days, being the results highly depe

days, being the results highly dependent on the particular type of
sample [20].
In general, it is advisable to use fresh products instead of frozen
ones for L-AA analysis, since L-AA stability usually decreases during
freezing or freeze-drying processes. Losses of L-AA between 8
and 10% were reported in lyophilized red tomatoes [21]. GarridoFrenich
et al. [22] observed that L-AA content was higher when
samples were prepared and analyzed in the same day than when
frozen vegetables samples were used (losses of approximately
50%). Rizzolo et al. [23] minimized the oxidative action of enzymes
in fresh fruits by avoiding excessive cutting of samples, and by
freezing them in liquid nitrogen and/or storing them at low temperatures
(−80 ◦C) prior to extraction. However, other authors did
not observe significant differences in L-AA contents in fresh and
freeze-dried fruits [24,25]. The influence of different drying methods
(air-, oven-, and vacuum-drying) on vitamin C concentration
in apples was recently reported [26]. In general, vitamin C losses
during the entire freezing process range between 10 and 80% (with
averages around 50%).
Other aspect to consider during sample preparation is the acidi-
fication ofthe samples, since freezing increases the stability of L-AA,
but does not fully prevent its degradation. The acidification should
be done promptly after sampling [8,15]. Meta-phosphoric acid
(MPA)is the most common reagent, fulfilling the roles of extractant
and stabilizer, inhibiting ascorbate oxidase and metals catalysis,
and precipitating proteins, a process that aids in extract clarification.
MPA can also be combined with other acids and/or organic
modifiers (acetic acid, methanol, acetonitrile, trichloroacetic, citric
acids) and stabilizers (ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA),
monosodium glutamate (MSG)) to increase stabilization [8,9,15].
Extractants that usually limit L-AA oxidation to less than 5% include
3–6% MPA containing acetic or sulfuric acid or 0.005 M EDTA [9].
Hernández et al. [10] compared the efficacy of two extractant
solutions and concluded that MPA was more effective than oxalic
acid in the stabilization of L-AA, providing better recovery rates.
Chebrolu et al. [27] conducted a similar experiment concluding
that L-AA was more stable in MPA, since trichloroacetic acid (TCA)
extracts showed degradation in 48 h. Failure to assess stability of
L-AA in raw products during sample processing and analysis could
result in significant errors in analytical results [12], not reflecting
the real concentration in food as consumed.
The adoption of quick and simple extraction procedures is
important to ensure the efficiency of the extraction [8,9,15,27]. For
the analysis ofliquid samples,their directinjectioninthe HPLCafter
dilution with the initial mobile phase is the most common procedure.
For solid samples, solid–liquid extraction (SLE) is normally
used. In this case, samples are thoroughly homogenized with the
extractant, centrifuged or filtered, and injected in the HPLC after
dilution with the initial mobile phase.
3.2. HPLC methods for vitamin C quantification
Many analyticalmethods, including chromatography,have been
reported to measure vitamin C content in foods [7,9,16]. Despite its
limitations, classical methods are still common in food analysis.
AOAC Official titration method (967.21/2006) is routinely applied
for the analysis of fruits and juices, due to its simplicity and low
cost [9,10,28]. Comparisons between HPLC and traditional methods
have been previously reported [10,29–31]. Even though similar
results were observed for several samples, HPLC methods are necessary
for the analysis of many food samples due to their high
complexity, which demands high selectivity and sensitivity. In
addition, only L-AAcan be determined by the traditional iodometric
titration, whereas L-AA and DHAA can be quantified with appropriate
HPLC methods. Different HPLC methods are shown in Table 1
for vitamin C determination, all of them published between 2000
and 2014 in the field of food chemistry, by chronological order. The
validation parameters reported in each method are also shown in
Table 1.
Because of the non-volatile and hydrophilic nature of vitamin
C, reversed-phase (RP)-HPLC is the most common approach [7–9],
although ion exchange, ion-pair, ion-exclusion, and hydrophilic
interaction liquid chromatography (HILIC) have also been reported
(Table 1). Ultra-high performance liquid chromatography (UHPLC)
has recently been applied to the analysis of vitamin C in foods [20],
observing as key advantages the shorter time of analysis and the
much lower solvent consumption when compared to other analytical
approaches.
The pH of the mobile phase is usually adjusted below L-AA’s
pKa (4.17) to prevent its degradation. Additional information on
vitamin C analysis is available in other reviews [7,9,71].
L-AA presents a strong absorption in the ultra-violet region
(245–270 nm), making UV absorbance the most popular detection
technique [7,9,15]; however, this absorbance is strongly dependent
on the pH (Table S1) and this aspect has to be taken into
account. Less frequently, fluorescence detection (FD) and electrochemical
detection (ECD) have been used [7,8], as well as
mass-spectrometry (MS) [7,22,53,65,72–74]. The limits of detection
(LODs) ranged between 0.02 and 0.16 g/mL for ECD, between
1.2 × 10−3 and 7.2 g/mL for UV, and approximately 0.27 g/mL
for fluorescence detection (Table 1). Usually, ECD is more sensitive
than UV, although the wide ranges of LODs make it difficult to perform
an accurate comparison. Fluorescence is also more sensitive
than UV, although the derivatization procedure required makes it
more tedious than UV.
The low levels of DHAA in most samples difficultits quantitative
analysis with any HPLC detector. Therefore, DHAA is often reduced
to L-AAbefore its chromatographic separation, anditismeasuredas
TAA, i.e., the sum of L-AA and DHAA contents [7,8]. This procedure
demands two chromatographic runs, and DHAA is then calculated
by the subtraction of L-AA from TAA [7].
4. Method validation
Once a method has been optimized, it has to be validated to
ensure its suitability for the desired applications [2,3]. A number
of guidance documents on method validation have been issued
by various international reputable organizations and conferences,
guidelines that are described in different scientific works [1,4,5,75].
