2.2. Biotransformation of compound

2.2. Biotransformation of compound 1 with fungal cell cultures
Stock cultures of the fungus were stored on Sabouraud dextrose
agar at 4 ◦C prior to use. The media for F. lini (NRRL 68751), and
M. phaseolina (KUCC 730, Karachi University Culture Collection,
Department of Botany) were prepared by adding the following
chemicals into distilled H2O (3.0 L): glucose (30.0 g), glycerol
(30.0 mL), peptone (15.0 g), yeast extract (15.0 g), KH2PO4 (15.0 g),
and NaCl (15.0 g). The fermentation medium thus obtained was
adjusted to pH 7.0 and distributed among 30 flasks of 250 mL capacity
(100 mL in each), and autoclaved.
Compound 1 was dissolved in 15 mL acetone. The resulting clear
solution was evenly distributed among 30 flasks (20 mg/0.5 mL in
each flask), containing 24-h-old stage II cultures, and fermentation
was carried out for further 12-days on a rotatory shaker (100 rpm)
at room temperature. During the fermentation, aliquots from one
culture flask were taken daily, and analyzed by TLC in order to
determine the degree of transformation of the substrate. In all
experiments, one control flask without biomass (for checking substrate
stability), and one flask without exogenous substrate (for the
identification of endogenous metabolites) were used. The culture
media and mycelium were separated by filtration. The mycelium
was washed with CH2Cl2 (1 L) and thefiltrate extracted with CH2Cl2
(3 × 2 L). The combined organic extract was dried over anhydrous
Na2SO4, evaporated under reduced pressures, and analyzed by
thin layer chromatography. Control flasks were also harvested, and
compared with the test by TLC, to confirm the bio-transformation.
In case of F. lini, fermentation experiment was allowed to process
for 6 days after the final feed. The mycelial cells were filtered
from the extraction of broth with CH2Cl2 obtaining a brown gum
(1.26 g), which was purified by using column chromatography. Elution
with 19% ethyl acetate in petroleum ether afforded compound
2 (7.3 mg), and further elution yielded compounds 3 (17 mg, 33%
ethyl acetate in petroleum ether), and 4 (28 mg, 39% ethyl acetate
in petroleum ether).
For M. phaseolina, the similar procedure was used as described
above. From 600 mg of compound 1, CH2Cl2 extract (1.96 g) was
obtained after 6 days, and subjected to column chromatography on
silica gel with gradient fraction of petroleum ether–ethyl acetate
to obtain compounds 2 (19 mg, petroleum ether–EtOAc, 79:21), 5
(15 mg, petroleum ether–EtOAc, 59:41), and 6 (21 mg, petroleum
