containing 0.1% lactic acid plus 0.9% acidic calcium sulfate (pH 2.1) drank 18.6 liters/day. The amounts of water consumed for all water treatments were significantly different from that for the control, but there were no significant differences among the water treatments. Such treatments may best be applied periodically to drinking water troughs and then flushed, rather than being added continuously, to avoid reduced water consumption by cattle.
Escherichia coli O157:H7 has emerged in the last 10 years as an important food-borne pathogen (12, 15, 22, 30, 32, 36), with an estimated 73,000 cases of E. coli O157 infection annually in the United States (23). Cattle are a major reservoir of E. coli O157:H7 (2, 4, 5, 7), and cattle water troughs are important sources of the pathogen on farms (2, 4, 5, 7, 17, 20, 21, 27, 28, 37). Studies have further revealed that when present in cattle drinking water, the pathogen was disseminated to other cattle consuming the contaminated water (19, 29).
Genomic subtyping by pulsed-field gel electrophoresis of E. coli O157:H7 isolates from farms revealed that a single O157:H7 strain was dominant among isolates from cohort and noncohort cattle, water, and other positive samples (i.e., from feed, flies, a pigeon, etc.) on a farm (29). This information demonstrates that drinking water is an important vehicle for disseminating E. coli O157:H7 on the farm and that methods for treatment of drinking water on farms are needed for reduction of the pathogen.
Studies indicate that E. coli O157:H7 can survive in cattle drinking water for a long time (up to 12 months) (13, 19, 29). A variety of treatments have been evaluated for efficacy in killing E. coli O157:H7 in drinking water contaminated with cattle feces (9, 10, 18, 24). The results revealed that most had minimal effects on killing the pathogen, in part because these treatments were neutralized by organic materials present in feces. The objective of this study was to identify practical treatments to eliminate or control E. coli O157:H7 in drinking water by simulating on-farm conditions.
MATERIALS AND METHODS
Bacterial strains. Five isolates of E. coli O157:H7, i.e., 932 (a human isolate), E009 (a beef isolate), E0018 (a cattle isolate), E0122 (a cattle isolate), and E0139 (a deer jerky isolate); five isolates of E. coli O26:H11, i.e., strains DEC10E (a cattle isolate), DEC9E (a cattle isolate), DEC10B (a cattle isolate), 3079-97 (a human isolate), and 3183-96 (a human isolate); and five strains of E. coli O111:NM, i.e., strains 3208-95 (a human isolate), 0944-95 (a cattle isolate), 3287-97 (a human isolate), 4543-95 (a cattle isolate), and 0073-92 (a cattle isolate), were used as five-strain mixtures specific to each serotype. To facilitate the enumeration of these bacterial isolates, all strains were selected for resistance to nalidixic acid (50 μg/ml) according to procedures described previously (37). Each strain was grown individually in 10 ml of tryptic soy broth (TSB) (Becton Dickinson Microbiology Systems, Sparks, MD) containing 50 μg of nalidixic acid (NA) (Sigma Chemical Co., St. Louis, MO) per ml (TSB-NA) for 16 to 18 h at 37°C with agitation (150 rpm). The bacterial cells were sedimented three times by centrifugation (4,000 × g; 20 min); washed in 0.1 M phosphate-buffered saline (PBS), pH 7.2; and resuspended in PBS. The cell suspensions were adjusted with PBS to an optical density at 630 nm of 0.5 (approximately 108 CFU/ml). Five strains of the same serotype were combined at approximately equal cell numbers, which, for each individual strain and the five-strain mixture, were enumerated on tryptic soy agar (TSA) and sorbitol MacConkey agar (SMA) or MacConkey agar plates (all obtained from Becton Dickinson Microbiology Systems).
Rumen contents and feces. Rumen contents or feces from three different cattle were combined and used as a mixture. Rumen contents were collected from beef cattle at slaughter, and feces were collected from cattle on a beef farm, held at 4°C, and used within 7 days. Different samples obtained from the same slaughterhouse or farm were used for different trials.
Treatment with competing bacteria. A five-strain mixture of E. coli O157:H7 at 105 CFU/ml and a mixture of three strains of competing bacteria (E. coli 271, 786, and 797) (37) antagonistic to E. coli O157:H7 at 107 CFU/ml were added to different flasks containing a mixture of water and rumen content at ratios of 100:1, 50:1, 25:1, 10:1, and 5:1 and held at 21°C.
Chlorine and chlorine dioxide treatments. Standard chlorine solutions obtained from HACH Company (Loveland, CO) were freshly diluted for each experiment in deionized water to the required concentration according to a method described previously (39). The free-chlorine concentrations in the diluted chlorine solutions were determined with a Digital Titrator (HACH Co.). The E. coli O157:H7 suspension (1 ml) at 108 to 109 CFU/ml was added to 199 ml of water containing rumen content at ratios of 100:1, 50:1, 25:1, and 10:1 (vol/wt) and 5 ppm chlorine solution (4 ppm chlorine is the maximum residual disinfectant level allowed in drinking water by the Environmental Protection Agency) at 21°C and stirred with a magnetic stir bar in a 500-ml Erlenmeyer flask. Studies with chlorine dioxide were conducted using similar procedures.
