ment and validation of the HPLC met

ment and validation of the HPLC method
To permit meaningful conclusions the number of investigated
compounds was increased to nine (aromatic amino acids, nucleic
bases and nucleosides). Their polar nature renders an analysis by
reversed phase chromatography difficult, and most screened stationary
phases resulted in poor retention or partial overlap of the
compounds of interest. From the tested columns only one (Triart
C-18) showed satisfactory results, but only after all relevant separation
parameters were optimized. The use of acetonitrile and a
buffer (10 mM ammonium acetate with pH 4.75) were required
for acceptable peak shape, and a highly aqueous gradient for retention.
The latter was further improved by setting the column temperature
to 20 C. This setup permitted the separation of all 9
standards in less than 30 min (Fig. 3).
As quantitative studies were attempted the developed HPLC
assay had to be validated, whereby the respective ICH guidelines
were followed. The validation results are summarized in Table 1.
For all analytes a linear range from at least 94.9 to 4.92 lg/ml
was obtained, with excellent correlation coefficients between
0.999 and 1.000. The limits of detection and limits of quantification
were found to be from 0.08 to 1.43 lg/ml and from 0.23 to
4.35 lg/ml, respectively. Selectivity of the method was assured
by no visible co-elutions (shoulders) in the relevant signals, and
by very consistent UV spectra within the respective peaks. The latter
was confirmed by using the peak-purity option in the operating
software. Intra-day (RSD: 0.20–4.03%) and inter-day precision
(RSD: 0.45–4.03%) were well acceptable too, only inosine showed
a higher intra-day variation of 9.21%. Accuracy was assured by
spiking accurately weighted samples of L. foveolarum with three
different concentrations of the standards. For nearly all compounds
the observed recovery rates were between 94.1% and 100.8%.
Inosine was again an exception, which possibly is due to its unstable
nature and decomposition during extraction. This effect however,
has been described in literature for other matrices already
[27].

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ment และการตรวจสอบของวิธี HPLC ment and validation of the HPLC method
ได้ที่จะอนุญาตให้มีข้อสรุปที่มีความหมายจำนวนการตรวจสอบสารที่เพิ่มขึ้นถึงเก้าTo permit meaningful conclusions the number of investigated
(กรดอะมิโนอะโรเมติกนิวคลีอิกฐานและ nucleosides) ธรรมชาติขั้วของพวกเขาแสดงผลการวิเคราะห์โดยโคเฟสกลับยากและฉายนิ่งมากที่สุดขั้นตอนการเก็บรักษาผลในการที่ไม่ดีหรือบางส่วนที่ทับซ้อนกันของสารที่น่าสนใจ จากคอลัมน์ทดสอบเพียงหนึ่ง (Triart C-18) แสดงให้เห็นผลที่น่าพอใจ แต่หลังจากแยกที่เกี่ยวข้องทั้งหมดพารามิเตอร์ได้รับการปรับให้เหมาะสม การใช้ acetonitrile และบัฟเฟอร์(10 มิลลิแอมโมเนียมอะซิเตทที่มีค่า pH 4.75) ที่ถูกต้องสำหรับรูปร่างสูงสุดที่ยอมรับได้และการไล่ระดับสีน้ำสูงสำหรับการเก็บรักษา. หลังได้รับการปรับปรุงให้ดีขึ้นต่อไปโดยการตั้งค่าอุณหภูมิคอลัมน์ถึง 20 องศาเซลเซียส การตั้งค่านี้ได้รับอนุญาตแยกทั้งหมด 9 มาตรฐานในเวลาน้อยกว่า 30 นาที (รูปที่. 3). ในฐานะที่ได้รับการศึกษาเชิงปริมาณพยายาม HPLC เพื่อการพัฒนาทดสอบจะต้องมีการตรวจสอบโดยแนวทางICH ที่เกี่ยวข้องตาม ผลการตรวจสอบได้สรุปไว้ในตารางที่ 1 สำหรับทุกช่วงวิเคราะห์เชิงเส้นอย่างน้อย 94.9-4.92 ๆ lg / ml ที่ได้รับมีความสัมพันธ์ที่ยอดเยี่ยมสัมประสิทธิ์ระหว่าง0.999 และ 1.000 ข้อ จำกัด ของการตรวจสอบและข้อ จำกัด ของปริมาณที่พบจะเป็น0.08-1.43 ๆ lg / ml และเพื่อ 0.23 จาก4.35 LG / ml ตามลำดับ การเลือกของวิธีการก็มั่นใจโดยไม่มี elutions ร่วมที่มองเห็น (ไหล่) ในการส่งสัญญาณที่เกี่ยวข้องและจากรังสียูวีสเปกตรัมสอดคล้องมากภายในยอดเขาที่เกี่ยวข้อง หลังได้รับการยืนยันโดยใช้ตัวเลือกยอดเขาที่มีความบริสุทธิ์ในการดำเนินงานของซอฟแวร์ ระหว่างวัน (RSD: 0.20-4.03%) และความแม่นยำระหว่างวัน(RSD: 0.45-4.03%) เป็นที่ยอมรับกันมากเกินไปเพียง inosine แสดงให้เห็นการเปลี่ยนแปลงภายในวันที่สูงขึ้นของ9.21% ความถูกต้องก็มั่นใจโดยspiking ตัวอย่างน้ำหนักอย่างถูกต้องของแอล foveolarum มีสามระดับความเข้มข้นที่แตกต่างกันของมาตรฐาน compounds was increased to nine (aromatic amino acids, nucleic
bases and nucleosides). Their polar nature renders an analysis by
reversed phase chromatography difficult, and most screened stationary
phases resulted in poor retention or partial overlap of the
compounds of interest. From the tested columns only one (Triart
C-18) showed satisfactory results, but only after all relevant separation
parameters were optimized. The use of acetonitrile and a
buffer (10 mM ammonium acetate with pH 4.75) were required
for acceptable peak shape, and a highly aqueous gradient for retention.
The latter was further improved by setting the column temperature
to 20 C. This setup permitted the separation of all 9
standards in less than 30 min (Fig. 3).
As quantitative studies were attempted the developed HPLC
assay had to be validated, whereby the respective ICH guidelines
were followed. The validation results are summarized in Table 1.
For all analytes a linear range from at least 94.9 to 4.92 lg/ml
was obtained, with excellent correlation coefficients between
0.999 and 1.000. The limits of detection and limits of quantification
were found to be from 0.08 to 1.43 lg/ml and from 0.23 to
4.35 lg/ml, respectively. Selectivity of the method was assured
by no visible co-elutions (shoulders) in the relevant signals, and
by very consistent UV spectra within the respective peaks. The latter
was confirmed by using the peak-purity option in the operating
software. Intra-day (RSD: 0.20–4.03%) and inter-day precision
(RSD: 0.45–4.03%) were well acceptable too, only inosine showed
a higher intra-day variation of 9.21%. Accuracy was assured by
spiking accurately weighted samples of L. foveolarum with three
different concentrations of the standards. For nearly all compounds
the observed recovery rates were between 94.1% and 100.8%.
Inosine was again an exception, which possibly is due to its unstable
nature and decomposition during extraction. This effect however,
has been described in literature for other matrices already
[27].

