AbstractA novel fluorescence in sit

Abstract
A novel fluorescence in situ hybridisation (FISH) method is presented that allows the combination of epifluorescence and scanning electron microscopy (SEM) to identify single microbial cells. First, the rRNA of whole cells is hybridised with horseradish peroxidase-labelled oligonucleotide probes and this is followed by catalysed reporter deposition (CARD) of biotinylated tyramides. This facilitates an amplification of binding sites for streptavidin conjugates covalently labelled with both fluorophores and nanogold particles. The deposition of Alexa Fluor 488 fluoro-nanogold–streptavidin conjugates was confirmed via epifluorescence microscopy and cells could be quantified in a similar way to standard CARD–FISH approaches. To detect cells by SEM, an autometallographic enhancement of the nanogold particles was essential, and allowed the in situ localisation of the target organisms at resolutions beyond light microscopy. Energy dispersive X-ray spectroscopy (EDS) was used to verify the effects of CARD and autometallography on gold deposition in target cells.

The gold-FISH protocol was developed and optimised using pure cultures and environmental samples, such as rice roots and marine sediments. The combination of epifluorescence and scanning electron microscopy provides a promising tool for investigating microorganisms at levels of high resolution. Correlative characterisation of physicochemical properties by EDS will allow for the analysis of microbe-surface interactions.

Keywords
Gold-FISH; Nanogold; CARD–FISH; Scanning electron microscopy; Epifluorescence microscopy; In situ hybridisation

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

บทคัดย่อFluorescence นวนิยายในซิ hybridisation (ปลา) วิธีการนำเสนอที่ช่วยให้ epifluorescence และสแกน microscopy อิเล็กตรอน (SEM) เพื่อระบุจุลินทรีย์เซลล์เดียว ครั้งแรก rRNA ของเซลล์ทั้งหมดคือ hybridised กับคลิปปากตะเข้ oligonucleotide peroxidase มัน horseradish และนี้ตาม ด้วยโปรแกรมรายงาน catalysed สะสม (บัตร) ของ biotinylated tyramides นี้ช่วยขยายความของการผูกสำหรับ streptavidin conjugates มัน covalently กับ fluorophores และ nanogold อนุภาค สะสมของ Alexa Fluor 488 fluoro-nanogold – streptavidin conjugates ได้รับการยืนยันผ่าน epifluorescence microscopy และเซลล์ที่สามารถ quantified ในลักษณะคล้ายกับแนวทางมาตรฐานบัตร – ปลา เพื่อตรวจหาเซลล์ โดย SEM ปรับปรุง autometallographic ของอนุภาค nanogold จำเป็น และอนุญาตให้สังคมธุรกิจใน situ ของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายความละเอียดเกิน microscopy แสง กเอ็กซ์เรย์ dispersive พลังงาน (EDS) ถูกใช้เพื่อตรวจสอบผลของการ์ดและ autometallography การสะสมทองในเซลล์เป้าหมายโพรโทคอลปลาทองได้รับการพัฒนา และใช้วัฒนธรรมบริสุทธิ์และตัวอย่างสิ่งแวดล้อม รากข้าวและตะกอนทะเลเหมาะงานกราฟฟิก Epifluorescence และสแกน microscopy อิเล็กตรอนแสดงเครื่องมือสัญญาสำหรับการตรวจสอบจุลินทรีย์ในระดับของความละเอียดสูง ตรวจลักษณะเฉพาะของ correlative คุณสมบัติ physicochemical โดย EDS จะอนุญาตให้สำหรับการวิเคราะห์พื้นผิว microbe โต้ตอบคำสำคัญปลาทอง Nanogold บัตร – ปลา การสแกนอิเล็กตรอน microscopy Epifluorescence microscopy ในซิ hybridisation

