2.8. In vivo xanthine oxidase assay

2.8. In vivo xanthine oxidase assay
Rat’s livers were excised immediately after blood collection,
washed in 0.9% saline and rapidly stored at80°C until processing. One group of animals was treated with allopurinol (10 mg/
kg), known xanthine oxidase inhibitor, for positive control of this
assay. The separation of cytosolic fraction containing the enzyme
was performed as described elsewhere (Haidari et al., 2009; Zhu
et al., 2004). Briefly, livers were homogenized in 5 mL of 80 mM
sodium phosphate buffer (pH 7.4). The homogenate was centrifuged at 3000gfor 10 min at 4°C. The lipid layer was removed
and the supernatant was centrifuged again at 10,000gfor 60 min
at 4°C, resulting in the cytosolic fraction. This fraction was used to
evaluate liver xanthine oxidase residual activity according to a
method previously described byHall et al. (1990)with modifications. The formation of uric acid was monitored spectrophotometrically. Briefly, 100μL of the liver cytosolic fraction was
pre-incubated in 5.4 mL of potassium oxonate solution (1 mM) in
50 mM sodium phosphate buffer (pH 7.4) at 35°C for 15 min. After
the incubation period, 1.2 mL of xanthine solution (250 mM) was
added to start the reaction, which, in turn, was stopped after 0 and
30 min by the addition of 500μL of 0.6 M HCl. The samples were
centrifuged at 3000gfor 5 min and the uric acid in the supernatant
was spectrophotometrically quantified at 295 nm (Varian BIO-50).
Protein concentration was determined accordingBradford (1976)
method using bovine serum albumin as standard. Enzyme activity
was expressed as nmoles of uric acid produced per min by 1 mg of
protein [nmol/(min mg protein)]

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.8 ในร่างกาย xanthine oxidase ทดสอบตับของหนูถูกสรรพสามิตทันทีหลังจากเก็บเลือดล้างใน 0.9% saline และเก็บไว้ที่ 80° C จนถึงการประมวลผลอย่างรวดเร็ว สัตว์กลุ่มหนึ่งได้รับการรักษากับ allopurinol (10 มิลลิกรัม /กิโลกรัม), รู้จัก xanthine oxidase ยับยั้ง สำหรับควบคุมบวกนี้ทดสอบ การแยกเศษส่วน cytosolic ที่ประกอบด้วยเอนไซม์ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ที่อื่น (Haidari et al. 2009 Zhuet al. 2004) สั้น ๆ ตับถูก homogenized ใน 5 มล.ของ 80 มม.โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.4) Homogenate การแก้ไขผลิตภัณฑ์ที่ 3000gfor 10 นาทีที่ 4 องศาเซลเซียส ชั้นไขมันที่ถูกเอาออกและ supernatant การแก้ไขผลิตภัณฑ์อีกครั้งที่ 10, 000gfor 60 นาทีที่ 4° C ในเศษส่วน cytosolic ส่วนนี้ใช้ในการประเมินตับ xanthine oxidase กิจกรรมส่วนที่เหลือตามวิธีการอธิบายไว้ byHall et al. (1990) การแก้ไขก่อนหน้านี้ การตรวจสอบการก่อตัวของกรดยูริก spectrophotometrically สั้น ๆ 100μL ของเศษส่วน cytosolic ตับถูกก่อนรับการกกใน 5.4 mL ของสารละลายโพแทสเซียม oxonate (1 mM) ใน50 มม.โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.4) ที่ 35° C เป็นเวลา 15 นาทีหลังจากระยะฟักตัว แก้ไข 1.2 mL ของ xanthine โซลูชัน (250 มม.)เพิ่มเริ่มปฏิกิริยา ซึ่ง ในทางกลับกัน หยุดหลังจาก 0 และ30 นาที โดยการเพิ่ม 500μL ของ 0.6 M HCl ตัวอย่างได้จากที่ 3000gfor 5 นาทีและกรดยูริกใน supernatantคือวัด spectrophotometrically ที่ 295 nm (Varian ชีวภาพ 50)ความเข้มข้นของโปรตีนถูกกำหนด accordingBradford (1976)วิธีใช้วัว serum albumin เป็นมาตรฐาน เอนไซม์ถูกแสดงเป็น nmoles ผลิตต่อนาที โดย 1 มิลลิกรัมของกรดยูริกโปรตีน [นาโนโมล /(min mg protein)]