Examples of these associations are AOAC (Association of Official
Analytical Chemists), FDA (Food and Drug Administration), FAO
(Food and Agricultural Organization/World Health), EURACHEM (A
Focus for Analytical Chemistry in Europe), ICH (International Conference
on Harmonization), IUPAC (International Union of Pure and
Applied Chemistry), and the European Commission, among others
[4,13,76–78]. Unfortunately, there is still no single source or final
guideline on analytical method validation [76,79].
For the validation of a quantitative analytical procedure, there
is a set of key elements that are generally accepted: selectivity,
linearity, stability, accuracy, precision, and the lower limit of quantification.
Additional parameters which may be relevant include
LOD, reproducibility, robustness, and ruggedness [2,4,5]. For analytical
methods using LC–MS, the assessment of possible matrix
effects (ME) should always be part of the validation process, particularly
if electrospray ionization (ESI) is used [5]. There are already
good reviews covering in detail the different definitions for each
validation parameter [1,75], so this review will focus in the parameters
that are usually validated in HPLC methods for vitamin C
determination in food samples.
A proper validation of an analytical method not only has to be
adequate, but also clear to all the scientific community. Hence, it

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วัน มีผลสูงขึ้นอยู่กับชนิดเฉพาะของตัวอย่าง [20]ทั่วไป ดังนั้นคุณควรใช้ผลิตภัณฑ์สดแทนแช่แข็งคนสำหรับการวิเคราะห์ L AA เนื่องจากความมั่นคง L AA มักจะลดในระหว่างแช่แข็ง หรือขั้นกระบวนการ ขาดทุนของ L AA ระหว่าง 8และมีรายงาน 10% ในมะเขือเทศแดง lyophilized [21] GarridoFrenichal. ร้อยเอ็ด [22] สังเกตว่า L-AA เนื้อหาสูงขึ้นเมื่อเตรียมตัวอย่าง และวิเคราะห์ในวันเดียวกว่าเมื่อใช้ผักแช่แข็งตัวอย่าง (ความสูญเสียของประมาณ50%) การกระทำ oxidative ของเอนไซม์ย่อ Rizzolo et al. [23]ในผลไม้โดยหลีกเลี่ยงการตัดมากเกินไป ของตัวอย่าง และโดยแช่แข็งไว้ในไนโตรเจนเหลวและ/หรือเก็บที่อุณหภูมิต่ำ(−80 ◦C) ก่อนถึงแยก อย่างไรก็ตาม คนไม่ได้ไม่คำนึงถึงความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในเนื้อหา L AA ในสด และกรอบผลไม้ [24,25] อิทธิพลของวิธีการอบแห้ง(อากาศ เตาอบ- และอบ แห้งสุญญากาศ) ในความเข้มข้นของวิตามินซีในแอปเปิ้ลมีรายงานเมื่อเร็ว ๆ นี้ [26] การสูญเสียวิตามินซีทั่วไปในระหว่างช่วงการตรึงทั้งระหว่าง 10 และ 80% (หาค่าเฉลี่ยประมาณ 50%)อื่น ๆ ในการพิจารณาในระหว่างการเตรียมตัวอย่างคือ acidi-fication ตัวอย่าง ตั้งแต่จุดเยือกแข็งเพิ่มเสถียรภาพของ L-AAแต่ไม่เต็มป้องกันการย่อยสลาย ยูที่ควรทำได้ทันทีหลังจากสุ่มตัวอย่าง [8,15] กรด phosphoric meta-(แรง) เป็นรีเอเจนต์ทั่ว สนองบทบาทของ extractantและ โคลง inhibiting ascorbate oxidase และโลหะเร่งปฏิกิริยาและปัจจัยโปรตีน กระบวนการที่ช่วยในการแยกชี้แจงแรงยังสามารถรวมกับกรดอื่น ๆ หรืออินทรีย์คำวิเศษณ์ (กรดน้ำส้ม เมทานอล acetonitrile, trichloroacetic แอซิด ซิทริกกรด) และ stabilizers (กรด ethylenediaminetetraacetic (EDTA),กลูตาเมต (ผงชูรส)) เพื่อเพิ่มเสถียรภาพ [8,9,15]Extractants ที่มักจะจำกัด L AA ออกซิเดชันน้อยกว่า 5% รวม3 – 6% แรงประกอบด้วยอะซิติกหรือกรดซัลฟิวริกหรือ 0.005 M EDTA [9]Hernández et al. [10] เปรียบเทียบประสิทธิภาพของ extractant สองแก้ไขปัญหา และสรุปว่า แรงมีประสิทธิภาพกว่าออกซาลิกกรดในเสถียรภาพของ L-AA ให้ราคากู้ดีกว่าChebrolu et al. [27] ดำเนินการคล้ายการทดลองสรุปL-AA ที่มีเสถียรภาพมากขึ้นในแรง ตั้งแต่ trichloroacetic กรด (TCA)สารสกัดที่พบการลดประสิทธิภาพใน h. 48 ความล้มเหลวในการประเมินความมั่นคงของL-AA ในผลิตภัณฑ์วัตถุดิบในระหว่างการประมวลผลตัวอย่างและวิเคราะห์ได้ทำให้สำคัญผิดผลลัพธ์วิเคราะห์ [12], ไม่สะท้อนความเข้มข้นจริงในอาหารการใช้ไม่ยอมรับกระบวนการสกัดแบบง่าย และรวดเร็วสิ่งสำคัญที่จะให้ประสิทธิภาพการสกัด [8,9,15,27] สำหรับตัวอย่างการวิเคราะห์ ofliquid, directinjectioninthe ของ HPLCafterเจือจาง ด้วยเคลื่อนระยะเริ่มต้นเป็นขั้นตอนทั่วไปตัวอย่างของแข็ง ของแข็ง – ของเหลวสกัด (SLE) เป็นปกติใช้ ในกรณีนี้ ตัวอย่างจะทำ homogenized เป็นกลุ่มด้วยการextractant, centrifuged หรือกรอง และฉีดใน