Methods Based on Different Solubili

Methods Based on Different Solubility Characteristics

Proteins can be separated by exploiting differences in their solubility in aqueous solutions. The solubility of a protein molecule is determined by its amino acid sequence because this determines its size, shape, hydrophobicity and electrical charge. Proteins can be selectively precipitated or solubilized by altering the pH, ionic strength, dielectric constant or temperature of a solution. These separation techniques are the most simple to use when large quantities of sample are involved, because they are relatively quick, inexpensive and are not particularly influenced by other food components. They are often used as the first step in any separation procedure because the majority of the contaminating materials can be easily removed.

Salting out

Proteins are precipitated from aqueous solutions when the salt concentration exceeds a critical level, which is known as salting-out, because all the water is "bound" to the salts, and is therefore not available to hydrate the proteins. Ammonium sulfate [(NH4)2SO4] is commonly used because it has a high water-solubility, although other neutral salts may also be used, e.g., NaCl or KCl. Generally a two-step procedure is used to maximize the separation efficiency. In the first step, the salt is added at a concentration just below that necessary to precipitate out the protein of interest. The solution is then centrifuged to remove any proteins that are less soluble than the protein of interest. The salt concentration is then increased to a point just above that required to cause precipitation of the protein. This precipitates out the protein of interest (which can be separated by centrifugation), but leaves more soluble proteins in solution. The main problem with this method is that large concentrations of salt contaminate the solution, which must be removed before the protein can be resolubilzed, e.g., by dialysis or ultrafiltration.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตามลักษณะการละลายที่แตกต่างกันโปรตีนสามารถแบ่งออก โดย exploiting แตกต่างในการละลายในโซลูชั่นอควี ละลายของโมเลกุลโปรตีนจะถูกกำหนด โดยลำดับของกรดอะมิโนเนื่องจากนี้กำหนดขนาด รูปร่าง hydrophobicity ความประจุไฟฟ้า โปรตีนสามารถเลือกตกตะกอน หรือ solubilized โดยเปลี่ยนแปลงค่า pH, ionic แรง dielectric ค่าคง หรืออุณหภูมิของโซลูชัน เทคนิคการแยกสารเหล่านี้ได้อย่างสุดจะใช้ตัวอย่างจำนวนมากเกี่ยวข้อง เนื่องจากพวกเขาจะค่อนข้างรวดเร็ว ราคาไม่แพง และจะไม่โดยเฉพาะอย่างยิ่งผลมาจากส่วนประกอบอาหารอื่น ๆ มักใช้เป็นขั้นตอนแรกในกระบวนการแยกใด ๆ เนื่องจากส่วนใหญ่การผลิต contaminating ได้เอาออกมารีซอลทิงออกโปรตีนจะตกตะกอนจากโซลูชั่นอควีเมื่อความเข้มข้นเกลือเกินระดับ ซึ่งเป็นที่รู้จักเป็นมารีซอลทิงออก เนื่องจากน้ำทั้งหมดเป็น "กับ" เกลือ จึงไม่ว่าง hydrate โปรตีน แอมโมเนียซัลเฟต [(NH4) 2SO4] ใช้ทั่วไปเนื่องจากมี water-solubility สูง แต่ยังสามารถใช้เกลือเป็นกลางอื่น ๆ เช่น NaCl หรือ KCl ขั้นตอนสองขั้นตอนโดยทั่วไปจะใช้เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพในการแยก ขั้นแรก เพิ่มเกลือที่ความเข้มข้นเพียงด้านล่างที่จำเป็นเพื่อ precipitate ออกโปรตีนที่น่าสนใจ แล้วมี centrifuged โซลูชันการเอาโปรตีนใด ๆ ที่ละลายน้ำได้น้อยกว่าโปรตีนที่น่าสนใจ แล้วมีเพิ่มความเข้มข้นเกลือไปยังจุดที่เหนือที่ต้องทำให้เกิดฝนของโปรตีน นี้ precipitates ออกโปรตีนที่น่าสนใจ (ซึ่งยัง centrifugation), ได้จากโปรตีนที่ละลายน้ำได้มากขึ้นในโซลูชัน ปัญหาหลักของวิธีนี้คือ ที่ความเข้มข้นขนาดใหญ่เกลือปนเปื้อนโซลูชัน ซึ่งต้องเอาออกก่อนโปรตีนสามารถ resolubilzed เช่น โดยหน่วยหรือ ultrafiltration

