Dual fluorescent staining of bacter

Dual fluorescent staining of bacterial cells
The harvested bacterial cells were treated as follows: (1) 100 μL
of the harvested bacteria were centrifuged and resuspended in
100 μL of 4% PFA and incubated at 37 °C for 10 min. (2) After
centrifugation at 5000 g for 5 min, the precipitate was resuspended in 100 μL of 50 μg/mL lysozyme and incubated at 37 °C
for 20 min. (3) After centrifugation at 5000 g for 5 min, 100 μL 1%
FBS was added to the precipitate to block the bacterial cells at
room temperature for 30 min. (4) The bacterial sample was centrifuged at 5000 g for 5 min, and then 100 μL of 5 μg/mL anti-β
lactamase mAb was added. The suspension was incubated for 1 h
at 37 °C. (5) After washing twice with PBS, 100 μL of 5 μg/mL
AF488-DAM IgG was added and incubated at 37 °C for 1 h. (6) The
sample was centrifuged, resuspended in 100 μL PBS containing
1 μM SYTO 62, and then analyzed on the HSFCM

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ย้อมสีเรืองแสงคู่ของเซลล์แบคทีเรียเซลล์แบคทีเรียหวงได้รับการรักษาเป็นดังนี้: (1) 100 μLของที่หวงถูกเหวี่ยง และ resuspended ในΜL 100% 4 PFA และได้รับการกกที่ 37 ° C 10 นาที (2) หลังจากหมุนเหวี่ยงที่ 5000 g 5 นาที ตะกอนที่ resuspended ใน μL 100 ของ lysozyme การถูกไมโครกรัม/มล. 50 และได้รับการกกที่ 37 ° C20 นาที (3) หลังจากการหมุนเหวี่ยงที่ 5000 g 5 นาที 100 μL 1%FBS เพิ่มตะกอนบล็อกเซลล์แบคทีเรียที่ห้องอุณหภูมิ 30 นาที (4) ตัวอย่างแบคทีเรียถูกเหวี่ยงที่ 5000 g 5 นาที และ μL 100 แล้วของ 5 ไมโครกรัม/มล.ต้าน-βเพิ่มมาบ lactamase ระบบกันสะเทือนได้รับการกกสำหรับ 1 hที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส (5) หลังจากล้างด้วย PBS, μL 100 ของ 5 ไมโครกรัม/มล.ครั้งAF488-เขื่อน IgG เพิ่ม และได้รับการกกที่ 37 ° C สำหรับ 1 (6) การตัวอย่างถูกเหวี่ยง resuspended ใน 100 μL PBS ที่ประกอบด้วย1 Μm SYTO 62 และวิเคราะห์แล้ว บน HSFCM การ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

คู่ย้อมสีเรืองแสงของเซลล์แบคทีเรีย
ที่เก็บเกี่ยวเซลล์แบคทีเรียได้รับการปฏิบัติดังต่อไปนี้ (1) 100 ไมโครลิตร
ของเชื้อแบคทีเรียที่เก็บเกี่ยวได้ปั่นและ resuspended ใน
100 ไมโครลิตร 4% PFA และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 10 นาที (2) หลังจาก
การหมุนเหวี่ยงที่ 5000 กรัมเป็นเวลา 5 นาที, ตะกอนที่ถูก resuspended ใน 100 ไมโครลิตร 50 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรไลโซไซม์และบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส
เป็นเวลา 20 นาที (3) หลังจากการหมุนเหวี่ยงที่ 5000 กรัมเป็นเวลา 5 นาที 100 ไมโครลิตร 1%
FBS ถูกบันทึกอยู่ในตะกอนเพื่อป้องกันเซลล์แบคทีเรียที่
อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที (4) กลุ่มตัวอย่างแบคทีเรียถูกหมุนเหวี่ยงที่ 5000 กรัมเป็นเวลา 5 นาทีแล้ว 100 ไมโครลิตร 5 ไมโครกรัม / มิลลิลิตรต่อต้านβ
lactamase mAb ถูกเพิ่มเข้ามา การระงับการถูกบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมง
ที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส (5) หลังจากล้างครั้งที่สองกับพีบีเอส 100 ไมโครลิตร 5 ไมโครกรัม / มิลลิลิตร
AF488 เขื่อน IgG ถูกบันทึกและบ่มที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 ชั่วโมง (6)
ตัวอย่างหมุนเหวี่ยง, resuspended ใน 100 ไมโครลิตรพีบีเอสมี
1 ไมครอน SYTO 62 และจากนั้นวิเคราะห์ใน HSFCM

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2 . เซลล์แบคทีเรียเรืองแสงโดยใช้เซลล์แบคทีเรียที่ถูกปฏิบัติดังนี้ ( 1 ) 100 μ lของการเก็บเกี่ยวและในระดับ resuspended แบคทีเรียคือμ 100 ลิตร 4 % ๙บ่มที่ 37 ° C 10 นาที ( 2 ) หลังปั่นที่ 5000 G สำหรับ 5 นาทีที่ได้ resuspended 100 μ L 50 μ g / ml และไลโซไซม์บ่มที่ 37 ° C20 นาที ( 3 ) หลังการปั่นเหวี่ยงที่ 5000 กรัมเป็นเวลา 5 นาที 100 μ L 1 เปอร์เซ็นต์FBS ได้เพิ่มที่เพื่อป้องกันเซลล์ของแบคทีเรียที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที ( 4 ) ตัวอย่างแบคทีเรียเป็นระดับที่ 5 , 000 กรัม เป็นเวลา 5 นาที แล้วμ 100 ลิตร 5 μ g / ml anti - บีตาการศึกษา ซึ่งได้เพิ่ม ถูกระงับบ่มเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่ 37 ° C ( 5 ) หลังจากล้างสองครั้งกับ PBS , 100 μชั้น 5 μกรัม / มิลลิลิตรaf488-dam IgG ถูกเพิ่มและบ่มที่ 37 ° C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ( 6 )ตัวอย่าง resuspended ในระดับ 100 , μ L PBS ที่มี1 μ M syto 62 และวิเคราะห์ข้อมูลบน hsfcm