Leishmaniasis is one of the world's

Leishmaniasis is one of the world's most neglected diseases, largely affecting the poorest of the poor, mainly in developing countries. Over 350 million people are considered at risk of contracting leishmaniasis, and approximately 2 million new cases occur yearly1. Leishmania donovani is the causative agent for visceral leishmaniasis (VL), the most fatal form of the disease. The choice of drugs available to treat leishmaniasis is limited 2;current treatments provide limited efficacy and many are toxic at therapeutic doses. In addition, most of the first line treatment drugs have already lost their utility due to increasing multiple drug resistance 3. The current pipeline of anti-leishmanial drugs is also severely depleted. Sustained efforts are needed to enrich a new anti-leishmanial drug discovery pipeline, and this endeavor relies on the availability of suitable in vitro screening models. In vitro promastigotes 4 and axenic amastigotes assays5 are primarily used for anti-leishmanial drug screening however, may not be appropriate due to significant cellular, physiological, biochemical and molecular differences in comparison to intracellular amastigotes. Assays with macrophage-amastigotes models are considered closest to the pathophysiological conditions of leishmaniasis, and are therefore the most appropriate for in vitro screening. Differentiated, non-dividing human acute monocytic leukemia cells (THP1) (make an attractive) alternative to isolated primary macrophages and can be used for assaying anti-leishmanial activity of different compounds against intracellular amastigotes. Here, we present a parasite-rescue and transformation assay with differentiated THP1 cells infected in vitro with Leishmania donovani for screening pure compounds and natural products extracts and determining the efficacy against the intracellular Leishmania amastigotes. The assay involves the following steps: (1) differentiation of THP1 cells to non-dividing macrophages, (2) infection of macrophages with L. donovani metacyclic promastigotes, (3) treatment of infected cells with test drugs, (4) controlled lysis of infected macrophages, (5) release/rescue of amastigotes and (6) transformation of live amastigotes to promastigotes. The assay was optimized using detergent treatment for controlled lysis of Leishmania-infected THP1 cells to achieve almost complete rescue of viable