Staph. aureus and Sh. flexneri reached 107 CFU ml)1; the
level of growth of L. monocytogenes which reached
106 CFU ml)1 was slightly lower than those of the other four
pathogens. Multiplex PCR assay of the same contaminated
pork samples also showed positive PCR-amplified products
for the target pathogens. Consequently, the 24-h enrichment
allowed both assays to detect samples contaminated with
lower level (10–17 CFU g)1 sample) and higher level (1203–
1735 CFU g)1 sample) of target pathogens (Table 3). The
multiplex PCR developed in the present study was capable
of detecting all five pathogens simultaneously in the spiked
pork after 24-h enrichment.
Multiplex PCR and traditional culture method detection
of naturally contaminated samples
According to the results shown in Table 4, after 24-h
enrichment, a total of 20 samples, or 80%, tested positive
for one or more of these organisms by multiplex PCR
assay. Among the 25 naturally contaminated samples, 15,
4 and 13 samples, respectively, were positive for
Salm. Enteritidis, E. coli O157:H7 and Staph. aureus by
both methods. One sample was L. monocytogenes-positive
by multiplex PCR method, and two samples were positive
by the culture method. Two samples were Sh. flexneripositive
by the multiplex PCR method, and one sample
was positive by the culture method. Comparing the
results of two methods, beef sample number four was
found to be contaminated with L. monocytogenes by the
culture method, whereas this sample was found to be
negative for L. monocytogenes by multiplex PCR method.
Chicken sample number two was found to be contaminated
with Sh. flexneri by multiplex PCR method, whereas
this sample was demonstrated to be absent of Sh. flexneri
by traditional culture method. Despite some minor differences
occurred, the results from testing naturally contaminated
samples validated the feasibility of the multiplex
PCR assay combined with multipathogen enrichment for
detecting these target pathogens in food samples.
Discussion
Rapid and accurate methods for simultaneous identification
of foodborne pathogens are becoming more and
more important (Dı´az-Lo´ pez et al. 2011). Previously
reported methods of multiplex PCR usually assay only for
two or three pathogens. In the present study, a multiplex
PCR assay that used five pairs of primers was developed
to simultaneously detect Salm. Enteritidis, L. monocytogenes,
Staph. aureus, E. coli O157:H7 and Sh. flexneri. The
applications of this method in artificially contaminated
and naturally contaminated meat samples were also
verified. Therefore, the current multiplex PCR assay
เชื้อ aureus และดวลจุดโทษ flexneri ถึง 107 โคโลนี มล. ) 1;
ระดับของการเจริญเติบโตของลิตร monocytogenes ซึ่งถึง
106 โคโลนี มล. ) 1 ต่ำกว่าอีกสี่
เชื้อโรคเล็กน้อย ทดสอบ pcr หลายตัวอย่างที่ปนเปื้อน
หมูเดียวกันยังแสดงให้เห็น PCR-ขยายผลิตภัณฑ์บวก
เชื้อโรคเป้าหมาย ดังนั้นการตกแต่ง 24 ชั่วโมง
ได้รับอนุญาตทั้งการตรวจการตรวจสอบตัวอย่างที่ปนเปื้อนด้วย
ระดับต่ำ (10-17 โคโลนีกรัม) 1 ตัวอย่าง) และระดับที่สูงขึ้น (1203 -
1,735 โคโลนีกรัม) 1 ตัวอย่าง) ของเชื้อโรคเป้าหมาย (ตารางที่ 3)
multiplex PCR การพัฒนาในการศึกษาครั้งนี้มีความสามารถในการตรวจจับ
ทั้งห้าเชื้อโรคพร้อมกันในแหลม
หมูหลังจาก 24 ชั่วโมงการตกแต่ง.
multiplex PCR และการตรวจสอบวิธีการแบบดั้งเดิมวัฒนธรรม
ตัวอย่างที่ปนเปื้อนตามธรรมชาติ
ตามผลที่แสดงในตาราง 4หลังจาก 24 ชั่วโมง
ตกแต่งทั้งหมด 20 ตัวอย่างหรือ 80% ทดสอบบวก
สำหรับหนึ่งหรือมากกว่าของสิ่งมีชีวิตเหล่านี้โดยการ multiplex PCR
ทดสอบ หมู่ที่ 25 กลุ่มตัวอย่างที่ปนเปื้อนตามธรรมชาติ, 15,
4 และ 13 ตัวอย่างตามลำดับผลบวกต่อ
salm Enteritidis, E O157 coli: H7 และเชื้อ aureus โดย
วิธีการทั้งสอง เป็นตัวอย่างหนึ่งลิตร monocytogenes บวก
โดยวิธี PCR หลายและทั้งสองตัวอย่างเป็นบวก
โดยวิธีการเพาะเลี้ยง ทั้งสองตัวอย่างที่ดวลจุดโทษ flexneripositive
โดยวิธี PCR multiplex และเป็นหนึ่งตัวอย่าง
เป็นบวกโดยวิธีการเพาะเลี้ยง เปรียบเทียบ
ผลของการสองวิธีตัวอย่างเนื้อวัวจำนวนสี่ถูก
พบว่ามีการปนเปื้อนด้วยลิตร monocytogenes โดย
วิธีการเพาะเลี้ยงในขณะที่ตัวอย่างนี้พบว่าเป็น
เชิงลบสำหรับลิตร monocytogenes โดยวิธี PCR multiplex.
จำนวนตัวอย่างไก่สองถูกพบว่ามีการปนเปื้อนด้วย
ดวลจุดโทษ flexneri โดยวิธี PCR multiplex ขณะ
ตัวอย่างนี้แสดงให้เห็นจะขาดของดวลจุดโทษ flexneri
โดยวิธีการเพาะเลี้ยงแบบดั้งเดิม แม้จะมีความแตกต่างเล็กน้อยบาง
เกิดขึ้นผลที่ได้จากการทดสอบการปนเปื้อนตามธรรมชาติ
ตัวอย่างการตรวจสอบความเป็นไปได้ของการทดสอบ multiplex PCR
บวกกับการตกแต่ง multipathogen สำหรับ
การตรวจหาเชื้อโรคเป้าหมายเหล่านี้ในตัวอย่างอาหาร.
วิธีการสนทนาอย่างรวดเร็วและถูกต้องสำหรับการระบุพร้อมกัน
ของเชื้อโรคที่เกิดจากอาหารมีมากขึ้นและที่สำคัญมากขึ้น
(dı'az-Lo 'PEZ et al,. 2011) วิธีการก่อนหน้านี้
รายงานของ multiplex PCR มักจะวิเคราะห์การเฉพาะ
สองหรือสามเชื้อโรค ในการศึกษาปัจจุบัน multiplex PCR
ทดสอบที่ใช้ห้าคู่ไพรเมอร์ได้รับการพัฒนา
พร้อมกันตรวจสอบ salm Enteritidis ลิตร monocytogenes
เชื้อ aureus, E O157 coli: H7 และดวลจุดโทษ flexneri
การประยุกต์ใช้วิธีการนี้ในการปนเปื้อนเทียม
และตัวอย่างเนื้อสัตว์ที่ปนเปื้อนตามธรรมชาติได้รับการตรวจสอบยัง
ดังนั้นการวิเคราะห์ multiplex PCR ปัจจุบัน
การแปล กรุณารอสักครู่..