Ozone treatments. Ozone was produced by a laboratory scale ozone generator (model H-50; Hess Machine International, Ephrata, PA) equipped with an oxygen concentrator (model AS-12; AirSep, Buffalo, NY), and ozone concentrations (ppm) were measured by the indigo colorimeter method. Ozonated (22 to 24 ppm at 5°C) water was mixed within 5 min with rumen content at ratios of 100:1, 50:1, 25:1, 10:1, and 5:1. Milli-Q water (Milli-Q Synthesis A10; Millipore Corp., Billerica, MA) was used as the control. One milliliter of a mixture of five strains of E. coli O157:H7 (108 CFU/ml) was mixed with 199 ml of the ozonated water with rumen content at 5°C and sampled at 0 to 20 min.
Chemical treatments. Chemicals, including lactic acid (0.05 to 0.5%; Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ), hydrogen peroxide (0.5%; Sigma Chemicals Inc., St. Louis, MO), sodium benzoate (0.1%; Fisher Scientific), acidic calcium sulfate (0.9 to 4.5%; Mionix Inc., Naperville, IL), caprylic acid (0.05 to 1.5%; Aldrich Chemicals Inc., Milwaukee, WI), butyric acid (0.5 to 4%; Aldrich Chemicals Inc.), propionic acid (0.5 to 4%; Sigma Chemicals Inc.), and chlorine dioxide (10 to 1,000 ppm; Aldrich Chemicals Inc.), were evaluated separately or as a combination. The concentrations used for each chemical evaluated were based on the results of previous studies conducted with the chemicals and E. coli O157:H7 in deionized water. The chemicals were diluted to appropriate concentrations in Milli-Q water (Milli-Q Synthesis A10; Millipore Corp.) initially tested with the pure cultures of E. coli O157:H7. The effective chemical or combination of different chemicals was further tested for killing effects at 21°C on E. coli O157:H7 in tap water containing rumen content at the different ratios described above.
Enumeration of nalidixic acid-resistant E. coli. At predetermined sampling times, 1.0 ml of the treated bacterial suspension was removed and mixed with 9.0 ml of neutralizing buffer (Becton Dickinson Microbiology Systems). Bacteria were serially (1:10) diluted in 0.1% peptone water, and 0.1 ml of each dilution was surface plated onto TSA containing 50 μg NA/ml (TSA-NA) and SMA containing 50 μg NA/ml (SMA-NA) in duplicate and incubated at 37°C for 24 h. Colonies typical of E. coli O157:H7 (sorbitol negative) we
การแปล กรุณารอสักครู่..
แม้ว่ามีการศึกษาพบว่าโคดื่มน้ำปนเปื้อนเป็นยานพาหนะสำคัญในการคงอยู่และการเผยแพร่ของเชื้อ E . coli เป็นสมาชิก : H7 ในฟาร์มโคที่มีประสิทธิภาพสูง
การยับยั้ง Escherichia coli ในกระเพาะรูเมนของ enterohemorrhagic เนื้อหาหรืออุจจาระปนเปื้อนน้ำดื่มโค
Tong Zhao Ping Zhao [ . . . ] และไมเคิลดอยล์
P