HPLC หลังเจือจาง ด้วยเคลื่อนระยะเริ่มต้น3.2 วิธี HPLC วิตามินซีนับAnalyticalmethods หลาย รวมทั้ง chromatography ได้รับรายงานการประเมินเนื้อหาวิตามินซีในอาหาร [7,9,16] แม้มีความจำกัด วิธีคลาสสิกยังคงร่วมกันในการวิเคราะห์อาหารเป็นประจำจะใช้วิธีการไทเทรตทาง AOAC (967.21/2006)สำหรับการวิเคราะห์น้ำ ความเรียบง่ายและต่ำและผลไม้ต้นทุน [9,10,28] เปรียบเทียบระหว่าง HPLC และวิธีแบบดั้งเดิมได้รายงานไปก่อนหน้านี้ [10,29-31] แม้คล้ายผลลัพธ์ได้สังเกตตัวหลายอย่าง HPLC วิธีจำเป็นสำหรับการวิเคราะห์ตัวอย่างอาหารมากเนื่องจากความสูงความซับซ้อน ซึ่งต้องใวสูงและความไวในการ ในนอกจากนี้ L-AAcan เท่านั้นตาม iodometric ดั้งเดิมการไทเทรต ในขณะที่สามารถ quantified L AA และ DHAA มีความเหมาะสมวิธี HPLC วิธี HPLC จะแสดงในตารางที่ 1สำหรับวิตามินซีกำหนด ทั้งหมดเผยแพร่ระหว่าง 2000และปี 2014 ในฟิลด์ของเคมีอาหาร โดยเรียงตามลำดับ ที่พารามิเตอร์การตรวจสอบในแต่ละวิธีจะแสดงในตารางที่ 1เพราะธรรมชาติไม่ระเหย และ hydrophilic ของวิตามินC กลับเฟส (RP) -HPLC เป็นวิธีพบมากที่สุด [7-9],แม้ว่าการแลกเปลี่ยนไอออน ไอออนคู่ ไอออน แยก และ hydrophilicนอกจากนี้ยังมีการรายงานโต้เหลว chromatography (HILIC)(ตาราง 1) ประสิทธิภาพสูงของเหลว chromatography (UHPLC)เมื่อเร็ว ๆ นี้ได้ถูกใช้เพื่อการวิเคราะห์วิตามินซีในอาหาร [20],สังเกตเป็นข้อดีที่สำคัญเวลาสั้นกว่าการวิเคราะห์และมากต่ำกว่าตัวทำละลายปริมาณเมื่อเทียบกับอื่น ๆ วิเคราะห์แนวทางการมักจะมีปรับ pH ของเฟสเคลื่อนที่ด้านล่าง L-AApKa (4.17) เพื่อป้องกันการสลายตัวของ ข้อมูลเพิ่มเติมการวิเคราะห์วิตามินซีมีในรีวิวอื่น ๆ [7,9,71]L-AA แสดงการดูดซึมที่แข็งแกร่งในภูมิภาคพิเศษไวโอเลท(245 – 270 nm), absorbance UV ทำให้ตรวจสอบที่นิยมมากที่สุดเทคนิค [7,9,15]; อย่างไรก็ตาม absorbance นี้เป็นอย่างยิ่งขึ้นpH (ตาราง S1) และด้านนี้มีการนำเข้าบัญชี หักบ่อย fluorescence ตรวจ (FD) และไฟฟ้าตรวจสอบ (เบาะแส) ได้ใช้ [7,8] , เป็นมวล-spectrometry (MS) [7,22,53,65,72-74] ขีดจำกัดของการตรวจสอบ(LODs) อยู่ในช่วงระหว่าง 0.02 0.16 g/mL สำหรับเบาะแส ระหว่าง1.2 × 10−3 และ 7.2 g/mL สำหรับ UV และประมาณ 0.27 g/mLfluorescence ตรวจ (ตารางที่ 1) ปกติ เบาะแสจะอ่อนไหวมากกว่า UV แม้ว่าช่วงความกว้างของ LODs ทำให้ยากที่จะทำเปรียบเทียบความถูกต้อง Fluorescence ก็สำคัญมากกว่า UV แม้ว่ากระบวนการ derivatization ต้อง ทำให้ยิ่งน่าเบื่อกว่า UVระดับต่ำสุดของ DHAA เป็นตัวอย่างเชิงปริมาณ difficultitsการวิเคราะห์ ด้วย HPLC จับใด ๆ ดังนั้น DHAA มักจะลดลงให้ L-AAbefore แยกของ chromatographic, anditismeasuredasแหลมยายณี เช่น ผลรวมของเนื้อหา DHAA และ L-AA [7,8] ขั้นตอนนี้ความต้องการสอง chromatographic รัน และ DHAA แล้วคำนวณโดยลบของ L-AA จากแหลมยายณี [7]4. วิธีการตรวจสอบเมื่อมีการปรับวิธีการ มีการต้องตรวจสอบเพื่อตรวจสอบความเหมาะสมสำหรับโปรแกรมประยุกต์ที่ระบุ [2,3] หมายเลขของคำแนะนำ วิธีการตรวจสอบเอกสารออกโดยมีองค์กรระหว่างประเทศต่าง ๆ และการประชุมแนวทางที่อธิบายไว้ในที่ต่าง ๆ ทางวิทยาศาสตร์ที่ทำงาน [1,4,5,75]ตัวอย่างของการเชื่อมโยงเหล่านี้ได้แก่ AOAC (สมาคมของทางนักเคมีวิเคราะห์), FAO, FDA (อาหารและยา)EURACHEM (อาหารและสุขภาพองค์กรโลกเกษตร), (Aเน้นการวิเคราะห์ทางเคมีในยุโรป), ICH (ประชุมนานาชาติบน Harmonization), ยิ่ง ๆ (สหภาพระหว่างประเทศของบริสุทธิ์ และเคมีประยุกต์), และคณะ กรรมาธิการยุโรป หมู่คนอื่น ๆ[4,13,76-78] อับ ยังมีแหล่งเดียวหรือสุดท้ายไม่หลักเกณฑ์ในการตรวจสอบวิธีวิเคราะห์ [76,79]สำหรับการตรวจสอบเชิงปริมาณวิเคราะห์กระบวนการ มีคือชุดขององค์ประกอบสำคัญที่เป็นที่ยอมรับโดยทั่วไป: ใวแบบดอกไม้ เสถียรภาพ ความแม่นยำ ความแม่นยำ และขีดจำกัดล่างของการนับรวมพารามิเตอร์เพิ่มเติมซึ่งอาจเกี่ยวข้องลอด reproducibility เสถียรภาพ ก ruggedness [2,4,5] สำหรับวิเคราะห์วิธีใช้ LC – MS ประเมินของเมทริกซ์ได้ผล (ฉัน) ควรเป็นส่วนหนึ่งของกระบวนการตรวจสอบ โดยเฉพาะอย่างยิ่งถ้าวิธีพ่นละอองไฟฟ้า ionization (ESI) จะใช้ [5] มีอยู่แล้วรีวิวดีที่ครอบคลุมในรายละเอียดข้อกำหนดต่าง ๆ สำหรับแต่ละตรวจสอบพารามิเตอร์ [1,75], ดังนั้นบทความนี้จะเน้นในพารามิเตอร์ที่มักจะถูกตรวจสอบในวิธี HPLC สำหรับวิตามินซีกำหนดในตัวอย่างอาหารตรวจสอบความเหมาะสมของวิธีการวิเคราะห์ได้ไม่เพียงแต่จะเพียงพอ แต่ยังล้างเพื่อชุมชนทางวิทยาศาสตร์ทั้งหมด ดังนั้น มัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วันที่เป็นผลสูงขึ้นอยู่กับประเภทเฉพาะของ
ตัวอย่าง [20].
