Sample preparation for Scanning ele

Sample preparation for Scanning electron microscopy (SEM)Specimen Killing, Fixation, and Dehydration

Living specimens being prepared for scanning electron microscopy first need to be killed and fixed. This is usually done using a chemical fixative, such as glutaraldehyde and osmium. When applied in combination, typically glutaraldehyde fixation is used first. Concentrations of glutaraldehyde typically vary between 2% and 5% and are usually mixed with a buffer that operates at physiological pH. Two common choices, are phosphate buffers and cacodylate buffers, which are typically used at a concentration of approximately 0.05M and a pH of between 6.8 and 7.4. The goal of buffering the fixative is to provide an isotonic solution and to protect the biological tissue from becoming acidic, which frequently occurs during glutaraldehyde cross-linking. Killing may occur within the first several minutes of incubation in glutaraldehyde, but cross-linking of proteins through covalent bonds typically requires several hours to reach saturation in; therefore overnight fixation is not unusual. The specimen is then typically rinsed several times in their respective buffer, and transferred to buffered osmium tetroxide. Typically the same buffer and pH is used. Osmium fixation is usually conducted on ice or in the refrigerator for a shorter period of time, typically two hours. Use of warm osmium over a period of several hours can actually be used to extract some materials and expose internal surfaces by removing membranes. Following osmium fixation, water is chemically extracted from the specimen using a graded series of ethanol. Typically, the concentrations of ethanol used begin at 30% and proceed at 20% steps up to 70% followed by 10% changes to 100% ethanol. The final changes of ethanol must be conducted using anhydrous ethanol. Typically three changes of anhydrous ethanol are used.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตัวอย่างการเตรียมการสำหรับกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน (SEM) การสแกนชิ้นงานฆ่า ตรึง และการคายน้ำตัวอย่างชีวิตเตรียมสำหรับการสแกนชาวดัตช์แรกต้องฆ่า และแก้ไข นี้มักจะทำโดยใช้เครื่องเคมีทำให้คง เช่น glutaraldehyde และออสเมียม เมื่อใช้รวมกัน มักจะตรึง glutaraldehyde ใช้ครั้งแรก ความเข้มข้นของ glutaraldehyde มักจะแตกต่างกันระหว่าง 2% ถึง 5% และมักจะผสมกับบัฟเฟอร์ที่ทำงานที่ pH ทางสรีรวิทยา สองตัวเลือกทั่วไป ด้วยฟอสเฟตบัฟเฟอร์บัฟเฟอร์ cacodylate ซึ่งโดยปกติจะใช้ที่ความเข้มข้นประมาณ 0.05M และค่า pH ระหว่าง 6.8-7.4 เป้าหมายของการกำหนดบัฟเฟอร์การตรึงคือ การให้โซลูชั่น isotonic และป้องกันเนื้อเยื่อทางชีวภาพจากการเป็นกรด ซึ่งมักเกิดขึ้นในระหว่างการเชื่อมโยง glutaraldehyde ฆ่าอาจเกิดขึ้นภายในหลายนาทีแรกใน glutaraldehyde แต่เชื่อมโยงโปรตีนผ่านเลนต์มักต้องใช้หลายชั่วโมงถึงอิ่มตัว ดังนั้นจึง ตรึงคืนไม่ผิดปกติ ตัวอย่างแล้วปกติล้างหลายครั้งในบัฟเฟอร์แต่ละของพวกเขา แล้วโอนไปเทโตรไซด์ออสเมียมถูกบัฟเฟอร์ โดยปกติบัฟเฟอร์และ pH เดียวกันจะใช้ ออสเมียมตรึงเป็นจัด บนน้ำแข็ง หรือ ในตู้เย็นเป็นระยะเวลาสั้นของเวลา โดยปกติสองชั่วโมง ใช้ของออสเมียมอบอุ่นตลอดระยะเวลาหลายชั่วโมงจริงใช้เพื่อแยกวัสดุบางอย่าง และทำให้พื้นผิวภายใน โดยการเอาเยื่อหุ้ม ต่อตรึงออสเมียม น้ำสารเคมีสกัดจากตัวอย่างที่ใช้ชุดเกรดเดียวของเอทานอล โดยปกติ ความเข้มข้นของเอทานอลที่ใช้เริ่มต้นที่ 30% และดำเนินการในขั้นตอน 20% ถึง 70% ตาม ด้วยการเปลี่ยนแปลง 10% กับเอทานอล 100% ต้องดำเนินการเปลี่ยนแปลงขั้นสุดท้ายของเอทานอลการใช้เอทานอลได โดยทั่วไปจะใช้การเปลี่ยนแปลงสามของไดเอทานอล