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.8 ในร่างกาย xanthine oxidase ทดสอบ
ตับหนูที่ถูกตัดทิ้งทันทีหลังจากเก็บตัวอย่างเลือด
ล้างในน้ำเกลือ 0.9% และเก็บไว้ที่ 80 องศาเซลเซียสจนการประมวลผลอย่างรวดเร็ว หนึ่งในกลุ่มของสัตว์ที่ได้รับการรักษาด้วย allopurinol (10 มก. /
กก.) เป็นที่รู้จักยับยั้ง xanthine oxidase, สำหรับการควบคุมในเชิงบวกของ
การทดสอบ การแยกส่วน cytosolic มีเอนไซม์
ที่ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ในที่อื่น ๆ (Haidari et al, 2009;. จู้
., et al, 2004) สั้น ๆ , ตับถูกปั่นในขนาด 5 ml 80 มิลลิ
บัฟเฟอร์โซเดียมฟอสเฟต (pH 7.4) homogenate ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 3000gfor 10 นาทีที่ 4 ° C ชั้นไขมันจะถูกลบออก
และใสถูกปั่นอีกครั้งที่ 10,000gfor 60 นาที
ที่ 4 องศาเซลเซียสส่งผลให้ส่วน cytosolic ส่วนนี้จะถูกใช้ในการ
ประเมินตับ xanthine oxidase กิจกรรมที่เหลือเป็นไปตาม
วิธีการอธิบายไว้ก่อนหน้า byHall et al, (1990) มีการปรับเปลี่ยน การก่อตัวของกรดยูริคได้รับการตรวจสอบ spectrophotometrically สั้น ๆ , 100μLของส่วนตับ cytosolic ถูก
ก่อนบ่มใน 5.4 มิลลิลิตรของสารละลายโพแทสเซียม oxonate (1 มิลลิเมตร)
ขนาด 50 มมโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ (pH 7.4) ที่ 35 องศาเซลเซียสนาน 15 นาที หลังจาก
ระยะฟักตัว 1.2 มิลลิลิตรของการแก้ปัญหา xanthine (250 มิลลิเมตร) ถูก
เพิ่มเพื่อเริ่มต้นปฏิกิริยาซึ่งในทางกลับกันก็หยุดหลังจากที่ 0 และ
30 นาทีโดยนอกเหนือจาก500μL 0.6 M HCl ตัวอย่างถูก
หมุนเหวี่ยงที่ 3000gfor 5 นาทีและกรดยูริคในสารละลาย
ถูกวัด spectrophotometrically ที่ 295 นาโนเมตร (Varian BIO-50).
ความเข้มข้นของโปรตีนที่ถูกกำหนด accordingBradford (1976)
วิธีการใช้เซรั่มอัลบูมิวัวเป็นมาตรฐาน กิจกรรมของเอนไซม์
ถูกแสดงเป็น nmoles ของกรดยูริคที่ผลิตต่อนาที 1 มิลลิกรัม
โปรตีน [nmol / (โปรตีนนาที mg)]

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.8 . ของเอนไซม์ในร่างกาย การทดสอบหนูตับถูกตัดทันทีหลังจากการเก็บเลือดล้างในน้ำเกลือ 0.9% และเก็บไว้ at80 ° C อย่างรวดเร็วจนการประมวลผล หนึ่งในกลุ่มของสัตว์ที่ได้รับการรักษาด้วยยา ( 10 มิลลิกรัมต่อลิตรกิโลกรัม ) , ที่รู้จักกันของเอนไซม์ซึ่งควบคุมบวกนี้การทดสอบ แยก cytosolic เศษส่วนที่มีเอนไซม์ได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ในที่อื่น ( haidari et al . , 2009 ; จูet al . , 2004 ) สั้น , ตับถูกบดใน 5 ml 80 มม.โซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.4 ) โดยแยกเป็นระดับที่ 3000gfor 10 นาทีที่ 4 องศา ชั้นไขมันถูกลบออกและเป็นอีกครั้งที่ 10000gfor สูงที่ระดับ 60 นาทีที่ 4 ° C ( ในส่วน cytosolic . ส่วนนี้ใช้ประเมินกิจกรรมของเอนไซม์ตับ ที่เหลือตามไปวิธีที่อธิบายไว้ก่อนหน้า byhall et al . ( 2533 ) ที่มีการปรับเปลี่ยน การสร้างกรดยูริกถูกตรวจสอบนี้ . สั้น 100 μ L ของตับ cytosolic เศษส่วนคือก่อน ) 5.4 มิลลิลิตรของสารละลายโพแทสเซียม oxonate ( 1 มิลลิเมตร ) ใน50 มิลลิเมตรโซเดียมฟอสเฟตบัฟเฟอร์ pH 7.4 ) ที่ 35 ° C เป็นเวลา 15 นาที หลังจากระยะเวลาที่ 1.2 มิลลิลิตรของสารละลาย ( 250 มม. ) คือเพิ่มเพื่อเริ่มต้นปฏิกิริยา ซึ่ง จะได้หยุดหลังจาก 0 และ30 นาที โดยเพิ่ม 500 μล. 0.6 M HCl . กลุ่มตัวอย่างระดับที่ 3000gfor 5 นาทีและกรดยูริกในน่านนี้เป็นวัดที่ 295 nm ( Varian bio-50 )ความเข้มข้นของโปรตีน accordingbradford ( 1976 ) กำหนดโดยใช้อัลบูมิน เป็นมาตรฐาน กิจกรรมของเอนไซม์จะแสดงเป็นในของกรดยูริกผลิตโดย 1 มิลลิกรัมต่อนาทีซึ่งโปรตีน / [ ( มินมิลลิกรัมโปรตีน ) ]