โดยทั่วไปจะแนะนำให้ใช้ผลิตภัณฑ์สดแทนการแช่แข็ง
คนสำหรับการวิเคราะห์ L-AA เนื่องจากเสถียรภาพ L-AA มักจะลดลงในระหว่างการ
แช่แข็งหรือแช่แข็งแห้ง กระบวนการ ความสูญเสียของ L-AA ระหว่าง 8
และ 10% ที่ได้รับรายงานในมะเขือเทศสีแดงแห้ง [21] GarridoFrenich
และคณะ [22] ข้อสังเกตว่าเนื้อหา L-AA เพิ่มมากขึ้นเมื่อ
กลุ่มตัวอย่างได้รับการเตรียมความพร้อมและการวิเคราะห์ในวันเดียวกันกว่าเมื่อ
แช่แข็งตัวอย่างผักถูกนำมาใช้ (ขาดทุนประมาณ
50%) Rizzolo และคณะ [23] ลดการกระทำออกซิเดชันของเอนไซม์
ในผลไม้สดโดยการหลีกเลี่ยงการตัดที่มากเกินไปของตัวอย่างและโดย
การแช่แข็งไว้ในไนโตรเจนเหลวและ / หรือเก็บไว้ที่อุณหภูมิต่ำ
(-80 ◦C) ก่อนที่จะมีการสกัด อย่างไรก็ตามผู้เขียนอื่น ๆ ไม่
ได้สังเกตเห็นความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในเนื้อหา L-AA ในผลไม้สดและ
ผลไม้แห้ง [24,25] อิทธิพลของวิธีการอบแห้งที่แตกต่างกัน
(อากาศ, oven- และสูญญากาศแห้ง) กับความเข้มข้นของวิตามินซี
ในแอปเปิ้ลได้รับการรายงานเมื่อเร็ว ๆ นี้ [26] โดยทั่วไปแล้วการสูญเสียวิตามินซี
ในระหว่างช่วงกระบวนการแช่แข็งทั้งหมดระหว่าง 10 และ 80% (มี
ค่าเฉลี่ยประมาณ 50%).
ด้านอื่น ๆ ที่จะต้องพิจารณาในระหว่างการเตรียมตัวอย่าง acidi-
อ้าง ofthe ตัวอย่างตั้งแต่การแช่แข็งเพิ่มความมั่นคงของ L-AA,
แต่ไม่ได้อย่างเต็มที่ป้องกันการเสื่อมสภาพของมัน กรดควร
จะทำทันทีหลังจากการสุ่มตัวอย่าง [8,15] กรดฟอสฟ Meta-
(MPA) เป็นสารที่พบมากที่สุดตอบสนองบทบาทของสารสกัด
และโคลง, ยับยั้ง oxidase ascorbate และการเร่งปฏิกิริยาโลหะ
และตกตะกอนโปรตีนกระบวนการที่ช่วยในการชี้แจงสารสกัด.
MPA ยังสามารถใช้ร่วมกับกรดอื่น ๆ และ / หรืออินทรีย์
ปรับเปลี่ยน (กรดอะซิติก, เมทานอล, acetonitrile, ไตรคลอโร, ซิตริก
กรด) และความคงตัว (กรด ethylenediaminetetraacetic (EDTA),
ผงชูรส (MSG)) เพื่อเพิ่มเสถียรภาพ [8,9,15].
น้ำยาสกัดที่มักจะ จำกัด การออกซิเดชั่ L-AA จะน้อยกว่า 5% รวมถึง
3-6% MPA มีอะซิติกหรือกรดซัลฟูริกหรือ 0.005 M EDTA [9].
Hernándezและคณะ [10] เมื่อเทียบกับประสิทธิภาพของสารสกัดสอง
โซลูชั่นและได้ข้อสรุปว่า MPA มีประสิทธิภาพมากขึ้นกว่าที่ออกซาลิก
กรดในการรักษาเสถียรภาพของ L-AA ให้อัตราการฟื้นตัวที่ดีขึ้น.