ข้อมูลเพิ่มเติมบทความบทคัดย่อโคดื่มน้ำเป็นแหล่งที่มาของฟาร์ม Escherichia coli เป็นสมาชิก ) ส่ง มีฤทธิ์การต้านสารเพื่อควบคุมเชื้อ E . coli เป็นสมาชิก : H7 ในน้ำดื่มฟาร์มบ่อยแล้ว โดยตนของกระบวนการและเนื้อหาที่มักจะปนเปื้อนปุ๋ยคอกน้ําดื่ม การรักษาทางเคมีที่แตกต่างกัน ได้แก่ กรดแลคติกกรดแคลเซียม ซัลเฟต , คลอรีนคลอรีนไดออกไซด์ , ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ , caprylic acid , โอโซน , butyric acid , sodium benzoate และการแข่งขัน E . coli , ทดสอบเป็นรายบุคคลหรือในการรวมกันเพื่อทำให้เป็นสมาชิกของ E . coli ) ในการแสดงตนของแต่ละเนื้อหา คลอรีน ( 5 ppm ) โอโซน ( 22 - 24 ppm ที่ 5 ° C ) , และการแข่งขัน E . coli รักษาน้ำได้ผลน้อย ( < 1 log CFU / ml ลด ) ฆ่าเชื้อ E . coli เป็นสมาชิก :) ในการแสดงตนของแต่ละเนื้อหาแต่ละเนื้อหาที่น้ำอัตราส่วน 50 : 1 ( ปริมาตร / น้ำหนัก ) และต่ำกว่า 4 การรักษาทางเคมีชุด ได้แก่ ( 1 ) 0.1% กรดแลกติก , 0.9% ซัลเฟตกรดแคลเซียมและกรดคาพริลิก 0.05 % ( รักษา ) ; ( 2 ) 0.1% กรดแลกติก , 0.9% และ 0.1% กรดแคลเซียม ซัลเฟต , โซเดียมเบนโซเอต ( การรักษา B ) ; ( 3 ) 0.1% กรดแลกติก , 0.9 % กรดแคลเซียม ซัลเฟต และ 05% butyric acid ( รักษา C ) ; และ ( iv ) 0.1% กรดแลกติก , 0.9% ซัลเฟตกรดแคลเซียม และ 100 ppm คลอรีนไดออกไซด์ ( รักษา D ) ; มีประสิทธิภาพสูง ( > 3 log CFU / ml ลด ) ที่ 21 ° C ในการฆ่าเชื้อ E . coli เป็นสมาชิก ) o26 : h11 และ o111 : nm ในน้ำที่ปนเปื้อนมากกับเนื้อหาทั้งหมด ( 10 : 1 อัตราส่วนน้ำต่อกระบวนการเนื้อหา [ Vol / WT ] ) หรืออุจจาระ ( อุจจาระ : น้ำ / อัตราส่วน [ Vol / WT ] ) ในหมู่พวกเขา , การรักษา A , Bและ C ฆ่า > เข้าสู่ระบบเซลล์ E . coli เป็นสมาชิก ) o26 : h11 และ o111 : nm / ml ภายใน 30 นาทีในน้ำที่มีกระบวนการเนื้อหาหรืออุจจาระ ในขณะที่การรักษา D ซึ่งใช้ประมาณ 3 ถึง 4 log CFU / ml ได้ภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน โคได้รับน้ำที่มีการรักษาหรือ C หรือสารน้ำ ( ควบคุม ) อย่างเต็มที่สองระยะเวลา 7 วัน ดื่มตอน 15.2 , , และ 30.3 ลิตร / วัน ตามลำดับและปศุสัตว์ที่ได้รับน้ำที่ประกอบด้วย 0.1% กรดบวก 0.9% แคลเซียมซัลเฟตกรด ( pH 2.1 ) ดื่ม 18.6 ลิตร / วัน ปริมาณของน้ำที่ใช้สำหรับการรักษาน้ำที่แตกต่างกันจากที่ควบคุม แต่ไม่พบความแตกต่างระหว่างน้ำบำบัด การรักษาดังกล่าวอาจต้องใช้เป็นระยะ ๆเพื่อดื่มน้ำ troughs แล้วสวยมากกว่าการเพิ่มอย่างต่อเนื่อง เพื่อหลีกเลี่ยงการใช้น้ำ โดยโค
Escherichia coli เป็นสมาชิก ) ได้เกิดขึ้นในช่วง 10 ปี เป็นอาหารที่สำคัญของพาหะเชื้อโรค ( 12 , 15 , 22 , 30 , 32 , 36 ) มีประมาณ 73 , 000 ราย เชื้อ E . coli เป็นสมาชิกเป็นประจำทุกปีในประเทศสหรัฐอเมริกา 23 ) วัวเป็นอ่างเก็บน้ำที่สำคัญของ E . coli เป็นสมาชิก ) ( 2 , 4 , 5 , 7 ) ,และ troughs น้ำวัวเป็นสำคัญแหล่งที่มาของเชื้อโรคในฟาร์ม ( 2 , 4 , 5 , 7 , 17 , 20 , 21 , 27 , 28 , 37 ) การศึกษาได้เปิดเผยเพิ่มเติมว่า เมื่อปัจจุบันในโคดื่มน้ำ เชื้อนี้ถูกเผยแพร่อื่น ๆสัตว์บริโภคน้ำที่ปนเปื้อน ( 19 , 29 )
subtyping พัลส์ฟิลด์ gel electrophoresis โดยจีโนมของเชื้อ E . coli เป็นสมาชิก : H7 สายพันธุ์จากฟาร์ม พบว่าเป็นสมาชิกเดียว :H7 สายพันธุ์เด่นในสายพันธุ์จากเพื่อนร่วมงาน และฝูงวัว noncohort น้ำและตัวอย่างบวกอื่น ๆ ( เช่น จากอาหาร , แมลงวัน , นกพิราบ , ฯลฯ ) ในฟาร์ม ( 29 ) ข้อมูลนี้แสดงให้เห็นว่าการดื่มน้ำเป็นยานพาหนะที่สำคัญ เพื่อเผยแพร่ E . coli เป็นสมาชิก : H7 ในฟาร์มและวิธีการสำหรับการรักษาของการดื่มน้ำในฟาร์ม จำเป็นสำหรับการลดเชื้อโรค .
จากการศึกษาพบว่า E . coli เป็นสมาชิก : H7 สามารถอยู่รอดในโคดื่มน้ำนานถึง 12 เดือน ) ( 13 , 19 , 29 ) ความหลากหลายของการรักษาได้รับการประเมินประสิทธิภาพในการฆ่าเชื้อ E . coli เป็นสมาชิก : H7 ในน้ำดื่มที่ปนเปื้อนอุจจาระของวัว ( 9 , 10 , 17 , 24 ) ผลการศึกษา พบว่า ส่วนใหญ่มีผลกระทบน้อยที่สุดในการฆ่าเชื้อโรคส่วนหนึ่งเป็นเพราะการรักษาเหล่านี้เป็น neutralized โดยวัสดุอินทรีย์ที่มีอยู่ในอุจจาระ การวิจัยครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาการปฏิบัติการรักษาเพื่อกำจัดหรือควบคุมเชื้อ E . coli เป็นสมาชิก : H7 ในน้ำดื่ม โดยจำลองสภาวะฟาร์ม