ether–EtOAc, 56:44).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2. biotransformation 1 ที่ผสมกับวัฒนธรรมเซลล์เชื้อราวัฒนธรรมหุ้นของเห็ดราถูกเก็บไว้ใน Sabouraud ขึ้นagar ที่ 4 ◦C ก่อนใช้ สื่อสำหรับ lini F. (NRRL 68751), และPhaseolina M. (730 คะแนน KUCC การาจีมหาวิทยาลัยวัฒนธรรมชุดภาควิชาพฤกษศาสตร์) เตรียมได้ โดยการเพิ่มต่อไปนี้สารเคมีเป็น H2O กลั่น (3.0 L): น้ำตาลกลูโคส (30.0 กรัม) กลีเซอร(30.0 มิลลิลิตร), peptone (15.0 กรัม) สารสกัดจากยีสต์ (15.0 กรัม), KH2PO4 (15.0 กรัม),และ NaCl (15.0 กรัม) กลางหมักจึง ได้ถูกปรับค่า pH 7.0 และถูกกระจายนำ 30 ของกำลังการผลิต 250 mL(100 มล.แต่ละ), และ autoclaved1 สารประกอบที่ละลายในอะซิโตน 15 mL ล้างได้โซลูชันมีการกระจายเท่า ๆ กันระหว่างน้ำ 30 (20 มิลลิกรัม/0.5 mL ในแต่ละหนาว), ประกอบด้วยวัฒนธรรมขั้นอายุ 24 h II และหมักได้ดำเนินการเพิ่มเติม 12-วันในเชคเกอร์ rotatory (100 รอบต่อนาที)ที่อุณหภูมิห้อง ระหว่างการหมัก aliquots จากหนึ่งวัฒนธรรมหนาวได้ถ่ายทุกวัน และวิเคราะห์ โดย TLC เพื่อกำหนดระดับของการเปลี่ยนแปลงของพื้นผิว ในทั้งหมดทดลอง ตัวควบคุมหนึ่งหนาว โดยชีวมวล (สำหรับตรวจสอบพื้นผิวเสถียรภาพ), และหนึ่งหนาว โดยพื้นผิวบ่อย (สำหรับการรหัสของ endogenous metabolites) ใช้ วัฒนธรรมสื่อและ mycelium ถูกคั่น ด้วยเครื่องกรอง Myceliumถูกล้าง ด้วย CH2Cl2 (1 L) และสกัด ด้วย CH2Cl2 thefiltrate(3 × 2 ลิตร) สารสกัดอินทรีย์รวมได้แห้งผ่านไดNa2SO4 หายไปภายใต้ความดันที่ลดลง และวิเคราะห์โดยบางชั้น chromatography ยังได้เก็บเกี่ยวน้ำควบคุม และเมื่อเทียบกับการทดสอบโดย TLC เพื่อยืนยันการเปลี่ยนแปลงทางชีวภาพในกรณีที่ lini F. ทดลองหมักได้รับอนุญาตให้ดำเนินการใน 6 วันหลังจากดึงข้อมูลขั้นสุดท้าย เซลล์ mycelial ถูกกรองจากการสกัดซุปกับ CH2Cl2 รับหมากฝรั่งสีน้ำตาล(1.26 กรัม), ซึ่งไม่บริสุทธิ์โดย chromatography คอลัมน์ Elutionมี 19% เอทิล acetate ในปิโตรเลียมอีเทอร์ที่นี่2 (7.3 มิลลิกรัม), และสารประกอบ elution ผลเพิ่มเติม 3 (17 มิลลิกรัม 33%เอทิล acetate ในปิโตรเลียมอีเทอร์), 4 (มิลลิกรัม 28, 39% เอทิล acetateในปิโตรเลียมอีเทอร์)ม. phaseolina กระบวนการคล้ายถูกใช้ตามที่อธิบายไว้ข้างต้น จาก 1 ผสม 600 มก. สารสกัดจาก CH2Cl2 (1.96 กรัม) ถูกได้รับหลังจากวันที่ 6 และภายใต้คอลัมน์ chromatography บนซิลิก้าเจล ด้วยปิโตรเลียมอีเทอร์เอทิล – acetate เศษไล่ระดับการได้รับสาร 2 (19 มิลลิกรัม ปิโตรเลียมอีเทอร์ – EtOAc, 79:21), 5(15 มิลลิกรัม ปิโตรเลียมอีเทอร์ – EtOAc, 59:41), และ 6 (21 มิลลิกรัม ปิโตรเลียมอีเทอร์ – EtOAc, 56:44)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 เปลี่ยนรูปทางชีวภาพของสาร 1 เซลล์เพาะเลี้ยงเชื้อรา
วัฒนธรรมหุ้นของเชื้อราที่ถูกจัดเก็บไว้ในเดกซ์โทรส Sabouraud
วุ้นที่ 4 ◦Cก่อนที่จะใช้ สื่อเอฟ Lini (NRRL 68751) และ
เอ็ม phaseolina (KUCC 730 คอลเลกชันการาจีวัฒนธรรมมหาวิทยาลัย
ภาควิชาพฤกษศาสตร์) ได้จัดทำต่อไปโดยการเพิ่ม
สารเคมีเข้าไปใน H2O กลั่น (3.0 L): กลูโคส (30.0 กรัม), กลีเซอรอล
(30.0 มิลลิลิตร), เปปโตน (15.0 กรัม), สารสกัดจากยีสต์ ( 15.0 กรัม) KH2PO4 (15.0 กรัม)
และโซเดียมคลอไรด์ (15.0 กรัม) ขนาดกลางที่ได้รับการหมักจึงได้รับการ
ปรับค่าพีเอช 7.0 และกระจายใน 30 ของกำลังการผลิตขวด 250 มิลลิลิตร
(100 มิลลิลิตรในแต่ละ) และเบา.