Chebrolu และคณะ [27] การดำเนินการทดลองที่คล้ายกันสรุป
ว่า L-AA เป็นมีเสถียรภาพมากขึ้นใน MPA เนื่องจากกรดไตรคลอโร (TCA)
สารสกัดจากแสดงให้เห็นว่าการย่อยสลายใน 48 ชั่วโมง ความล้มเหลวในการประเมินความมั่นคงของ
L-AA ในผลิตภัณฑ์ดิบระหว่างการประมวลผลและการวิเคราะห์ตัวอย่างอาจ
ส่งผลให้เกิดข้อผิดพลาดอย่างมีนัยสำคัญในผลการวิเคราะห์ [12] ไม่ได้สะท้อนให้เห็นถึง
ความเข้มข้นที่แท้จริงในการบริโภคอาหารเป็น.
การยอมรับของวิธีการสกัดที่ง่ายและรวดเร็วเป็น
สิ่งสำคัญเพื่อให้แน่ใจว่า ประสิทธิภาพในการสกัด [8,9,15,27] สำหรับ
การวิเคราะห์ ofliquid ตัวอย่าง directinjectioninthe HPLCafter ของพวกเขา
เจือจางกับเฟสเคลื่อนที่เริ่มต้นเป็นขั้นตอนที่พบมากที่สุด.
สำหรับกลุ่มตัวอย่างที่เป็นของแข็งการสกัดของแข็งของเหลว (SLE) เป็นปกติ
ใช้ ในกรณีนี้ตัวอย่างจะหดหายให้สะอาดด้วย
สารสกัด, ปั่นหรือกรองและฉีด HPLC หลังจาก
เจือจางกับเฟสเคลื่อนที่เริ่มต้น.
3.2 วิธี HPLC สำหรับปริมาณวิตามินซี
ตรวจวิเคราะห์หลายคนรวมทั้งโครมาโตได้รับการ
รายงานในการวัดปริมาณวิตามินซีในอาหาร [7,9,16] แม้จะมีของ
ข้อ จำกัด ของวิธีการคลาสสิกยังคงอยู่ร่วมกันในการวิเคราะห์อาหาร.
AOAC วิธีไตเตรทอย่างเป็นทางการ (967.21 / 2006) ถูกนำไปใช้เป็นประจำ
สำหรับการวิเคราะห์ของผลไม้และน้ำผลไม้เนื่องจากความเรียบง่ายและต่ำของ
ค่าใช้จ่าย [9,10,28] เปรียบเทียบระหว่าง HPLC และวิธีการแบบดั้งเดิม
ที่ได้รับการรายงานก่อนหน้านี้ [10,29-31] แม้ว่าที่คล้ายกัน
ผลการพบตัวอย่างหลายวิธี HPLC เป็นสิ่งที่จำเป็น
สำหรับการวิเคราะห์ตัวอย่างอาหารจำนวนมากเนื่องจากการสูงของพวกเขา
ซับซ้อนซึ่งเรียกร้องหัวกะทิสูงและความไว ใน
นอกจากนี้เท่านั้น L-ที่อาจารย์กำลังถูกกำหนดโดย iodometric ดั้งเดิม
ไตเตรทในขณะที่ L-AA และ DHAA สามารถวัดที่มีความเหมาะสม
วิธี HPLC วิธี HPLC ที่แตกต่างกันจะถูกแสดงในตารางที่ 1
การกำหนดวิตามิน C, ทั้งหมดของพวกเขาที่ตีพิมพ์ระหว่าง 2000
และ 2014 ในสาขาวิชาเคมีอาหารโดยลำดับ
พารามิเตอร์การตรวจสอบรายงานในแต่ละวิธีก็จะแสดงใน
ตารางที่ 1.
เพราะธรรมชาติไม่ระเหยและ hydrophilic ของวิตามิน
C, ย้อนกลับเฟส (RP) -HPLC เป็นวิธีที่พบมากที่สุด [7-9]
แม้ว่าการแลกเปลี่ยนไอออน ไอออนคู่ไอออนยกเว้นและชอบน้ำ
ปฏิสัมพันธ์ของเหลว chromatography (HILIC) ยังได้รับการรายงาน
(ตารางที่ 1) ประสิทธิภาพสูงพิเศษของเหลว chromatography (UHPLC)
ได้รับเมื่อเร็ว ๆ นี้นำไปใช้กับการวิเคราะห์ของวิตามินซีในอาหาร [20],
การสังเกตเป็นข้อได้เปรียบที่สำคัญเวลาที่สั้นลงของการวิเคราะห์และ
การบริโภคมากตัวทำละลายที่ต่ำกว่าเมื่อเทียบกับการวิเคราะห์อื่น ๆ
วิธี.
ค่า pH เฟสเคลื่อนที่จะมีการปรับมักจะต่ำกว่าของ L-AA
pKa (4.17) เพื่อป้องกันการย่อยสลายของ ข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับ
การวิเคราะห์วิตามินซีที่มีอยู่ในความคิดเห็นอื่น ๆ [7,9,71].
L-AA ที่มีการดูดซึมที่แข็งแกร่งในภูมิภาคอัลตร้าไวโอเลต
(245-270 นาโนเมตร) ทำให้การดูดกลืนรังสียูวีการตรวจสอบที่นิยมมากที่สุด
เทคนิค [7, 9,15]; แต่การดูดกลืนแสงนี้ขึ้นอยู่
บนความเป็นกรดด่าง (ตาราง S1) และด้านนี้จะต้องมีการนำเข้า
บัญชี ไม่บ่อย, การตรวจสอบการเรืองแสง (FD) และไฟฟ้า
การตรวจสอบ (ECD) ได้ถูกนำมาใช้ [7,8] เช่นเดียวกับ
มวล spectrometry (MS) [7,22,53,65,72-74] ข้อ จำกัด ของการตรวจสอบ
(LODs) อยู่ระหว่าง 0.02 และ 0.16 กรัม / มิลลิลิตรสำหรับ ECD ระหว่าง
1.2 × 10-3 และ 7.2 g / ml สำหรับรังสียูวีและประมาณ 0.27 g / ml
สำหรับการตรวจสอบการเรืองแสง (ตารางที่ 1) โดยปกติ ECD เป็นเรื่องละเอียดอ่อนมากขึ้น
กว่า UV แม้ว่าช่วงกว้างของ LODs ทำให้มันยากที่จะดำเนิน
การเปรียบเทียบที่ถูกต้อง เรืองแสงนี้ยังมีความสำคัญมากขึ้น
กว่า UV แม้ว่าขั้นตอนอนุพันธ์ที่ต้องทำให้มัน
น่าเบื่อมากกว่า UV.