วัสดุและวิธีการ
แบคทีเรียสายพันธุ์ ห้าแยกเชื้อ E . coli เป็นสมาชิก ) เช่น 932 ( มนุษย์แยก ) , e009 ( เนื้อแยก )e0018 ( โคแยก ) , e0122 ( โคแยก ) และ e0139 ( กวางกระตุกแยก ) ; ห้าแยกเชื้อ E . coli o26 : h11 ได้แก่ สายพันธุ์ dec10e ( โคแยก ) , dec9e ( โคแยก ) , dec10b ( โคแยก ) , 3079-97 ( มนุษย์แยก ) 3183-96 ( มนุษย์แยก ) ; และห้าสายพันธุ์ของเชื้อ E . coli o111 : nm ได้แก่สายพันธุ์ 3208-95 ( มนุษย์แยก ) , 0944-95 ( โคแยก )3287-97 ( มนุษย์แยก ) , 4543-95 ( โคแยก ) และ 0073-92 ( โคแยก ) , ถูกใช้เป็นห้าสายพันธุ์ผสมเฉพาะในแต่ละซีโรไทป์ . เพื่อความสะดวกในการเหล่านี้แบคทีเรียเชื้อทุกสายพันธุ์ที่ต้านทานสะพานกรุงธน ( 50 μ g / ml ) ตามขั้นตอนที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( 37 )แต่ละสายพันธุ์ ปลูกทีละ 10 ml ของน้ำซุปถั่วเหลืองอาหาร ( TSB ) ( เบคตอนดิกคินสันจุลชีววิทยาระบบ , ประกายไฟ , MD ) บรรจุ 50 กรัม μสะพานกรุงธน ( นา ) ( Sigma Chemical Co . , St . Louis , MO ) ต่อมิลลิลิตร ( tsb-na ) 16 ถึง 18 ชั่วโมง 37 ° C ด้วยการกวน 150 รอบต่อนาที ) เซลล์แบคทีเรียมี sedimented สามครั้งโดยการเหวี่ยงแยก ( 4 × g ; 20 นาที ) ; ล้าง 01 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.2 ( PBS ) , เกลือ และ resuspended ใน PBS เซลล์แขวนลอยอยู่ ปรับด้วย PBS กับความหนาแน่นของแสงที่ 630 nm 0.5 ( ประมาณ 108 CFU / ml ) 5 สายพันธุ์ของซีโรไทป์เดียวกันถูกรวมในตัวเลขเซลล์ประมาณเท่ากับซึ่งแต่ละสายพันธุ์แต่ละสายพันธุ์ผสมและห้า ,ถูกระบุบนอาหารวุ้นถั่วเหลืองอาหาร ( TSA ) และซอร์บิทอล Lynx ( SMA ) หรือ Lynx แผ่น ( ทั้งหมดที่ได้จากระบบเบคตอนดิกคินสันจุลชีววิทยา ) .
ของแต่ละเนื้อหา และอุจจาระ กระบวนการเนื้อหาหรืออุจจาระจากสามโคต่าง ๆรวม และใช้เป็นส่วนผสม เนื้อหาทั้งหมดรวบรวมจากโคเนื้อในการฆ่า และอุจจาระที่เก็บจากโคในฟาร์มโคนมจัดขึ้นที่ 4 ° C และใช้ภายใน 7 วัน ตัวอย่างต่าง ๆที่ได้จากโรงฆ่าสัตว์เดียวกันหรือฟาร์มใช้สำหรับการทดลองที่แตกต่างกัน .
รักษาแบคทีเรียแข่งขัน มีห้าสายพันธุ์ผสมของ E . coli เป็นสมาชิก : H7 ที่ 105 CFU / ml และผสม 3 สายพันธุ์แบคทีเรีย E . coli แข่งขัน 271 , 786 , 797 ) ( 37 ) ปฏิปักษ์กับ E . coli เป็นสมาชิก :107 CFU / ml ) ที่ถูกเพิ่มไปยังอาหารที่แตกต่างกันผสมน้ำในอัตราส่วน 100 : 1 และกระบวนการเนื้อหาของ 50 : 1 25 : 1 10 : 01 , , และ 5 : 1 และคณะ 21 ° C .
คลอรีนคลอรีนไดออกไซด์และการรักษา โซลูชั่นมาตรฐานคลอรีนได้จากบริษัท HACH ( เลิฟแลนด์ ,Co ) สดเจือจางในแต่ละการทดลองในคล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำที่จะต้องใช้สมาธิตามวิธีที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( 39 ) ฟรีคลอรีน ความเข้มข้นของคลอรีนเจือจาง โซลูชั่น วิเคราะห์ด้วยเครื่องไทเทรตแบบดิจิตอล ( HACH Co . ) E . coli ) ระงับการเป็นสมาชิก ( 1 มล. ) ที่ 108 ถึง 109 CFU / ml ได้เพิ่ม 199 มิลลิลิตรของน้ำที่มีอาหารเนื้อหาที่อัตราส่วน 100 : 1 : 501 , 25 : 1 และ 10 : 1 ( ปริมาตร / น้ำหนัก ) และ 5 ppm และสารละลายคลอรีน ( 4 ppm คลอรีนเป็นสูงสุดที่ตกค้างในน้ำดื่มฆ่าเชื้อระดับอนุญาตโดยหน่วยงานคุ้มครองสิ่งแวดล้อม ) ที่ 21 ° C และคนด้วยกวนแม่เหล็กบาร์ในเออร์เลนเมเยอร์ 500 มล. ขวด การศึกษากับการใช้คลอรีนขั้นตอนที่คล้ายคลึงกัน .