Compound 1 ถูกละลายในอะซีโตนมล 15 ที่ชัดเจนส่งผลให้
การแก้ปัญหาได้รับการกระจายในหมู่ 30 ขวด (20 mg / 0.5 มิลลิลิตรใน
แต่ละขวด) ที่มีขั้นตอนตลอด 24 ชั่วโมงเก่าครั้งที่สองวัฒนธรรมและการหมัก
ได้ดำเนินการในวันที่ 12 เพิ่มเติมเกี่ยวกับการปั่นการสับเปลี่ยน (100 รอบต่อนาที)
ที่ อุณหภูมิห้อง ในระหว่างการหมัก aliquots จาก
ขวดวัฒนธรรมถูกนำทุกวันและวิเคราะห์โดย TLC เพื่อ
กำหนดระดับของการเปลี่ยนแปลงของพื้นผิว ในทุก
การทดลองหนึ่งขวดโดยไม่ต้องควบคุมชีวมวล (สำหรับการตรวจสอบพื้นผิวที่
มีความมั่นคง) และขวดหนึ่งไม่มีพื้นผิวภายนอก (สำหรับ
บัตรประจำตัวของสารภายนอก) ถูกนำมาใช้ วัฒนธรรม
สื่อและเส้นใยถูกแยกออกโดยการกรอง เส้นใย
ถูกล้างด้วย CH2Cl2 (1 ลิตร) และ thefiltrate สกัดด้วย CH2Cl2
(3 × 2 L) สารสกัดอินทรีย์รวมแห้งไม่มีน้ำมากกว่า
Na2SO4 ระเหยภายใต้แรงกดดันที่ลดลงและการวิเคราะห์โดย
โคชั้นบาง ๆ ควบคุมขวดนอกจากนี้ยังได้รับการเก็บเกี่ยวและ
เมื่อเทียบกับการทดสอบโดย TLC เพื่อยืนยัน. ชีวภาพการเปลี่ยนแปลง
ในกรณีของเอฟ Lini ทดลองหมักได้รับอนุญาตให้ดำเนินการ
เป็นเวลา 6 วันหลังจากที่ฟีดสุดท้าย เซลล์เส้นใยถูกกรอง
จากการสกัดของน้ำซุปที่มี CH2Cl2 ได้รับเหงือกสีน้ำตาล
(1.26 กรัม) ซึ่งได้รับการทำให้บริสุทธิ์โดยใช้คอลัมน์ elution
กับเอทิลอะซิเต 19% ในปิโตรเลียมอีเทอร์อึดสารประกอบ
2 (7.3 มก.) และให้ผลต่อไปชะสารประกอบ 3 (17 มก. 33%
เอทิลอะซิเตในปิโตรเลียมอีเทอร์) และ 4 (28 มก. 39% เอทิลอะซิเต
ในปิโตรเลียมอีเทอร์) .
สำหรับ M. phaseolina ขั้นตอนที่คล้ายกันถูกนำมาใช้ตามที่อธิบายไว้
ข้างต้น จาก 600 มิลลิกรัมของสาร 1, สารสกัด CH2Cl2 (1.96 กรัม) ได้รับการ
ได้รับหลังจาก 6 วัน, และเป็นไปในคอลัมน์
ซิลิกาเจลที่มีส่วนของการไล่ระดับสีอะซิเตทเอทิลอีเทอร์ปิโตรเลียม
ที่จะได้รับสาร 2 (19 มก. ปิโตรเลียมอีเทอร์ EtOAc 79 : 21), 5
(15 มก. ปิโตรเลียมอีเทอร์ EtOAc, 59:41) และ 6 (21 มก. ปิโตรเลียม
อีเทอร์ EtOAc, 56:44)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . การเปลี่ยนแปลงทางชีวภาพของสารประกอบ 1 กับเซลล์วัฒนธรรม
เชื้อราวัฒนธรรมหุ้นของเชื้อราที่ถูกเก็บไว้ใน sabouraud เดกซ์โทรส
วุ้นที่ 4 ◦ C ก่อนที่จะใช้ สื่อสำหรับ F . ลินี ( NRRL 68751 ) และ
วท. ชีวภาพ ( kucc 730 , การาจีมหาวิทยาลัยวัฒนธรรมคอลเลกชัน
ภาควิชาพฤกษศาสตร์ ) เตรียมได้โดยการเพิ่มสารเคมีเข้าไปกลั่น H2O ต่อไปนี้
( 3.0 ลิตร ) กลูโคส ( 30.0 กรัม ) , กลีเซอรอล
( 30.0 มิลลิลิตรเปปโตน ( 15.0 กรัมยีสต์สกัด ( 15.0 กรัม ) , kh2po4 ( 15.0 g )
และ NaCl ( 15.0 กรัม ) การหมักกลางจึงได้รับ
ปรับ pH 7.0 และแจกจ่ายระหว่าง 30 ขวด 250 มล. ความจุ
( 100 มล. ในแต่ละ ) , และสังเคราะห์สารประกอบ 1 .