ระดับต่ำของ DHAA ในตัวอย่างส่วนใหญ่ difficultits เชิงปริมาณ
การวิเคราะห์ด้วย HPLC ตรวจจับใด ๆ ดังนั้น DHAA จะลดลงมัก
จะ L-AAbefore แยกโครมาของ anditismeasuredas
TAA คือผลรวมของ L-AA และเนื้อหา DHAA [7,8] ขั้นตอนนี้
เรียกร้องทั้งสองวิ่งโครมาและ DHAA มีการคำนวณแล้ว
โดยการลบของ L-AA จาก TAA [7].
4 การตรวจสอบวิธีการ
เมื่อวิธีการได้รับการปรับปรุงก็จะต้องมีการตรวจสอบเพื่อ
ให้แน่ใจว่าเหมาะสมสำหรับการใช้งานที่ต้องการ [2,3] จำนวน
ของเอกสารคำแนะนำเกี่ยวกับการตรวจสอบวิธีการที่ได้รับการออก
โดยองค์กรที่มีชื่อเสียงต่างๆระหว่างประเทศและการประชุม
แนวทางที่อธิบายไว้ในผลงานทางวิทยาศาสตร์ที่แตกต่างกัน [1,4,5,75].
ตัวอย่างของสมาคมเหล่านี้เป็น AOAC (สมาคมอย่างเป็นทางการ
นักเคมีวิเคราะห์) องค์การอาหารและยา (อาหารและยา), FAO
(องค์การอาหารและการเกษตร / การอนามัยโลก), EURACHEM (
โฟกัสสำหรับเคมีวิเคราะห์ในยุโรป), ICH (การประชุมระหว่างประเทศ
ในการประสาน) IUPAC (สหภาพระหว่างประเทศของบริสุทธิ์และ
เคมีประยุกต์) และคณะกรรมาธิการยุโรปอื่น ๆ ในกลุ่ม
[4,13,76-78] แต่น่าเสียดายที่ยังคงไม่มีแหล่งเดียวหรือสุดท้าย
แนวทางในการตรวจสอบวิธีการวิเคราะห์ [76,79].
สำหรับการตรวจสอบของขั้นตอนการวิเคราะห์เชิงปริมาณที่มี
คือชุดขององค์ประกอบที่สำคัญที่ได้รับการยอมรับโดยทั่วไป: หัวกะทิ
เชิงเส้น, เสถียรภาพความถูกต้อง ความแม่นยำและขีด จำกัด ล่างของปริมาณ.
พารามิเตอร์เพิ่มเติมซึ่งอาจจะเกี่ยวข้องรวมถึง
LOD, การทำสำเนา, ความทนทานและความรุนแรง [2,4,5] สำหรับการวิเคราะห์
โดยใช้วิธี LC-MS การประเมินของเมทริกซ์ที่เป็นไปได้
ผลกระทบ (ME) ควรจะเป็นส่วนหนึ่งของกระบวนการตรวจสอบโดยเฉพาะอย่างยิ่ง
ถ้า electrospray ไอออนไนซ์ (ESI) ใช้ [5] มีอยู่แล้ว
ความคิดเห็นที่ดีครอบคลุมในรายละเอียดที่แตกต่างกันคำจำกัดความสำหรับแต่ละ
พารามิเตอร์การตรวจสอบ [1.75] ดังนั้นการตรวจสอบนี้จะเน้นในพารามิเตอร์
ที่ได้รับการตรวจสอบมักจะอยู่ในวิธี HPLC สำหรับวิตามินซี
มุ่งมั่นในตัวอย่างอาหาร.
การตรวจสอบที่ถูกต้องของการวิเคราะห์ วิธีการไม่เพียง แต่จะต้องมี
เพียงพอ แต่ยังเป็นที่ชัดเจนให้กับทุกชุมชนวิทยาศาสตร์ ดังนั้นจึง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

วัน ได้ผลสูง ขึ้นอยู่กับประเภทที่เฉพาะเจาะจงของ
ตัวอย่าง [ 20 ] .
โดยทั่วไปจะแนะนำให้ใช้ผลิตภัณฑ์สดแทนแช่แข็ง
คนวิเคราะห์ l-aa , เนื่องจากเสถียรภาพ l-aa มักจะลดลงในช่วงเย็นหรือแช่แข็งแห้ง
กระบวนการ ความสูญเสียของ l-aa ระหว่าง 8 และ 10 %
รายงานแห้งสีแดงในมะเขือเทศ [ 21 ] garridofrenich
et al .[ 22 ] สังเกตได้ว่า l-aa เนื้อหาสูงกว่าเมื่อ
ตัวอย่างถูกเตรียมและวิเคราะห์ในวันเดียวกันเมื่อ
ผักแช่แข็งจำนวนที่ใช้ ( ขาดทุนประมาณ
50% ) rizzolo et al . [ 23 ] ลดการออกซิเดชันของเอนไซม์
ในผลไม้สดโดยหลีกเลี่ยงการมากเกินไปของตัวอย่างและโดย
แช่แข็งในไนโตรเจนเหลว และ / หรือ เก็บไว้ที่อุณหภูมิต่ำ
( − 80 ◦ C ) ก่อนการสกัด อย่างไรก็ตาม ผู้เขียนอื่น ๆทำ
ไม่สังเกตความแตกต่างใน l-aa เนื้อหาสดและอบแห้ง ผลไม้ 24,25
[ ] อิทธิพลของวิธีการทำแห้งที่แตกต่างกัน
( อากาศ , เตาอบและอบแห้งสูญญากาศ ) วิตามิน C เข้มข้น
ในแอปเปิ้ลเพิ่งรายงาน [ 26 ] โดยทั่วไปแล้ววิตามิน C ขาดทุน
ตลอดทั้งกระบวนการแช่เยือกแข็งในช่วงระหว่าง 10 และ 80 %
( กับเฉลี่ยประมาณ 50 เปอร์เซ็นต์ ด้านอื่น ๆเพื่อพิจารณาในระหว่าง
ตัวอย่างการเตรียมคือ acidi -
fication ของตัวอย่าง เนื่องจากจะเพิ่มเสถียรภาพของ l-aa
, แต่ไม่เต็มที่ป้องกันของการย่อยสลาย กรดควรทำทันทีหลังจากที่
) [ 8,15 ] เมตา กรดฟอสฟอริค
( MPA ) เป็นสารเคมีที่พบมากที่สุด ตามบทบาทของสารสกัดบัวหิมะ
,การเปลี่ยนแปลงของโลหะเร่งปฏิกิริยาและ , และโปรตีนที่ตกตะกอน
, กระบวนการที่ช่วยในการดึง .