intracellular amastigotes with minimal effect on their ability to transform to promastigotes. Different macrophage:promastigotes ratios were tested to achieve maximum infection. Quantification of the infection was performed through transformation of live, rescued Leishmania amastigotes to promastigotes and evaluation of their growth by an alamarBlue fluorometric assay in 96-well microplates. This assay is comparable to the currently-used microscopic, transgenic reporter gene and digital-image analysis assays. This assay is robust and measures only the live intracellular amastigotes compared to reporter gene and image analysis assays, which may not differentiate between live and dead amastigotes. Also, the assay has been validated with a current panel of anti-leishmanial drugs and has been successfully applied to large-scale screening of pure compounds and a library of natural products fractions (Tekwani et al. unpublished).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Leishmaniasis เป็นหนึ่งในโรคที่ถูกละเลยมากที่สุดในโลก ส่วนใหญ่ส่งผลกระทบต่อคนจน ส่วนใหญ่ในประเทศกำลังพัฒนาที่ยากจน มากกว่า 350 ล้านคนจะถือว่าความเสี่ยงของการทำสัญญา leishmaniasis และเกิดขึ้นประมาณ 2 ล้านกรณีใหม่ yearly1 Leishmania donovani เป็นสิ่งแปลกปลอมสำหรับ leishmaniasis อวัยวะภายใน (VL), รูปแบบของโรคร้ายแรงที่สุด เลือกยาให้รักษา leishmaniasis ได้จำกัด 2 ปัจจุบันการรักษามีประสิทธิภาพจำกัดและหลายคนมีความเป็นพิษที่รักษาปริมาณ นอกจากนี้ ส่วนใหญ่ของยาเสพติดรักษาบรรทัดแรกได้แล้วสูญเสียประโยชน์เนื่องจากการเพิ่มความต้านทานยาเสพติดหลาย 3 ยังรุนแรงจะหมดขั้นตอนปัจจุบันของ leishmanial ต่อต้านยาเสพติด มีความจำเป็นความพยายามอย่างต่อเนื่องแก่ไปป์ไลน์ leishmanial ต่อต้านการค้นพบยาเสพติด และความพยายามนี้อาศัยความพร้อมของแบบคัดกรองในหลอดทดลองที่เหมาะสม Axenic amastigotes assays5 และ promastigotes ในหลอดทดลอง 4 หลักใช้สำหรับ leishmanial ต่อต้านยาเสพติดการตรวจคัดกรองอย่างไรก็ตาม อาจไม่เหมาะสมเนื่องจากโทรศัพท์มือถือ สรีรวิทยา ชีวเคมี และระดับโมเลกุลแตกต่างกันเมื่อเทียบกับ amastigotes ภายในเซลล์ Assays macrophage amastigotes รุ่นถือว่าใกล้เคียงกับโรค leishmaniasis pathophysiological และดังนั้นจึงเหมาะสมสุดสำหรับการตรวจในหลอดทดลอง แตกต่าง ไม่มีการแบ่งมนุษย์เฉียบพลัน monocytic มะเร็งเม็ดเลือดขาวเซลล์ (THP1) (ทำที่น่าสนใจ) ทางแยกหลักแมโครฟาจ และสามารถใช้สำหรับการตรวจวิเคราะห์ leishmanial ต่อต้านกิจกรรมของสารแตกต่างกันกับ amastigotes ภายในเซลล์ ที่นี่ เรานำเสนอทดสอบปรสิต-กู้ภัยและการเปลี่ยนแปลงแตกต่าง THP1 เซลล์ติดเชื้อในหลอดทดลองกับ Leishmania