Positive and negative DNA controls

Positive and negative DNA controls were included in all
conventional PCR assays. DNA from feed samples contaminated
with 0.2%, 0.5% and 1% MBM were analyzed to measure the
amplification efficiency of species-specific primers, Standard
PCR were carried out in an Applied Biosystem 9700 thermal
cycler. Reaction mix contained 10–50 ng of DNA, 1 U of Taq
Polymerase Platinum High Fidelity (Invitrogen, California USA),
1x Platinum High Fidelity buffer (200 mM Tris–HCl pH8.4,
500mMKCl), 0.2mMeach dNTPs, 1.5mMMgCl2, and 10 pmol
of each primer in a 20 μl final volume. The amplification profile
was: i) initial denaturation at 94 °Cfor 2min; ii) 30 cycles at 94 °C
for 10 s, annealing temperature and time according to species
(Table 1), extension: 72 °C for 15 s; iii) final extension at 72 °Cfor
2 min. Amplified products were tested by electrophoresis in a 2%
agarose gel and visualized by ethidium bromide staining

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

บวก และลบตัวควบคุม DNA รวมอยู่ในทั้งหมดassays PCR แบบเดิม ดีเอ็นเอจากตัวอย่างอาหารที่ปนเปื้อน0.2%, 0.5% และ 1% ความถูกนำมาวิเคราะห์เพื่อวัดการขยายประสิทธิภาพของไพรเมอร์ species-specific มาตรฐานPCR ได้ดำเนินในความร้อนใช้ 9700 Biosystemcycler ปฏิกิริยาผสมอยู่ 10 – 50 ng เอ็น 1 U ของ Taqพอลิเมอเรสแพลตตินั่มคุณภาพสูง (Invitrogen แคลิฟอร์เนียสหรัฐอเมริกา),1 x ความชัดสูงแพลทินัมบัฟเฟอร์ (200 mM ตรี – HCl pH8.4500mMKCl), 0.2mMeach dNTPs, 1.5mMMgCl2 และ 10 pmolแต่ละพื้นที่ในไดรฟ์ข้อมูลสุดท้าย 20 μl โพรไฟล์การขยายถูก: ฉัน) denaturation เริ่มต้นที่ 94 ° Cfor 2 นาที ii) 30 รอบที่ 94 ° Cสำหรับ 10 s หลอมอุณหภูมิ และเวลาตามสายพันธุ์(ตาราง 1), นามสกุล: 72 ° C 15 s iii) นามสกุลสุดท้ายที่ 72 ° Cforทดสอบ 2 นาทีผลิตภัณฑ์ Amplified โดย electrophoresis ใน 2%agarose เจ และ visualized โดยย้อมสีโบรไมด์ ethidium

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ควบคุมดีเอ็นเอบวกและลบที่ถูกรวมอยู่ใน
การตรวจ PCR แบบเดิม ดีเอ็นเอจากตัวอย่างอาหารที่ปนเปื้อน
กับ 0.2%, 0.5% และ 1% MBM วิเคราะห์การวัด
ประสิทธิภาพการขยายของไพรเมอร์สายพันธุ์เฉพาะมาตรฐาน
PCR ได้ดำเนินการในการประยุกต์ใช้ความร้อน Biosystem 9700
Cycler มีการผสมปฏิกิริยา 10-50 นาโนกรัมของดีเอ็นเอ 1 U ของ Taq
โพลิเมอร์ความจงรักภักดีสูงแพลทินัม (Invitrogen, California USA)
บัฟเฟอร์ 1x แพลทินัมไฮไฟ (200 มิลลิ Tris-HCl pH8.4,
500mMKCl) 0.2mMeach dNTPs, 1.5mMMgCl2, 10 pmol
ของไพรเมอร์ในแต่ละเล่มสุดท้าย 20 ไมโครลิตร รายละเอียดการขยาย
เป็น i) denaturation เริ่มต้นที่ 94 ° Cfor 2min; ii) 30 รอบที่ 94 องศาเซลเซียส
เป็นเวลา 10 วินาที, อุณหภูมิการหลอมและเวลาตามสายพันธุ์
(ตารางที่ 1) การขยาย: 72 ° C เป็นเวลา 15 วินาที; iii) การขยายสุดท้ายที่ 72 ° Cfor
2 นาที ขยายผลิตภัณฑ์ได้รับการทดสอบโดย electrophoresis ใน 2%
agarose เจลและมองเห็นโดยการย้อมสี ethidium bromide

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

บวกและลบอยู่ในดีเอ็นเอการควบคุมทั้งหมด
ปกติ PCR ) . ดีเอ็นเอจากตัวอย่างอาหารที่ปนเปื้อน
กับ 0.2% , 0.5% และ 1% MBM วิเคราะห์เพื่อวัดประสิทธิภาพของวิธีการขยายเผ่าพันธุ์ - เฉพาะ

ซึ่งเป็นมาตรฐาน พบว่าในการใช้ biosystem 9700 Thermal cycler
. ผสมปฏิกิริยาคือ 10 และ 50 กรัม ดีเอ็นเอ ของทัค
1 u โดยแพลทินัม ( Invitrogen ความจงรักภักดีสูง ,ประเทศสหรัฐอเมริกาแคลิฟอร์เนีย )
1 x แพลทินัมความจงรักภักดีสูงบัฟเฟอร์ ( 200 มม. นอกจากนี้ – ph8.4 HCL , 500mmkcl
) 0.2mmeach dntps 1.5mmmgcl2 , และ 10 pmol
ของแต่ละสีใน 20 μ L สุดท้ายเสียง โดยการเพิ่มโปรไฟล์
: i ) เริ่มต้นที่ 94 ° C เป็นเวลา 2min ( ; 2 ) 30 รอบที่ 94 ° C
10 S , การอบอุณหภูมิและเวลาตามสายพันธุ์
( ตารางที่ 1 ) นามสกุล : 72 ° C 15 s ; 3 ) ส่งเสริมสุดท้ายที่ 72 ° C เป็นเวลา
2 . ขยายผลิตภัณฑ์ ทดสอบโดยวิธีอิเล็กโทรโฟรีซีสในเจล ( 2 %
และภาพปรากฏการณ์ โดยคู่ bromide staining