โอโซนบำบัดโอโซนที่ผลิตโดยห้องทดลองขนาดเครื่องผลิตโอโซน ( แบบ h-50 ; เครื่องมาราธอนนานาชาติ , Ephrata , PA ) พร้อมกับออกซิเจน ( แบบ as-12 ; airsep Buffalo , NY ) , และโอโซนความเข้มข้น ( ppm ) จะถูกวัดโดยวิธีคัลเลอริมิเตอร์คราม . โอโซนความเข้ม ( 22 24 ppm ที่ 5 ° C ) น้ำผสมภายใน 5 นาที เนื้อหาทั้งหมดที่อัตราส่วน 50 : 1 25 : 1 , 10 , 100 : 1 และ 5 : 1 .milli-q น้ำ ( milli-q การสังเคราะห์ A10 ; มิลลิคอร์ป , โตเกียว , MA ) ที่ใช้ในการควบคุม หนึ่งมิลลิลิตรของส่วนผสมของห้าสายพันธุ์ของเชื้อ E . coli เป็นสมาชิก : H7 ( 108 CFU / มิลลิลิตร ) ผสมกับ 199 มิลลิลิตรของน้ำโอโซนความเข้มด้วยเนื้อหาทั้งหมด 5 ° C และตัวอย่างที่ 0 ถึง 20 นาที
สารเคมี เคมีภัณฑ์ รวมทั้งกรดแล็กติก ( 0.05 ถึง 0.5 % ; ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ยุติธรรมสนามหญ้า , NJ ) , ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ ( 0.5% ;Sigma เคมี Inc . , St . Louis , MO ) , โซเดียมเบนโซเอต ( 0.1% ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ ) , กรดแคลเซียม ซัลเฟต ( 0.9 ถึง 4.5 % ; mionix อิงค์ , วิลล์ , อิลลินอยส์ ) , caprylic acid ( 0.05 1.5% อัลดริชเคมี Inc . , Milwaukee , WI ) , butyric acid ( 0.5 ถึง 4 % ; อัลดริชเคมีภัณฑ์ อิงค์ ) , กรดโพรพิ ( 0.5 ถึง 4 % ; Sigma เคมี Inc . ) และคลอรีน ( 10 , 000 ppm ; อัลดริชเคมี Inc . )ประเมินแยกหรือรวมกัน ความเข้มข้นที่ใช้สำหรับแต่ละสารเคมีประเมินจากผลการศึกษาก่อนหน้านี้ดำเนินการกับสารเคมีและ E . coli เป็นสมาชิกคล้ายเนื้อเยื่อประสาน ) ในน้ำ สารเคมีเพื่อลดปริมาณน้ำที่เหมาะสมใน milli-q ( milli-q การสังเคราะห์ A10 ; มิลลิ Corp . ) โดยทดสอบกับเชื้อบริสุทธิ์ของ E . coli เป็นสมาชิก : H7 .ประสิทธิภาพทางเคมีหรือการรวมกันของสารเคมีที่แตกต่างกันต่อผลที่ทดสอบฆ่า 21 ° C ใน E . coli เป็นสมาชิก : H7 ในน้ำประปาที่มีต่อเนื้อหาที่แตกต่างกันทั้งหมดที่อธิบายข้างต้น .
แจงสะพานกรุงธนป้องกันเชื้อ อีโคไล ที่กําหนดเวลาสุ่ม 1.0 มล. ในการรักษา bacterial suspension ถูกเอาออก และผสมกับ 90 มลของ neutralizing บัฟเฟอร์ ( เบคตอนดิกคินสันระบบจุลชีววิทยา ) แบคทีเรียเป็นอนุกรม ( 1 : 10 ) เจือจางในน้ำและ 0.1% ตามลำดับ , 0.1 มิลลิลิตร คือ ผิวชุบบนแต่ละ dilution TSA ที่มี 50 μ g na / ml ( tsa-na ) และ SMA ที่มี 50 μ g na / ml ( sma-na ) ซ้ำบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง อาณานิคมทั่วไปของ E . coli เป็นสมาชิก : ( ลบ ) ซอร์บิทอล ) เรา
การยับยั้ง Escherichia coli ในกระเพาะรูเมนของ enterohemorrhagic เนื้อหาหรืออุจจาระปนเปื้อนน้ำดื่มโค
Tong Zhao Ping Zhao [ . . . ] และไมเคิลดอยล์
P
