Molecular analysisTotal DNA was ext

Molecular analysis
Total DNA was extracted from frozen tissue using E.Z.N.A. SP Plant DNA Kit (Omega Bio-Tek, Norcross, GA), and purified on columns following the manufacturer's protocol. Amplifications were carried out in a Perkin Elmer DNA thermal cycler (PE 9600). The optimal reaction for RAPD analysis was set using the following conditions: 25 µl volume containing 1× reaction buffer, 1 unit of Taq DNA polymerase (Promega), 2.5 mM magnesium chloride, 0.2 µM decamer primers, dNTPs mix 0.2 mM and 20 ng DNA. The amplification conditions were as follows: the first step at 95°C for 5 min., followed by 40 cycles of 1 min. at 94°C, 1 min. at 36°C and 2 min. at 72°C. The reaction was completed with a final run at 72°C for 8 min. We screened a total of 16 primers from Life Technologies. The amplification products were separated in 1.5% agarose gel with ethidium bromide in 0.5× TBE buffer. The banding patterns were visualised under UV light and acquired using a fluorimeter linked with a gel documentation system (GelDoc 2000). The bands were scored visually, and those of similar molecular size, scored for the same primer, were assumed to be homologous. Since RAPD markers are dominant it was assumed that each band was an independent locus with two alleles: presence or absence of the band. The reproducibility of the amplification products was tested twice for each sample and each primer.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิเคราะห์ระดับโมเลกุลดีเอ็นเอทั้งหมดถูกสกัดจากเนื้อเยื่อแช่แข็งที่ใช้ E.Z.N.A. SP พืชดีเอ็นเอชุด (โอเมก้าไบ-Tek, Norcross, GA), และบริสุทธิ์ในคอลัมน์ต่อไปนี้ของโพรโทคอล Amplifications ได้ดำเนินการที่ดีเอ็นเอของเอลเมอเพอร์ร้อน cycler (PE 9600) ปฏิกิริยาที่เหมาะสมที่สุดสำหรับอาร์เอพีดีวิเคราะห์ถูกตั้งค่าโดยใช้เงื่อนไขต่อไปนี้: 25 µl ไดรฟ์ข้อมูลที่มี 1 ในปฏิกิริยาบัฟเฟอร์ Taq DNA พอลิเมอเรส (Promega), 2.5 มม.แมกนีเซียมคลอไรด์ 0.2 µM decamer ไพรเมอร์ dNTPs 1 หน่วยผสม 0.2 mM และ 20 ng ดีเอ็นเอ ขยายเงื่อนไขมีดังนี้: ขั้นตอนแรกที่ 95° C สำหรับ 5 นาที ตาม ด้วยรอบ 40 ของ 1 นาทีที่ 94° C, 1 นาทีที่ 36° C และ 2 นาทีที่ 72 องศาเซลเซียส ปฏิกิริยาเสร็จสิ้นพร้อมใช้ที่ 72° C สำหรับ 8 นาทีสุดท้าย เราฉายจำนวนไพรเมอร์ 16 จากเทคโนโลยีชีวิต ผลิตภัณฑ์ขยายถูกคั่นใน 1.5% agarose เจล มีโบรไมด์ ethidium ในบัฟเฟอร์ TBE × 0.5 รูปแบบ banding มี visualised ภายใต้แสง UV และซื้อมาใช้ fluorimeter เชื่อมโยงกับระบบเอกสารเจล (GelDoc 2000) วงดนตรีที่มีคะแนนเห็น และของขนาดโมเลกุลใกล้เคียงกัน ทำประตูในพื้นเดียวกัน ถือเป็น homologous เนื่องจากเครื่องหมายอาร์เอพีดีเป็นหลัก จะถูกสมมติว่า แต่ละวงคือ โลกัสโพลเป็นอิสระ มี 2 alleles: หรือวงการ Reproducibility ขยายผลิตภัณฑ์ได้รับการทดสอบสองครั้งสำหรับแต่ละอย่างและแต่ละพื้น

