5.6.1. Sample preparation for measu

5.6.1. Sample preparation for measuring caspase activation by
immunoblotting
Cell lysates are made as described in Section 5.2. After adding
0.2 volume of 5 Laemmli buffer, boil the sample for 5–10 min.
Laemmli buffer 5 contains 312.5 mM Tris–HCl, pH 6.8, 10% SDS,
50% glycerol and 20% b-mercapto-ethanol. Equal volumes are
loaded on 12.5% SDS–polyacrylamide gels, and after separation
the proteins are transferred to a nitrocellulose membrane. The different
caspases are detected with the appropriate antibodies. The
signal is revealed with, e.g. Chemiluminescence Reagent Plus
(PerkinElmer Life Sciences, Boston, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

5.6.1 ตัวอย่างการเตรียมการสำหรับวัด caspase เปิดใช้งานโดยimmunoblottingLysates เซลล์จะตามที่อธิบายไว้ในหัวข้อ 5.2 หลังจากเพิ่มปริมาตร 0.2 5 Laemmli บัฟเฟอร์ ต้มอย่างใน 5 – 10 นาทีทริสเรทติ้ง – HCl ค่า pH 6.8, 10% SDS, 312.5 มม.ประกอบด้วยบัฟเฟอร์ Laemmli 5กลีเซอร 50% และ 20% b-mercapto-เอทานอล ปริมาณเท่ากันโหลดบน SDS – polyacrylamide 12.5% และแยกโปรตีนที่จะถูกโอนไปเยื่อ nitrocellulose ที่แตกต่างกันcaspases ตรวจพบแอนตี้ที่เหมาะสม ที่สัญญาณถูกเปิดเผยพร้อม เช่น Chemiluminescence รีเอเจนต์(PerkinElmer วิทยาศาสตร์สุขภาพ บอสตัน สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

5.6.1 การเตรียมความพร้อมสำหรับการวัดตัวอย่างยืนยันการใช้งาน caspase โดย
immunoblotting
lysates เซลล์จะทำตามที่อธิบายไว้ในมาตรา 5.2 หลังจากที่เพิ่ม
0.2 ปริมาณของ 5? บัฟเฟอร์ Laemmli ต้มตัวอย่างประมาณ 5-10 นาที.
Laemmli บัฟเฟอร์ 5? มี 312.5 มิลลิ Tris-HCl พีเอช 6.8, 10% SDS,
กลีเซอรีน 50% และ 20% B-mercapto เอทานอล ปริมาณเท่ากัน
โหลดบน 12.5% ​​เจล SDS-polyacrylamide และหลังจากการแยก
โปรตีนจะถูกโอนไปเยื่อ nitrocellulose ที่แตกต่างกัน
caspases มีการตรวจพบแอนติบอดีที่มีความเหมาะสม
สัญญาณจะถูกเปิดเผยด้วยเช่น Chemiluminescence Reagent พลัส
(PerkinElmer วิทยาศาสตร์เพื่อชีวิต, บอสตัน, สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

5.6.1 . การเตรียมตัวอย่างสำหรับการวัดการกระตุ้นด้วย

แคสเปส ) เซลล์ lysates จะทําตามที่อธิบายไว้ในส่วน 5.2 . หลังจากเพิ่มปริมาณ 5 
0.2 laemmli บัฟเฟอร์ ต้มตัวอย่าง 5 – 10 นาที
laemmli บัฟ 5  ประกอบด้วย 312.5 มม. นอกจากนี้ – HCl , pH 6.8 , 10% SDS ,
โต 50% และ 20% b-mercapto-ethanol . มีปริมาณเท่ากับ
โหลด 12.5% SDS polyacrylamide เจลฯ และหลังจากแยก
โปรตีนจะถูกโอนย้ายไปเป็นไนโตรเซลลูโลสเมมเบรน การ caspases แตกต่างกัน
ตรวจพบมีแอนติบอดีที่เหมาะสม
สัญญาณจะถูกเปิดเผยด้วย เช่น เคมีลูมิเนสเซนต์บวก
( วิทยาศาสตร์ , Perkinelmer ชีวิตบอสตัน สหรัฐอเมริกา )