ข้อมูลเพิ่มเติมบทความบทคัดย่อโคดื่มน้ำเป็นแหล่งที่มาของฟาร์ม Escherichia coli เป็นสมาชิก ) ส่ง มีฤทธิ์การต้านสารเพื่อควบคุมเชื้อ E . coli เป็นสมาชิก : H7 ในน้ำดื่มฟาร์มบ่อยแล้ว โดยตนของกระบวนการและเนื้อหาที่มักจะปนเปื้อนปุ๋ยคอกน้ําดื่ม การรักษาทางเคมีที่แตกต่างกัน ได้แก่ กรดแลคติกกรดแคลเซียม ซัลเฟต , คลอรีนคลอรีนไดออกไซด์ , ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ , caprylic acid , โอโซน , butyric acid , sodium benzoate และการแข่งขัน E . coli , ทดสอบเป็นรายบุคคลหรือในการรวมกันเพื่อทำให้เป็นสมาชิกของ E . coli ) ในการแสดงตนของแต่ละเนื้อหา คลอรีน ( 5 ppm ) โอโซน ( 22 - 24 ppm ที่ 5 ° C ) , และการแข่งขัน E . coli รักษาน้ำได้ผลน้อย ( < 1 log CFU / ml ลด ) ฆ่าเชื้อ E . coli เป็นสมาชิก :) ในการแสดงตนของแต่ละเนื้อหาแต่ละเนื้อหาที่น้ำอัตราส่วน 50 : 1 ( ปริมาตร / น้ำหนัก ) และต่ำกว่า 4 การรักษาทางเคมีชุด ได้แก่ ( 1 ) 0.1% กรดแลกติก , 0.9% ซัลเฟตกรดแคลเซียมและกรดคาพริลิก 0.05 % ( รักษา ) ; ( 2 ) 0.1% กรดแลกติก , 0.9% และ 0.1% กรดแคลเซียม ซัลเฟต , โซเดียมเบนโซเอต ( การรักษา B ) ; ( 3 ) 0.1% กรดแลกติก , 0.9 % กรดแคลเซียม ซัลเฟต และ 05% butyric acid ( รักษา C ) ; และ ( iv ) 0.1% กรดแลกติก , 0.9% ซัลเฟตกรดแคลเซียม และ 100 ppm คลอรีนไดออกไซด์ ( รักษา D ) ; มีประสิทธิภาพสูง ( > 3 log CFU / ml ลด ) ที่ 21 ° C ในการฆ่าเชื้อ E . coli เป็นสมาชิก ) o26 : h11 และ o111 : nm ในน้ำที่ปนเปื้อนมากกับเนื้อหาทั้งหมด ( 10 : 1 อัตราส่วนน้ำต่อกระบวนการเนื้อหา [ Vol / WT ] ) หรืออุจจาระ ( อุจจาระ : น้ำ / อัตราส่วน [ Vol / WT ] ) ในหมู่พวกเขา , การรักษา A , Bและ C ฆ่า > เข้าสู่ระบบเซลล์ E . coli เป็นสมาชิก ) o26 : h11 และ o111 : nm / ml ภายใน 30 นาทีในน้ำที่มีกระบวนการเนื้อหาหรืออุจจาระ ในขณะที่การรักษา D ซึ่งใช้ประมาณ 3 ถึง 4 log CFU / ml ได้ภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน โคได้รับน้ำที่มีการรักษาหรือ C หรือสารน้ำ ( ควบคุม ) อย่างเต็มที่สองระยะเวลา 7 วัน ดื่มตอน 15.2 , , และ 30.3 ลิตร / วัน ตามลำดับและปศุสัตว์ที่ได้รับน้ำที่ประกอบด้วย 0.1% กรดบวก 0.9% แคลเซียมซัลเฟตกรด ( pH 2.1 ) ดื่ม 18.6 ลิตร / วัน ปริมาณของน้ำที่ใช้สำหรับการรักษาน้ำที่แตกต่างกันจากที่ควบคุม แต่ไม่พบความแตกต่างระหว่างน้ำบำบัด การรักษาดังกล่าวอาจต้องใช้เป็นระยะ ๆเพื่อดื่มน้ำ troughs แล้วสวยมากกว่าการเพิ่มอย่างต่อเนื่อง เพื่อหลีกเลี่ยงการใช้น้ำ โดยโค
Escherichia coli เป็นสมาชิก ) ได้เกิดขึ้นในช่วง 10 ปี เป็นอาหารที่สำคัญของพาหะเชื้อโรค ( 12 , 15 , 22 , 30 , 32 , 36 ) มีประมาณ 73 , 000 ราย เชื้อ E . coli เป็นสมาชิกเป็นประจำทุกปีในประเทศสหรัฐอเมริกา 23 ) วัวเป็นอ่างเก็บน้ำที่สำคัญของ E . coli เป็นสมาชิก ) ( 2 , 4 , 5 , 7 ) ,และ troughs น้ำวัวเป็นสำคัญแหล่งที่มาของเชื้อโรคในฟาร์ม ( 2 , 4 , 5 , 7 , 17 , 20 , 21 , 27 , 28 , 37 ) การศึกษาได้เปิดเผยเพิ่มเติมว่า เมื่อปัจจุบันในโคดื่มน้ำ เชื้อนี้ถูกเผยแพร่อื่น ๆสัตว์บริโภคน้ำที่ปนเปื้อน ( 19 , 29 )
subtyping พัลส์ฟิลด์ gel electrophoresis โดยจีโนมของเชื้อ E . coli เป็นสมาชิก : H7 สายพันธุ์จากฟาร์ม พบว่าเป็นสมาชิกเดียว :H7 สายพันธุ์เด่นในสายพันธุ์จากเพื่อนร่วมงาน และฝูงวัว noncohort น้ำและตัวอย่างบวกอื่น ๆ ( เช่น จากอาหาร , แมลงวัน , นกพิราบ , ฯลฯ ) ในฟาร์ม ( 29 ) ข้อมูลนี้แสดงให้เห็นว่าการดื่มน้ำเป็นยานพาหนะที่สำคัญ เพื่อเผยแพร่ E . coli เป็นสมาชิก : H7 ในฟาร์มและวิธีการสำหรับการรักษาของการดื่มน้ำในฟาร์ม จำเป็นสำหรับการลดเชื้อโรค .