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

การวิเคราะห์โมเลกุลรวมดีเอ็นเอที่สกัดจากเนื้อเยื่อแช่แข็งโดยใช้ EZNA SP พืชดีเอ็นเอ Kit (โอเมก้าไบโอเต็ก, แอตแลนตา, จอร์เจีย) และบริสุทธิ์ในคอลัมน์ต่อไปนี้โปรโตคอลของผู้ผลิต
เครื่องขยายเสียงได้ดำเนินการในดีเอ็นเอ Perkin Elmer Cycler ความร้อน (PE 9600) ปฏิกิริยาที่ดีที่สุดสำหรับการวิเคราะห์ดีเอ็นเอได้รับการตั้งค่าการใช้เงื่อนไขต่อไปนี้: ปริมาณ 25 ไมโครลิตรมี 1 ×บัฟเฟอร์ปฏิกิริยา 1 หน่วยดีเอ็นเอโพลิเมอร์ Taq (Promega) 2.5 มิลลิแมกนีเซียมคลอไรด์ 0.2 ไมครอนไพรเมอร์ decamer, dNTPs ผสม 0.2 มิลลิและ 20 ng ดีเอ็นเอ . เงื่อนไขการขยายมีดังนี้. ขั้นตอนแรกที่ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาทีตามด้วย 40 รอบ 1 นาที ที่ 94 องศาเซลเซียส 1 นาที ที่ 36 องศาเซลเซียสและ 2 นาที ที่ 72 ° C ปฏิกิริยาเสร็จสมบูรณ์ด้วยการวิ่งรอบสุดท้ายที่ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 8 นาที เราคัดเลือกทั้งหมด 16 จากไพรเมอร์ไลฟ์เทคโนโลยี ผลิตภัณฑ์เครื่องขยายเสียงถูกแยกออก 1.5% agarose เจลโบรไมด์ด้วย ethidium 0.5 ×บัฟเฟอร์ TBE รูปแบบแถบถูกมองเห็นภายใต้แสงยูวีและได้รับใช้ fluorimeter เชื่อมโยงกับระบบเอกสารเป็นเจล (GelDoc 2000) วงดนตรีที่ได้รับคะแนนสายตาและผู้ที่มีขนาดโมเลกุลที่คล้ายกันคะแนนสำหรับไพรเมอร์เดียวกันได้รับการสันนิษฐานว่าจะเป็นคล้ายคลึงกัน ตั้งแต่เครื่องหมายดีเอ็นเอเป็นที่โดดเด่นมันก็สันนิษฐานว่าแต่ละวงเป็นสถานที่ที่เป็นอิสระที่มีสองอัลลีล: มีหรือไม่มีของวงดนตรี การทำสำเนาของผลิตภัณฑ์ขยายได้รับการทดสอบครั้งที่สองสำหรับแต่ละตัวอย่างและแต่ละไพรเมอร์

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

รวมการวิเคราะห์โมเลกุลดีเอ็นเอจากเนื้อเยื่อแช่แข็งโดยใช้ชุดดีเอ็นเอ SP พืช e.z.n.a. ( โอเมก้า ไบโอเทค Norcross , GA ) และบริสุทธิ์ในคอลัมน์ตามขั้นตอนของผู้ผลิต amplifications เพอร์กินเอลเมอร์ถูกหามออกในดีเอ็นเอความร้อนรอบ ( PE 9600 ) ปฏิกิริยาที่เหมาะสมที่สุดคือการวิเคราะห์โดยใช้เงื่อนไขต่อไปนี้ : 25 µ L ปริมาณที่มีปฏิกิริยา 1 ×บัฟเฟอร์ ,1 หน่วยของดีเอ็นเอพอลิเมอเรส ทัค ( promega ) 2.5 มม. , แมกนีเซียมคลอไรด์ , 0.2 µ M decamer ไพรเมอร์ผสม 0.2 มม. และ 20 นาโนดีเอ็นเอ dntps . เงื่อนไขการขยายมีดังนี้ ขั้นตอนแรกที่ 95 องศา C เป็นเวลา 5 นาที ตามด้วย 40 รอบ 1 นาทีที่ 94 ° C , 1 นาทีที่ 36 ° C และ 2 นาทีที่ 72 ° C . ปฏิกิริยาแล้วเสร็จด้วยการวิ่งครั้งสุดท้ายที่ 72 ° C เป็นเวลา 8 นาทีเราคัดทั้งหมด 16 ชนิดจากเทคโนโลยีชีวิต ผลิตภัณฑ์แบบแยกกัน 1.5% เจลกับทิเดียมโบรไมด์ใน 0.5 ×ทีบีบัฟเฟอร์ ที่แถบแบบมองเห็นแสงยูวีและได้รับการ fluorimeter เชื่อมโยงกับระบบเอกสารเจล ( geldoc 2000 ) วงดนตรีที่ถูกยิงสายตา , และของที่คล้ายกันขนาดโมเลกุล , คะแนนสำหรับไพรเมอร์เหมือนกันสมมติให้ฟังก์ชัน . เนื่องจากเครื่องหมายอาร์เอพีดี โดด เด่น เป็นฝีมือแต่ละวงเป็นสถานที่อิสระกับสองอัลลีล : การแสดงตนหรือขาดของวง การตรวจสอบของผลิตภัณฑ์แบบทดสอบสองครั้งในแต่ละตัวอย่างและแต่ละ
รองพื้น