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การตรวจสอบของ HPLC วิธี
ให้ความหมายสรุปจํานวนสอบสวน
สารประกอบเพิ่มเป็นเก้า ( อะโรมาติกกรดอะมิโนกรดนิวคลีอิกและฐาน
nucleosides ) ธรรมชาติของขั้วโลกแสดงการวิเคราะห์โดย
กลับเฟสโครมาโทกราฟีที่ยากที่สุด และมีผลในการคัดกรองเครื่องเขียน
ระยะไม่ดีหรือบางส่วนที่ทับซ้อนกันของ
สารประกอบที่น่าสนใจการตรวจสอบของ HPLC วิธี
ให้ความหมายสรุปจํานวนสอบสวน
สารประกอบเพิ่มเป็นเก้า ( อะโรมาติกกรดอะมิโนกรดนิวคลีอิกและฐาน
nucleosides ) ธรรมชาติของขั้วโลกแสดงการวิเคราะห์โดย
กลับเฟสโครมาโทกราฟีที่ยากที่สุด และมีผลในการคัดกรองเครื่องเขียน
ระยะไม่ดีหรือบางส่วนที่ทับซ้อนกันของ
สารประกอบที่น่าสนใจการตรวจสอบของ HPLC วิธี
ให้ความหมายสรุปจํานวนสอบสวน
สารประกอบเพิ่มเป็นเก้า ( อะโรมาติกกรดอะมิโนกรดนิวคลีอิกและฐาน
nucleosides ) ธรรมชาติของขั้วโลกแสดงการวิเคราะห์โดย
กลับเฟสโครมาโทกราฟีที่ยากที่สุด และมีผลในการคัดกรองเครื่องเขียน
ระยะไม่ดีหรือบางส่วนที่ทับซ้อนกันของ
สารประกอบที่น่าสนใจการตรวจสอบของ HPLC วิธี
ให้ความหมายสรุปจํานวนสอบสวน
สารประกอบเพิ่มเป็นเก้า ( อะโรมาติกกรดอะมิโนกรดนิวคลีอิกและฐาน
nucleosides ) ธรรมชาติของขั้วโลกแสดงการวิเคราะห์โดย
กลับเฟสโครมาโทกราฟีที่ยากที่สุด และมีผลในการคัดกรองเครื่องเขียน
ระยะไม่ดีหรือบางส่วนที่ทับซ้อนกันของ
สารประกอบที่น่าสนใจการตรวจสอบของ HPLC วิธี
ให้ความหมายสรุปจํานวนสอบสวน
สารประกอบเพิ่มเป็นเก้า ( อะโรมาติกกรดอะมิโนกรดนิวคลีอิกและฐาน
nucleosides ) ธรรมชาติของขั้วโลกแสดงการวิเคราะห์โดย
กลับเฟสโครมาโทกราฟีที่ยากที่สุด และมีผลในการคัดกรองเครื่องเขียน
ระยะไม่ดีหรือบางส่วนที่ทับซ้อนกันของ
สารประกอบที่น่าสนใจการตรวจสอบของ HPLC วิธี
ให้ความหมายสรุปจํานวนสอบสวน
สารประกอบเพิ่มเป็นเก้า ( อะโรมาติกกรดอะมิโนกรดนิวคลีอิกและฐาน
nucleosides ) ธรรมชาติของขั้วโลกแสดงการวิเคราะห์โดย
กลับเฟสโครมาโทกราฟีที่ยากที่สุด และมีผลในการคัดกรองเครื่องเขียน
ระยะไม่ดีหรือบางส่วนที่ทับซ้อนกันของ
สารประกอบที่น่าสนใจ