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

บทคัดย่อนวนิยายเรืองแสงในแหล่งกำเนิด hybridisation (ปลา) วิธีการที่จะนำเสนอที่ช่วยให้การรวมกันของ epifluorescence และกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน (SEM) เพื่อระบุเซลล์จุลินทรีย์เดียว
ครั้งแรกที่ rRNA ของเซลล์ทั้ง hybridised กับพืชชนิดหนึ่งฟิวส์ oligonucleotide peroxidase ติดฉลากและนี้จะตามมาด้วยการปลดออกจากนักข่าวตัวเร่งปฏิกิริยา (การ์ด) ของ biotinylated tyramides นี้อำนวยความสะดวกการขยายของเว็บไซต์ที่มีผลผูกพันสำหรับ conjugates สเตโควาเลนต์ที่มีข้อความที่มีทั้ง fluorophores และอนุภาค nanogold การสะสมของ Alexa Fluor 488 conjugates ฟลูออโร-nanogold-streptavidin ได้รับการยืนยันผ่านทางกล้องจุลทรรศน์ epifluorescence และเซลล์อาจจะวัดในลักษณะที่คล้ายกันกับวิธีการ CARD-ปลามาตรฐาน เพื่อตรวจหาเซลล์โดย SEM, เพิ่มประสิทธิภาพ autometallographic ของอนุภาค nanogold เป็นสิ่งจำเป็นและได้รับอนุญาตในการแปลแหล่งกำเนิดของสิ่งมีชีวิตเป้าหมายที่ความละเอียดเกินกล้องจุลทรรศน์ พลังงานกระจายสเปกโทรสโกเอ็กซ์เรย์ (EDS) ถูกนำมาใช้ในการตรวจสอบผลกระทบของบัตรและ autometallography ในการสะสมทองในเซลล์เป้าหมาย. the โปรโตคอลทองปลาได้รับการพัฒนาและเพิ่มประสิทธิภาพการใช้เชื้อบริสุทธิ์และตัวอย่างสิ่งแวดล้อมเช่นรากข้าวและตะกอนทะเล การรวมกันของ epifluorescence และกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนให้เป็นเครื่องมือที่มีแนวโน้มในการตรวจสอบเชื้อจุลินทรีย์ในระดับความละเอียดสูง ลักษณะคู่กันของคุณสมบัติทางเคมีกายภาพโดย EDS จะช่วยให้การวิเคราะห์ของการมีปฏิสัมพันธ์จุลินทรีย์-พื้นผิว. คำทองปลา; Nanogold; CARD-ปลา; กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนสแกน; กล้องจุลทรรศน์ Epifluorescence; ใน hybridisation แหล่งกำเนิด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

นามธรรม
เรืองนวนิยายใน situ ไฮบริไดเซชัน ( ปลา ) เป็นวิธีการนำเสนอที่ช่วยให้ส่วนผสมของ epifluorescence และกล้องจุลทรรศน์อิเลคตรอนแบบส่องกราด ( SEM ) เพื่อศึกษาจุลินทรีย์เซลล์เดียว . แรก ของทั้งหมดเป็น hybridised เซลล์แบคทีเรียมีเอนไซม์มะรุม และความรุนแรง ซึ่งวิธีการนี้ตามด้วยการ catalysed นักข่าว ( บัตร ) ของไล tyramides .สายเป็นแบบผูก เว็บไซต์ streptavidin สารประกอบ covalently labelled กับทั้ง fluorophores และอนุภาค nanogold . การสะสมของ Alexa Fluor 488 ฟลูออโร nanogold – streptavidin สารประกอบที่ได้รับการยืนยันผ่านทางกล้องจุลทรรศน์ epifluorescence และเซลล์สามารถ quantified ในลักษณะคล้ายคลึงกับแนวทาง–บัตรปลามาตรฐาน เพื่อตรวจหาเซลล์โดย SEM ,การ autometallographic ของ nanogold อนุภาคที่สำคัญและได้รับอนุญาตใน situ ท้องถิ่นของเป้าหมายสิ่งมีชีวิตที่ความละเอียดเกินกล้องจุลทรรศน์แสง พลังงานรังสีกระจายตัวสเปกโทรสโกปี ( EDS ) ถูกใช้เพื่อตรวจสอบผลของการ์ดและ autometallography ในการเคลือบทองในเซลล์เป้าหมาย

ปลาสีทองและโปรโตคอลที่ได้รับการพัฒนาสูงสุด โดยใช้เชื้อบริสุทธิ์และตัวอย่างทางสิ่งแวดล้อม เช่น รากข้าว และตะกอนในทะเล การรวมกันของ epifluorescence และกล้องจุลทรรศน์อิเลคตรอนแบบส่องกราด มีเครื่องมือในการตรวจสอบเชื้อจุลินทรีย์ที่มีในระดับความละเอียดสูงศึกษาความสัมพันธ์ของสมบัติทางเคมีและกายภาพ โดยการศึกษาจะช่วยให้วิเคราะห์ปฏิสัมพันธ์ระหว่างพื้นผิวจุลินทรีย์

คำสำคัญ
ทอง ปลา nanogold ; บัตร–ปลา กล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนแบบส่องกราด ; กล้องจุลทรรศน์ epifluorescence ; อินซิตูไฮบริไดเซชัน