MPa ยังสามารถรวมกับกรดอื่น ๆและ / หรือปรับเปลี่ยนอินทรีย์
( กรดน้ำส้ม , เมทานอล , ไนไตรคลอโรอะซิติกและกรดซิตริก
( บางบอน ) กรด ( EDTA ) ,
ผงชูรส ) เพื่อเพิ่มเสถียรภาพ 8,9,15
[ ]ชนิด ที่มักจะ จำกัด l-aa ออกซิเดชันน้อยกว่า 5% รวม
3 – 6 % MPA ที่มีกรดหรือกรดซัลฟูริค หรือ 0.005 M EDTA [ 9 ] .
เ ร์น . kgm ndez et al . [ 10 ] เมื่อเปรียบเทียบประสิทธิภาพของโซลูชั่นสองสกัด
และสรุปว่า MPA ได้มีประสิทธิภาพมากกว่ากรดออกซาลิ
ในการ l-aa ให้อัตราการฟื้นตัวดีกว่า
chebrolu et al . [ 27 ] ทดลองดำเนินการที่คล้ายกัน
ปัจฉิมที่ l-aa มีเสถียรภาพมากขึ้นในปาสคาล เนื่องจากกรดไตรคลอโรอะซิติก ( TCA )
สกัดพบการย่อยสลายใน 48 ชั่วโมง ความล้มเหลวที่จะประเมินเสถียรภาพของ
l-aa ในผลิตภัณฑ์ดิบในการประมวลผลตัวอย่างและวิเคราะห์ผลในข้อผิดพลาดอาจ
สําคัญในการวิเคราะห์ [ 12 ] , ไม่แสดงถึงความเข้มข้นในอาหารจริง

การยอมรับใช้ ที่รวดเร็วและง่ายในขั้นตอนการสกัด คือ
ที่สำคัญเพื่อให้แน่ใจว่าประสิทธิภาพของการสกัด [ 8,9,15,27 ] เพื่อการวิเคราะห์ตัวอย่างของเหลว
,
directinjectioninthe hplcafter เจือจางกับเฟสโทรศัพท์มือถือเริ่มต้นเป็นขั้นตอนที่พบมากที่สุด .
สำหรับตัวอย่างของแข็ง , ของแข็ง - ของเหลวการสกัด ( SLE ) คือปกติ
ใช้ . ในกรณีนี้ ตัวอย่าง ให้บดกับ
สกัด ไฟฟ้า หรือที่ผ่านการกรองและการฉีดใน HPLC หลังจาก
เจือจางกับเฟสเคลื่อนที่เริ่มต้น .
2 . วิธี HPLC สำหรับวิตามินซีปริมาณ
หลาย analyticalmethods รวมทั้ง chromatography ได้
รายงานวัดวิตามินซีในอาหาร [ 7,9,16 ] แม้จะมีข้อ จำกัด ของมัน
วิธีการคลาสสิกยังทั่วไปในการวิเคราะห์อาหาร โปรตีน ( 967.21 การไทเทรตแบบเป็นทางการ

/ 2549 ) ที่ถูกใช้สำหรับการวิเคราะห์และน้ำผลไม้ ผลไม้ เนื่องจากความเรียบง่ายและประหยัดค่าใช้จ่าย 9,10,28 [
] การเปรียบเทียบระหว่างเทคนิคและวิธีการแบบดั้งเดิมได้รับการรายงานก่อนหน้านี้ 10,29
[ 31 ] ถึงแม้ว่าผลที่คล้ายกัน
เป็นสังเกตสำหรับตัวอย่างหลายวิธี HPLC ที่จำเป็นสำหรับการวิเคราะห์ตัวอย่างอาหาร

หลายเนื่องจากความซับซ้อนสูง ซึ่งต้องการสูงและความไว ใน
นอกจากนี้เพียง l-aacan ถูกกําหนดโดยการไทเทรต iodometric
แบบดั้งเดิม ในขณะที่ l-aa และ dhaa สามารถ quantified กับวิธี HPLC ที่เหมาะสม

วิธี HPLC ที่แตกต่างกันจะแสดงในตารางที่ 1
สำหรับวิตามินซี ปริมาณ ทั้งหมดของพวกเขา ที่ตีพิมพ์ระหว่างปี 2000
และ 2014 ในสาขาเคมีอาหาร โดยลำดับ .