จากการศึกษาพบว่า E . coli เป็นสมาชิก : H7 สามารถอยู่รอดในโคดื่มน้ำนานถึง 12 เดือน ) ( 13 , 19 , 29 ) ความหลากหลายของการรักษาได้รับการประเมินประสิทธิภาพในการฆ่าเชื้อ E . coli เป็นสมาชิก : H7 ในน้ำดื่มที่ปนเปื้อนอุจจาระของวัว ( 9 , 10 , 17 , 24 ) ผลการศึกษา พบว่า ส่วนใหญ่มีผลกระทบน้อยที่สุดในการฆ่าเชื้อโรคส่วนหนึ่งเป็นเพราะการรักษาเหล่านี้เป็น neutralized โดยวัสดุอินทรีย์ที่มีอยู่ในอุจจาระ การวิจัยครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาการปฏิบัติการรักษาเพื่อกำจัดหรือควบคุมเชื้อ E . coli เป็นสมาชิก : H7 ในน้ำดื่ม โดยจำลองสภาวะฟาร์ม
วัสดุและวิธีการ
แบคทีเรียสายพันธุ์ ห้าแยกเชื้อ E . coli เป็นสมาชิก ) เช่น 932 ( มนุษย์แยก ) , e009 ( เนื้อแยก )e0018 ( โคแยก ) , e0122 ( โคแยก ) และ e0139 ( กวางกระตุกแยก ) ; ห้าแยกเชื้อ E . coli o26 : h11 ได้แก่ สายพันธุ์ dec10e ( โคแยก ) , dec9e ( โคแยก ) , dec10b ( โคแยก ) , 3079-97 ( มนุษย์แยก ) 3183-96 ( มนุษย์แยก ) ; และห้าสายพันธุ์ของเชื้อ E . coli o111 : nm ได้แก่สายพันธุ์ 3208-95 ( มนุษย์แยก ) , 0944-95 ( โคแยก )3287-97 ( มนุษย์แยก ) , 4543-95 ( โคแยก ) และ 0073-92 ( โคแยก ) , ถูกใช้เป็นห้าสายพันธุ์ผสมเฉพาะในแต่ละซีโรไทป์ . เพื่อความสะดวกในการเหล่านี้แบคทีเรียเชื้อทุกสายพันธุ์ที่ต้านทานสะพานกรุงธน ( 50 μ g / ml ) ตามขั้นตอนที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( 37 )แต่ละสายพันธุ์ ปลูกทีละ 10 ml ของน้ำซุปถั่วเหลืองอาหาร ( TSB ) ( เบคตอนดิกคินสันจุลชีววิทยาระบบ , ประกายไฟ , MD ) บรรจุ 50 กรัม μสะพานกรุงธน ( นา ) ( Sigma Chemical Co . , St . Louis , MO ) ต่อมิลลิลิตร ( tsb-na ) 16 ถึง 18 ชั่วโมง 37 ° C ด้วยการกวน 150 รอบต่อนาที ) เซลล์แบคทีเรียมี sedimented สามครั้งโดยการเหวี่ยงแยก ( 4 × g ; 20 นาที ) ; ล้าง 01 M ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.2 ( PBS ) , เกลือ และ resuspended ใน PBS เซลล์แขวนลอยอยู่ ปรับด้วย PBS กับความหนาแน่นของแสงที่ 630 nm 0.5 ( ประมาณ 108 CFU / ml ) 5 สายพันธุ์ของซีโรไทป์เดียวกันถูกรวมในตัวเลขเซลล์ประมาณเท่ากับซึ่งแต่ละสายพันธุ์แต่ละสายพันธุ์ผสมและห้า ,ถูกระบุบนอาหารวุ้นถั่วเหลืองอาหาร ( TSA ) และซอร์บิทอล Lynx ( SMA ) หรือ Lynx แผ่น ( ทั้งหมดที่ได้จากระบบเบคตอนดิกคินสันจุลชีววิทยา ) .
ของแต่ละเนื้อหา และอุจจาระ กระบวนการเนื้อหาหรืออุจจาระจากสามโคต่าง ๆรวม และใช้เป็นส่วนผสม เนื้อหาทั้งหมดรวบรวมจากโคเนื้อในการฆ่า และอุจจาระที่เก็บจากโคในฟาร์มโคนมจัดขึ้นที่ 4 ° C และใช้ภายใน 7 วัน ตัวอย่างต่าง ๆที่ได้จากโรงฆ่าสัตว์เดียวกันหรือฟาร์มใช้สำหรับการทดลองที่แตกต่างกัน .
รักษาแบคทีเรียแข่งขัน มีห้าสายพันธุ์ผสมของ E . coli เป็นสมาชิก : H7 ที่ 105 CFU / ml และผสม 3 สายพันธุ์แบคทีเรีย E . coli แข่งขัน 271 , 786 , 797 ) ( 37 ) ปฏิปักษ์กับ E . coli เป็นสมาชิก :107 CFU / ml ) ที่ถูกเพิ่มไปยังอาหารที่แตกต่างกันผสมน้ำในอัตราส่วน 100 : 1 และกระบวนการเนื้อหาของ 50 : 1 25 : 1 10 : 01 , , และ 5 : 1 และคณะ 21 ° C .
คลอรีนคลอรีนไดออกไซด์และการรักษา โซลูชั่นมาตรฐานคลอรีนได้จากบริษัท HACH ( เลิฟแลนด์ ,Co ) สดเจือจางในแต่ละการทดลองในคล้ายเนื้อเยื่อประสานน้ำที่จะต้องใช้สมาธิตามวิธีที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( 39 ) ฟรีคลอรีน ความเข้มข้นของคลอรีนเจือจาง โซลูชั่น วิเคราะห์ด้วยเครื่องไทเทรตแบบดิจิตอล ( HACH Co . ) E . coli ) ระงับการเป็นสมาชิก ( 1 มล. ) ที่ 108 ถึง 109 CFU / ml ได้เพิ่ม 199 มิลลิลิตรของน้ำที่มีอาหารเนื้อหาที่อัตราส่วน 100 : 1 : 501 , 25 : 1 และ 10 : 1 ( ปริมาตร / น้ำหนัก ) และ 5 ppm และสารละลายคลอรีน ( 4 ppm คลอรีนเป็นสูงสุดที่ตกค้างในน้ำดื่มฆ่าเชื้อระดับอนุญาตโดยหน่วยงานคุ้มครองสิ่งแวดล้อม ) ที่ 21 ° C และคนด้วยกวนแม่เหล็กบาร์ในเออร์เลนเมเยอร์ 500 มล. ขวด การศึกษากับการใช้คลอรีนขั้นตอนที่คล้ายคลึงกัน .