ละลายในอะซิโตน 15 ml . ผลชัดเจน
สารละลายที่กระจายตัวใน 30 ขวด ( 20 มิลลิกรัมต่อ 0.5 มล. ในแต่ละขวด
)ระยะที่ 2 24-h-old ที่มีวัฒนธรรม และหมัก
ได้ดําเนินการต่อไป 12 วันในเครื่องปั่นซึ่งทำให้หมุนรอบ (
100 รอบต่อนาทีที่อุณหภูมิห้อง ในระหว่างการหมักเฉยๆจาก
วัฒนธรรมขวดถ่ายทุกวัน และวิเคราะห์โดย TLC เพื่อระบุระดับของ

การเปลี่ยนแปลงของพื้นผิว ในการทดลองหนึ่งขวด
, การควบคุมโดยชีวมวล ( สำหรับการตรวจสอบพื้นผิว
เสถียรภาพ )และอีกหนึ่งขวด โดยพื้นผิวภายนอก (
การจำแนกสารภายใน ) สถิติที่ใช้ วัฒนธรรม
สื่อและเส้นใยแยกได้จากการกรอง เจริญ
ถูกล้างด้วย ch2cl2 ( 1 ลิตร ) และ thefiltrate สกัดด้วย ch2cl2
( 3 × 2 L ) สารสกัดอินทรีย์รวมแห้งรัส
na2so4 , ระเหยภายใต้การลดความดัน และวิเคราะห์โดย
ข้อเหวี่ยง .ขวดควบคุมยังเก็บเกี่ยวและ
เมื่อเทียบกับการทดสอบด้วยซี เพื่อยืนยันการเปลี่ยนแปลงทางชีวภาพ .
ในกรณีของ F . ลินี ทดลอง และได้รับอนุญาตให้กระบวนการ
6 วัน หลังจากอาหารขั้นสุดท้าย เซลล์เส้นใยถูกกรอง
จากการสกัดน้ำซุปกับ ch2cl2 ขอรับ
ฝรั่งสีน้ำตาล ( 1.26 กรัม ) ซึ่งถูกแยกด้วยคอลัมน์โครมาโตกราฟฟี . (
กับ 19% ในปิโตรเลียมอีเทอร์เอทิลอะซิเตท เจ้าตัวสาร
2 ( 7.3 มิลลิกรัม ) และ ( เพิ่มเติม ) สารประกอบ 3 ( 17 มิลลิกรัม , 33 %
ethyl acetate ในปิโตรเลียมอีเทอร์ ) และ 4 ( 28 มก. , 39% ในปิโตรเลียมอีเทอร์เอทิลอะซิเตต
)
M . ชีวภาพ , ขั้นตอนที่คล้ายกันคือใช้เป็น อธิบาย
ข้างบน จาก 600 mg สารสกัด ( 1 ch2cl2 1.96 g )
หลังจากได้รับ 6 วันและภายใต้คอลัมน์โครมาโทกราฟีบนซิลิกาเจลด้วยลาด
สัดส่วนปิโตรเลียมอีเทอร์เอทิลอะซิเตท และเพื่อให้ได้สารประกอบ
2 ( 19 มิลลิกรัม ปิโตรเลียมอีเทอร์ etoac 79:21 ( , ) , 5
( 15 มิลลิกรัม ปิโตรเลียมอีเทอร์ etoac 59:41 ( , ) และ 6 ( 21 มิลลิกรัม ปิโตรเลียมอีเทอร์ etoac 56:44
( , )