donovani สำหรับคัดกรองสารบริสุทธิ์และสารสกัดจากธรรมชาติผลิตภัณฑ์ และกำหนดประสิทธิภาพกับการ amastigotes Leishmania intracellular ทดสอบเกี่ยวข้องกับขั้นตอนต่อไปนี้: (1) ความแตกต่างของเซลล์ THP1 จะไม่หารแมโครฟาจ, (2) การติดเชื้อของแมโครฟาจกับ L. donovani metacyclic promastigotes, (3) รักษาเซลล์ที่ติดเชื้อด้วยการทดสอบยาเสพติด, (4) ควบคุม lysis ของแมโครฟาจติดเชื้อ, (5) ปล่อย/กู้ภัย amastigotes และ (6) การเปลี่ยนแปลงของสด amastigotes กับ promastigotes ทดสอบการแก้ไขเหมาะใช้รักษาผงซักฟอกสำหรับควบคุม lysis ของเซลล์ติดเชื้อ Leishmania THP1 ให้กู้ภัยเกือบสมบูรณ์ของ amastigotes ภายในเซลล์ทำงานได้มีผลกระทบน้อยที่สุดความสามารถในการแปลงเป็น promastigotes อัตราส่วนแตกต่าง macrophage: promastigotes รับการทดสอบเพื่อให้เกิดการติดเชื้อสูงสุด ดำเนินการนับจำนวนการติดเชื้อผ่านการเปลี่ยนแปลงของชีวิต ช่วยเหลือ Leishmania amastigotes promastigotes และการประเมินการเจริญเติบโตของพวกเขา โดยการทดสอบ fluorometric alamarBlue ใน microplates 96 หลุม ทดสอบนี้ก็เปรียบได้กับ assays ปัจจุบันใช้กล้องจุลทรรศน์ จำลองข่าวยีนและภาพดิจิตอลวิเคราะห์ ทดสอบนี้มีความทนทาน และมาตรการเฉพาะสด intracellular amastigotes เมื่อเทียบกับข่าวยีนและภาพวิเคราะห์ assays ซึ่งไม่อาจแยกความแตกต่างระหว่างชีวิต และตายแล้ว amastigotes นอกจากนี้ การทดสอบได้รับการตรวจสอบแผงปัจจุบันของ leishmanial ต่อต้านยาเสพติด และได้ถูกนำไปใช้คัดกรองขนาดใหญ่ของสารบริสุทธิ์และไลบรารีของผลิตภัณฑ์ธรรมชาติเศษ (Tekwani et al.ยกเลิกประกาศ)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

leishmaniasis เป็นหนึ่งในโรคที่ถูกละเลยมากที่สุดในโลกส่วนใหญ่มีผลต่อการที่ยากจนที่สุดของคนยากจนส่วนใหญ่อยู่ในประเทศกำลังพัฒนา กว่า 350 ล้านคนได้รับการพิจารณาความเสี่ยงของการทำสัญญา leishmaniasis และประมาณ 2 ล้านรายใหม่เกิดขึ้น yearly1 Leishmania donovani เป็นตัวแทนสาเหตุสำหรับอวัยวะภายใน leishmaniasis (VL) รูปแบบที่ร้ายแรงที่สุดของโรค ทางเลือกของยาเสพติดที่มีอยู่ในการรักษา leishmaniasis มี จำกัด 2; การรักษาในปัจจุบันให้การรับรู้ความสามารถที่ จำกัด และหลายคนมีความเป็นพิษในปริมาณที่การรักษา นอกจากนี้ส่วนใหญ่ของยาเสพติดการรักษาบรรทัดแรกได้หายไปแล้วยูทิลิตี้ของพวกเขาเนื่องจากการเพิ่มขึ้นของการดื้อยาหลาย 3. ท่อปัจจุบันของยาต้าน leishmanial ยังจะหมดอย่างรุนแรง ความพยายามอย่างต่อเนื่องที่มีความจำเป็นที่จะเสริมสร้างท่อป้องกัน leishmanial ค้นพบยาใ​​หม่และความพยายามนี้อาศัยอยู่กับความพร้อมของการที่เหมาะสมในหลอดทดลองรูปแบบการตรวจคัดกรอง ในหลอดทดลองที่ 4 และ promastigotes amastigotes axenic assays5 ที่ใช้เป็นหลักสำหรับการคัดกรองยาต้าน leishmanial