โอโซนบำบัดโอโซนที่ผลิตโดยห้องทดลองขนาดเครื่องผลิตโอโซน ( แบบ h-50 ; เครื่องมาราธอนนานาชาติ , Ephrata , PA ) พร้อมกับออกซิเจน ( แบบ as-12 ; airsep Buffalo , NY ) , และโอโซนความเข้มข้น ( ppm ) จะถูกวัดโดยวิธีคัลเลอริมิเตอร์คราม . โอโซนความเข้ม ( 22 24 ppm ที่ 5 ° C ) น้ำผสมภายใน 5 นาที เนื้อหาทั้งหมดที่อัตราส่วน 50 : 1 25 : 1 , 10 , 100 : 1 และ 5 : 1 .milli-q น้ำ ( milli-q การสังเคราะห์ A10 ; มิลลิคอร์ป , โตเกียว , MA ) ที่ใช้ในการควบคุม หนึ่งมิลลิลิตรของส่วนผสมของห้าสายพันธุ์ของเชื้อ E . coli เป็นสมาชิก : H7 ( 108 CFU / มิลลิลิตร ) ผสมกับ 199 มิลลิลิตรของน้ำโอโซนความเข้มด้วยเนื้อหาทั้งหมด 5 ° C และตัวอย่างที่ 0 ถึง 20 นาที
สารเคมี เคมีภัณฑ์ รวมทั้งกรดแล็กติก ( 0.05 ถึง 0.5 % ; ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ยุติธรรมสนามหญ้า , NJ ) , ไฮโดรเจนเปอร์ออกไซด์ ( 0.5% ;Sigma เคมี Inc . , St . Louis , MO ) , โซเดียมเบนโซเอต ( 0.1% ฟิชเชอร์ทางวิทยาศาสตร์ ) , กรดแคลเซียม ซัลเฟต ( 0.9 ถึง 4.5 % ; mionix อิงค์ , วิลล์ , อิลลินอยส์ ) , caprylic acid ( 0.05 1.5% อัลดริชเคมี Inc . , Milwaukee , WI ) , butyric acid ( 0.5 ถึง 4 % ; อัลดริชเคมีภัณฑ์ อิงค์ ) , กรดโพรพิ ( 0.5 ถึง 4 % ; Sigma เคมี Inc . ) และคลอรีน ( 10 , 000 ppm ; อัลดริชเคมี Inc . )ประเมินแยกหรือรวมกัน ความเข้มข้นที่ใช้สำหรับแต่ละสารเคมีประเมินจากผลการศึกษาก่อนหน้านี้ดำเนินการกับสารเคมีและ E . coli เป็นสมาชิกคล้ายเนื้อเยื่อประสาน ) ในน้ำ สารเคมีเพื่อลดปริมาณน้ำที่เหมาะสมใน milli-q ( milli-q การสังเคราะห์ A10 ; มิลลิ Corp . ) โดยทดสอบกับเชื้อบริสุทธิ์ของ E . coli เป็นสมาชิก : H7 .ประสิทธิภาพทางเคมีหรือการรวมกันของสารเคมีที่แตกต่างกันต่อผลที่ทดสอบฆ่า 21 ° C ใน E . coli เป็นสมาชิก : H7 ในน้ำประปาที่มีต่อเนื้อหาที่แตกต่างกันทั้งหมดที่อธิบายข้างต้น .
แจงสะพานกรุงธนป้องกันเชื้อ อีโคไล ที่กําหนดเวลาสุ่ม 1.0 มล. ในการรักษา bacterial suspension ถูกเอาออก และผสมกับ 90 มลของ neutralizing บัฟเฟอร์ ( เบคตอนดิกคินสันระบบจุลชีววิทยา ) แบคทีเรียเป็นอนุกรม ( 1 : 10 ) เจือจางในน้ำและ 0.1% ตามลำดับ , 0.1 มิลลิลิตร คือ ผิวชุบบนแต่ละ dilution TSA ที่มี 50 μ g na / ml ( tsa-na ) และ SMA ที่มี 50 μ g na / ml ( sma-na ) ซ้ำบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 24 ชั่วโมง อาณานิคมทั่วไปของ E . coli เป็นสมาชิก : ( ลบ ) ซอร์บิทอล ) เรา
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- ชีวิตคู่
- น้าบอกว่าฉันสามารถไปหาเขาได้ช่วงเดือนมิถ
- May be
- น้าบอกว่าฉันสามารถไปหาเขาได้ช่วงเดือนมิถ
- สวยมาก
- โอเค แล้วมาบอกฉันด้วย ขอบคุณมาก
- ฉันรู้ว่าฉันควรเปิดเผยอะไรให้พวกเขารู้บ้
- น้าบอกว่าฉันสามารถไปหาเขาได้ช่วงเดือนมิถ
- ฉันอยากรู้จักเพื่อนๆจากทั่วโลก
- มันเป็นเพลงที่น่ารัก
- วัยสาว
- There are full-time fishers using a vari
- สวัสดีสุภาพบุรุษและสุภาพสตรี.ผมยินดีเป็น
- ฉันมาที่นี่เพื่อที่จะ..
- to walk and stand behind the curtain
- fault
- คุณดูง่วง
- in the article entitled"the truth about
- ทำงานอยู่ทำไมออนได้
- Re: [no subject]Ofcourse! I don't know i
- ฉันรู้ว่าฉันควรเปิดเผยอะไรบ้าง
- ปิดเทอมแค่1สัปดาห์.ฉันต้องเรียนซัมเมอร์อ
- มีอะไรให้ช่วยไหมค่ะ
- So rich