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การเตรียมตัวสำหรับกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอน (SEM) ตัวอย่างฆาตรกรรม, การตรึงและการคายน้ำตัวอย่างที่อาศัยอยู่ถูกเตรียมไว้สำหรับกล้องจุลทรรศน์อิเล็กตรอนสแกนครั้งแรกจะต้องมีการเสียชีวิตและได้รับการแก้ไข นี้มักจะทำโดยใช้ตรึงเคมีเช่น glutaraldehyde และออสเมียม เมื่อนำมาใช้ในการรวมกันโดยทั่วไป glutaraldehyde ตรึงถูกนำมาใช้เป็นครั้งแรก ความเข้มข้นของ glutaraldehyde มักจะแตกต่างกันระหว่าง 2% และ 5% และมักจะผสมกับกันชนที่ดำเนินการที่ pH สรีรวิทยา สองตัวเลือกที่พบบ่อยเป็นบัฟเฟอร์ฟอสเฟตและบัฟเฟอร์ cacodylate ซึ่งมักจะใช้ที่ความเข้มข้นประมาณ 0.05M และค่า pH ระหว่าง 6.8 และ 7.4 ที่ เป้าหมายของบัฟเฟอร์ตรึงคือการให้การแก้ปัญหา isotonic และเพื่อปกป้องเนื้อเยื่อชีวภาพจากการเป็นกรดซึ่งมักเกิดขึ้นในช่วง glutaraldehyde ข้ามการเชื่อมโยง ฆ่าอาจเกิดขึ้นในหลายนาทีแรกของการบ่มใน glutaraldehyde แต่การเชื่อมโยงข้ามของโปรตีนผ่านพันธะโควาเลนมักจะต้องใช้เวลาหลายชั่วโมงกว่าจะถึงจุดอิ่มตัวใน; ดังนั้นการตรึงในชั่วข้ามคืนไม่ได้ผิดปกติ ตัวอย่างที่เป็นปกติแล้วล้างหลายครั้งในบัฟเฟอร์ของตนและโอนไปยังบัฟเฟอร์ออสเมียม tetroxide โดยปกติบัฟเฟอร์ที่เหมือนกันและจะใช้ค่าพีเอช ออสเมียมตรึงมักจะดำเนินการบนน้ำแข็งหรือในตู้เย็นเป็นระยะเวลาสั้นของเวลาโดยทั่วไปสองชั่วโมง การใช้งานของออสเมียมอบอุ่นในช่วงเวลาหลายชั่วโมงสามารถจริงจะใช้ในการสกัดวัสดุบางอย่างและแสดงพื้นผิวภายในโดยการเอาเยื่อ ต่อไปนี้ออสเมียมตรึงน้ำสกัดสารเคมีจากชิ้นงานโดยใช้แบบคัดเกรดเอทานอล โดยปกติแล้วความเข้มข้นของเอทานอลที่ใช้เริ่มต้นที่ 30% และดำเนินการตามขั้นตอนที่ 20% ถึง 70% ตามมาด้วยการเปลี่ยนแปลง 10% ถึง 100% เอทานอล การเปลี่ยนแปลงที่สุดท้ายของเอทานอลจะต้องดำเนินการโดยใช้เอทานอลไม่มีน้ำ โดยปกติสามการเปลี่ยนแปลงของเอทานอลไม่มีน้ำจะใช้