ตรวจสอบพารามิเตอร์รายงานในแต่ละวิธีก็เป็นโต๊ะ

1เพราะน้ำไม่ระเหยและธรรมชาติของวิตามิน
C reversed-phase ( RP ) - เทคนิคที่พบมากที่สุดวิธีการ [ 7 – 9 ] ,
ถึงแม้ว่าการแลกเปลี่ยนไอออน , ไอออนคู่ไอออนการยกเว้นและน้ำ
ปฏิสัมพันธ์ liquid chromatography ( hilic ) นอกจากนี้ยังมีรายงาน
( ตารางที่ 1 ) วิธีโครมาโทกราฟีของเหลวสมรรถนะสูงพิเศษ ( uhplc )
เพิ่งถูกประยุกต์ใช้กับการวิเคราะห์ของวิตามินซีในอาหาร [ 20 ] ,
การสังเกตเป็นข้อได้เปรียบหลักของการวิเคราะห์ และเวลาสั้น
ลดลงอย่างมากเมื่อเปรียบเทียบกับวิธีวิเคราะห์ปริมาณตัวทำละลาย
.
pH ของเฟสเคลื่อนที่เป็นปกติปรับด้านล่างของ l-aa
pKa ( 4.17 ) เพื่อป้องกันของการย่อยสลาย ข้อมูลเพิ่มเติมเกี่ยวกับ
วิตามินซีการวิเคราะห์ที่มีอยู่ในรีวิวอื่น ๆ [ 7,9,71 ] .
l-aa แสดงการดูดซึมที่แข็งแกร่งในภูมิภาค
อัลตร้าไวโอเล็ต( 245 ) 270 nm ) ทำให้ค่าการดูดกลืนแสงยูวี ที่ได้รับความนิยมมากที่สุด 7,9,15 เทคนิคการตรวจจับ
[ ] ; อย่างไรก็ตาม , การดูดกลืนแสงนี้จะขออุปการะ
บน pH ( ตาราง S1 ) และด้านนี้จะต้องถ่ายลงในบัญชี
. น้อยกว่า , ตรวจจับการเรืองแสง ( FD ) และการตรวจสอบทางเคมีไฟฟ้า
( ECD ) ถูกใช้ [ 7 , 8 ] เช่นเดียวกับ
Mass Spectrometry ( MS ) 7,22,53,65,72 ) [ 74 ] ขีดจำกัดของการตรวจหา
( ล็อดส์ ) อยู่ระหว่าง 0.02 และ 0.08 กรัม / มิลลิลิตรสำหรับประเทศไทย ระหว่าง 1.2 × 10 − 3
10 g / ml สำหรับ UV และประมาณ 0.27 กรัม / มล.
ตรวจหาเรืองแสง ( ตารางที่ 1 ) โดยปกติ บก. จะอ่อนไหว
กว่า ยูวี แม้ว่าช่วงกว้างของล็อดส์ทำให้มันยากที่จะดำเนินการ
การเปรียบเทียบที่ถูกต้อง เรืองแสงก็อ่อนไหว
กว่า UV , แม้ว่ากับขั้นตอนที่จำเป็นทำให้
น่าเบื่อกว่า UV .
dhaa ในระดับต่ำของกลุ่มตัวอย่างส่วนใหญ่ difficultits การวิเคราะห์ด้วย HPLC
เครื่องตรวจจับ ดังนั้น dhaa มักจะลดลง
เพื่อ l-aabefore ของโครมาโทกราฟีแยก anditismeasuredas
ทา คือ ผลรวมของ l-aa และ dhaa เนื้อหา [ 7 , 8 ) ขั้นตอนนี้
ความต้องการสอง และวิ่ง และ dhaa จากนั้นคำนวณ
โดยการลบ l-aa จาก TAA [ 7 ] .
4วิธีการตรวจสอบ
เมื่อวิธีที่เหมาะ จะต้องตรวจสอบให้แน่ใจว่าความเหมาะสม

สำหรับโปรแกรมที่ต้องการ [ 2 , 3 ] หมายเลข
เอกสารแนะนำวิธีการตรวจสอบได้โดยองค์กรที่มีชื่อเสียงต่างๆออก

แนวทางระหว่างประเทศและการประชุม ที่อธิบายไว้ในที่ต่าง ๆ งานวิทยาศาสตร์ 1,4,5,75
[ ]ตัวอย่างของสมาคมเหล่านี้จะไม่ ( สมาคมนักเคมีวิเคราะห์อย่างเป็นทางการ
) , FDA ( องค์การอาหารและยา )
( องค์การอาหารและการเกษตรโลก / สุขภาพ ) eurachem (
เน้นเคมีวิเคราะห์ในยุโรป ) , I (
การประชุมระหว่างประเทศเกี่ยวกับการ ) , สหภาพระหว่างประเทศว่าด้วยเคมีบริสุทธิ์และ
เคมีประยุกต์ ) และคณะกรรมาธิการยุโรป , หมู่คนอื่น ๆ
[ 4,13,76 – 78 ]แต่น่าเสียดายที่ยังไม่มีแหล่งเดียวหรือแนวทางสุดท้าย
วิเคราะห์วิธีการตรวจสอบ [ 76,79 ] .
สำหรับการตรวจสอบเชิงปริมาณวิเคราะห์กระบวนการ มี
เป็นชุดขององค์ประกอบหลักที่ถูกยอมรับโดยทั่วไป : ของการเลือก
เส้นตรง , ความมั่นคง ความถูกต้อง ความแม่นยำ และขีดจำกัดของปริมาณ .
พารามิเตอร์เพิ่มเติม ซึ่งอาจจะรวมถึงการตรวจสอบที่เกี่ยวข้อง ,
โลดความแข็งแกร่งและความทนทาน [ 2,4,5 ] สำหรับวิธีการวิเคราะห์
ใช้ LC ( MS , การประเมินผล Matrix
ที่สุด ( ฉัน ) ควรเป็นส่วนหนึ่งของกระบวนการตรวจสอบ โดยวิธีพ่นละอองไฟฟ้า
ถ้าไอออไนเซชัน ( ESI ) ใช้ [ 5 ] มีรีวิวที่ครอบคลุมในรายละเอียดดี

นิยามที่แตกต่างกันสำหรับแต่ละการตรวจสอบพารามิเตอร์ [ 1,75 ] ดังนั้นรีวิวนี้จะมุ่งเน้นในพารามิเตอร์
ที่มักจะตรวจสอบในวิธีการหาปริมาณวิตามินซีในอาหารตัวอย่าง
.
การวิธีวิเคราะห์ที่เหมาะสมของการไม่เพียง แต่ต้องเป็น
อย่างเพียงพอ แต่ยังชัดเจนทุกชุมชนวิทยาศาสตร์ . ดังนั้น