แต่อาจจะไม่เหมาะสมเนื่องจากเซลล์สรีรวิทยาชีวเคมีและอณูความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเทียบกับ amastigotes ภายในเซลล์ ชุดตรวจที่มีรูปแบบ macrophage-amastigotes จะถือว่าใกล้เคียงกับสภาพ pathophysiological ของ leishmaniasis, และดังนั้นจึงเหมาะสมที่สุดสำหรับการตรวจคัดกรองในหลอดทดลอง ที่แตกต่างของมนุษย์เฉียบพลันเซลล์มะเร็งเม็ดเลือดขาวที่ไ​​ม่ใช่การหาร monocytic (THP1) (ให้น่าสนใจ) ทางเลือกที่จะ macrophages หลักโดดเดี่ยวและสามารถใช้สำหรับการ assaying กิจกรรมการต้าน leishmanial ของสารที่แตกต่างกันกับ amastigotes ภายในเซลล์ นี่เรานำเสนอปรสิตกู้ภัยและการเปลี่ยนแปลงการทดสอบกับเซลล์ THP1 ที่แตกต่างกันการติดเชื้อในหลอดทดลองกับ Leishmania donovani สำหรับการคัดกรองสารบริสุทธิ์และสารสกัดจากผลิตภัณฑ์ธรรมชาติและการกำหนดประสิทธิภาพกับ amastigotes Leishmania ภายในเซลล์ การทดสอบเกี่ยวข้องกับขั้นตอนต่อไปนี้ (1) ความแตกต่างของเซลล์ THP1 ไม่ใช่หารใหญ่ (2) การติดเชื้อของขนาดใหญ่ที่มีแอล donovani promastigotes metacyclic (3) การรักษาเซลล์ที่ติดเชื้อกับยาเสพติดการทดสอบ (4) การสลายการควบคุม ขนาดใหญ่ที่ติดเชื้อ (5) การเปิดตัว / กู้ภัยของ amastigotes และ (6) การเปลี่ยนแปลงของ amastigotes สดไป promastigotes การทดสอบได้รับการเพิ่มประสิทธิภาพการใช้ผงซักฟอกสำหรับการรักษาควบคุมสลายของเซลล์ THP1 Leishmania เชื้อเพื่อให้บรรลุกู้ภัยเกือบเสร็จสมบูรณ์ของ amastigotes เซลล์ทำงานได้มีผลกระทบน้อยที่สุดต่อความสามารถของพวกเขาจะเปลี่ยนไป promastigotes macrophage แตกต่างกัน: อัตราส่วน promastigotes ได้รับการทดสอบเพื่อให้บรรลุการติดเชื้อสูงสุด ปริมาณของการติดเชื้อได้รับการดำเนินการผ่านการเปลี่ยนแปลงของการถ่ายทอดสดการช่วยเหลือ amastigotes Leishmania เพื่อ promastigotes และการประเมินผลของการเจริญเติบโตของพวกเขาโดยการทดสอบฟลูออโร alamarBlue ใน 96 หลุม microplates การทดสอบนี้เทียบได้กับปัจจุบันที่ใช้กล้องจุลทรรศน์ยีนนักข่าวดัดแปรพันธุกรรมและดิจิตอลภาพการวิเคราะห์ตรวจ การทดสอบนี้เป็นไปอย่างแข็งแกร่งและมาตรการเฉพาะ amastigotes เซลล์สดเมื่อเทียบกับยีนนักข่าวและการวิเคราะห์ภาพการตรวจซึ่งอาจจะไม่แตกต่างระหว่าง amastigotes ที่อยู่อาศัยและตาย นอกจากนี้การทดสอบได้รับการตรวจสอบกับแผงปัจจุบันของยาต้าน leishmanial และได้ถูกนำมาใช้ประสบความสำเร็จในการตรวจคัดกรองขนาดใหญ่ของสารบริสุทธิ์และห้องสมุดของเศษส่วนผลิตภัณฑ์ธรรมชาติ (Tekwani et al. ที่ไม่ถูกเผยแพร่)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

โรคติดเชื้อลิชมาเนีย เป็นหนึ่งของโลกที่ถูกทอดทิ้งมากที่สุดโรคที่ส่วนใหญ่มีผลต่อยากจนของคนจนส่วนใหญ่ในประเทศกำลังพัฒนา กว่า 350 ล้านคน ถือว่ามีความเสี่ยงของโรคติดเชื้อลิชมาเนีย รับเหมา และผู้ป่วยรายใหม่ประมาณ 2 ล้านเกิดขึ้น yearly1 . ลิชมาเนีย donovani เป็นตัวแทนจากโรงเรียนสำหรับลีสนาเนียซิส ( VL ) , รูปแบบที่ร้ายแรงที่สุดของโรค ทางเลือกของยา พร้อมรักษาโรคติดเชื้อลิชมาเนียจำกัด 2 ; การรักษาในปัจจุบันมีความสามารถจำกัดและหลายมีพิษที่ปริมาณยา นอกจากนี้ส่วนใหญ่ของยาบรรทัดแรก รักษาหายแล้วมียูทิลิตี้ของพวกเขาเนื่องจากการเพิ่มหลายดื้อยา 3 . ท่อปัจจุบันของยาต้าน leishmanial ก็หนักหมด ยั่งยืนความพยายามจะต้องเพิ่ม leishmanial การค้นพบยาใหม่ต้านท่อ และความพยายามนี้ขึ้นอยู่กับความพร้อม เหมาะสม ในการคัดกรองแบบ ในหลอดทดลอง promastigotes 4 และ axenic amastigotes assays5 จะใช้เป็นหลักเพื่อป้องกัน leishmanial ยาคัดกรองแต่อาจไม่เหมาะสม เนื่องจากทางมือถือ , ทางสรีรวิทยา , ชีวเคมีและโมเลกุลที่แตกต่างกันในการเปรียบเทียบกับการ amastigotes . ใช้กับแมโครเฟจ amastigotes รุ่นถือว่าใกล้เคียงกับสภาพพยาธิสรีรวิทยาของลิชมาเนีย และดังนั้นจึงเหมาะสมที่สุดในการคัดกรองเด็ก แตกต่าง , ไม่แบ่งมนุษย์ monocytic มะเร็งเม็ดเลือดขาวเฉียบพลัน ( thp1 ) ( ให้มีเสน่ห์ ) แทนการแยกแมคโครฟาจและสามารถใช้เพื่อป้องกันกิจกรรม assaying leishmanial สารประกอบที่แตกต่างกันกับชนิด amastigotes . ที่นี่เราได้เสนอวิธีการต่างๆ และพยาธิ ช่วย thp1 เซลล์ที่ติดเชื้อในหลอดทดลองกับลิชมาเนีย donovani คัดกรองสารประกอบบริสุทธิ์และผลิตภัณฑ์สารสกัดจากธรรมชาติและหาประสิทธิภาพกับ amastigotes ลิชมาเนียภายในเซลล์ . แบคทีเรียที่เกี่ยวข้องกับขั้นตอนต่อไปนี้ : ( 1 ) การ thp1 ไม่แบ่งเซลล์แมคโครฟาจ ( 2 ) การติดเชื้อ macrophages กับ L . donovani metacyclic promastigotes ( 3 ) การรักษาเซลล์ที่ติดเชื้อด้วยยาทดสอบ ( 4 ) ควบคุมการสลายของ macrophages เชื้อ ( 5 ) ปล่อย / กู้ภัยของ amastigotes และ ( 6 ) การเปลี่ยนแปลงของ amastigotes อยู่ promastigotes . ( เพิ่มประสิทธิภาพการรักษา คือ ผงซักฟอกสำหรับควบคุมการสลายของลิชมาเนียติดเชื้อ thp1 เซลล์เพื่อให้บรรลุช่วยเหลือเกือบสมบูรณ์ได้ภายใน amastigotes ที่มีผลกระทบน้อยที่สุดในความสามารถของพวกเขาที่จะเปลี่ยน promastigotes . ต่าง ๆ มาโครฟาจ : promastigotes ทดสอบเพื่อให้บรรลุอัตราส่วนการติดเชื้อสูงสุด ปริมาณของเชื้อมีการเปลี่ยนแปลงอยู่ตลอดช่วยเหลือลิชมาเนีย amastigotes เพื่อ promastigotes และการประเมินผลการเจริญเติบโตของพวกเขาโดย alamarblue fluorometric assay ใน 96 ดี microplates . วิธีนี้ก็เปรียบได้กับ ปัจจุบันใช้กล้องจุลทรรศน์ตรวจยีนยีนนักข่าวและการวิเคราะห์ภาพดิจิตอล วิธีนี้ไม่มีเสถียรภาพ และมาตรการเฉพาะอยู่ภายในเซลล์ amastigotes เปรียบเทียบกับยีนนักข่าวและวิธีวิเคราะห์ภาพ ซึ่งอาจแยกความแตกต่างระหว่างชีวิตและความตาย amastigotes . นอกจากนี้ การทดสอบได้ถูกทดสอบกับแผงปัจจุบันของยาต้าน leishmanial และถูกใช้เรียบร้อยแล้วเพื่อคัดกรองขนาดใหญ่ของสารประกอบบริสุทธิ์และห้องสมุดของผลิตภัณฑ์ธรรมชาติเศษส่วน ( tekwani et al . พิมพ์ )