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

วิธีการขึ้นอยู่กับลักษณะการละลายที่แตกต่างกันโปรตีนสามารถแยกจากกันโดยการใช้ประโยชน์จากความแตกต่างในการละลายของพวกเขาในการแก้ปัญหาน้ำ การละลายของโมเลกุลโปรตีนจะถูกกำหนดโดยลำดับกรดอะมิโนเพราะนี้จะกำหนดขนาดของรูปร่าง hydrophobicity และค่าไฟฟ้า โปรตีนสามารถเร่งการคัดเลือกหรือละลายโดยการเปลี่ยนแปลงค่า pH ความแข็งแรงอิออนอิเล็กทริกคงที่หรืออุณหภูมิของการแก้ปัญหา เทคนิคการแยกเหล่านี้เป็นที่ง่ายที่สุดที่จะใช้เมื่อปริมาณมากของกลุ่มตัวอย่างที่มีส่วนเกี่ยวข้องเพราะพวกเขามีความรวดเร็วราคาไม่แพงและจะไม่ได้รับอิทธิพลโดยเฉพาะอย่างยิ่งส่วนประกอบอาหารอื่น ๆ พวกเขามักจะใช้เป็นขั้นตอนแรกในขั้นตอนการแยกใด ๆ เพราะส่วนใหญ่ของวัสดุที่ปนเปื้อนที่สามารถถอดออกได้อย่างง่ายดาย. เกลือออกจากโปรตีนตกตะกอนจากสารละลายเมื่อความเข้มข้นของเกลือสูงกว่าระดับที่สำคัญซึ่งเป็นที่รู้จักกันเป็นเกลือออกเพราะน้ำคือ "ผูกพัน" เพื่อเกลือและดังนั้นจึงไม่สามารถให้ความชุ่มชื้นโปรตีน แอมโมเนียมซัลเฟต [(NH4) 2SO4] เป็นที่นิยมใช้เพราะมีสามารถในการละลายน้ำสูงแม้ว่าเกลือที่เป็นกลางอื่น ๆ อาจจะนำมาใช้เช่นโซเดียมคลอไรด์หรือโพแทสเซียมคลอไรด์ โดยทั่วไปขั้นตอนสองขั้นตอนจะใช้ในการเพิ่มประสิทธิภาพการแยก ในขั้นตอนแรกเกลือจะมีการเพิ่มความเข้มข้นเพียงด้านล่างที่จำเป็นในการตกตะกอนโปรตีนออกที่น่าสนใจ การแก้ปัญหาคือปั่นแล้วเอาโปรตีนที่ละลายน้ำได้น้อยกว่าโปรตีนที่น่าสนใจ ความเข้มข้นของเกลือจะเพิ่มขึ้นแล้วถึงจุดเหนือที่จำเป็นต้องที่จะทำให้เกิดการตกตะกอนของโปรตีน นี้ตกตะกอนโปรตีนออกที่น่าสนใจ (ซึ่งสามารถแยกจากกันโดยการหมุนเหวี่ยง) แต่โปรตีนที่ละลายออกมากขึ้นในการแก้ปัญหา ปัญหาหลักด้วยวิธีนี้คือการที่มีขนาดใหญ่ความเข้มข้นของเกลือปนเปื้อนในการแก้ปัญหาซึ่งจะต้องถูกลบออกก่อนที่จะมีโปรตีนที่สามารถ resolubilzed เช่นโดยการฟอกเลือดหรือกรอง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

โดยวิธีที่แตกต่างกันในลักษณะ

โปรตีนสามารถแยกออกจากกันโดยการใช้ประโยชน์จากความแตกต่างในการละลายในสารละลาย . การละลายของโมเลกุลโปรตีนจะถูกกำหนดโดยลำดับของกรดอะมิโน เพราะนี้จะกำหนดขนาดของรูปร่าง ความไม่ชอบ และประจุไฟฟ้า ตกตะกอนโปรตีนสามารถเลือกหรือสร้างโดยการเปลี่ยนแปลง pH , ความแรงของไอออนไดอิเล็กทริกคงที่หรืออุณหภูมิของสารละลาย วิธีการแยกนี่เป็นที่ง่ายที่สุดที่จะใช้เมื่อมีขนาดใหญ่ปริมาณของตัวอย่างที่เกี่ยวข้องเพราะพวกเขาจะค่อนข้างเร็ว ราคาไม่แพง และยังไม่ได้รับผลกระทบโดยเฉพาะส่วนประกอบของอาหารอื่น ๆพวกเขามักจะใช้เป็นขั้นตอนแรกในการแยกขั้นตอนเนื่องจากส่วนใหญ่ของวัสดุปนเปื้อนสามารถลบออกได้อย่างง่ายดาย .

เกลือออก

โปรตีนที่ตกตะกอนจากสารละลายเมื่อความเข้มข้นของเกลือสูงกว่าระดับวิกฤติ ซึ่งเป็นที่รู้จักกันเป็นเกลือออก เพราะน้ำทั้งหมดคือ " ผูกพัน " กับเกลือ และดังนั้นจึงไม่สามารถที่จะชุ่มชื้นโปรตีนแอมโมเนียม ซัลเฟต ( NH4 ) 2so4 ] ถูกใช้บ่อย เพราะมันละลายน้ำสูง แม้ว่าเกลือเป็นกลางอื่น ๆอาจจะใช้ เช่น เกลือโซเดียมหรือโพแทสเซียม . โดยทั่วไปกระบวนการสองขั้นตอน คือ การใช้เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพ ในขั้นตอนแรก เกลือที่เพิ่มความเข้มข้นเพียงด้านล่างที่ตกตะกอนออกมาเป็นโปรตีนที่สนใจ .โซลูชั่นเพื่อลบใด ๆแล้วระดับโปรตีนที่ละลายน้อยกว่าโปรตีนที่น่าสนใจ ความเข้มข้นเกลือและเพิ่มขึ้นถึงจุดข้างบน ที่ต้องทำให้เกิดการตกตะกอนของโปรตีน นี้ออกตะกอนโปรตีนที่สนใจ ( ซึ่งสามารถแยกออกได้โดยการเหวี่ยงแยก ) แต่ใบโปรตีนละลายในสารละลายปัญหาด้วยวิธีนี้คือที่ความเข้มข้นของเกลือปนเปื้อนขนาดใหญ่โซลูชั่นที่ต้องออกก่อนโปรตีนสามารถ resolubilzed เช่นโดยการล้างไต หรือกรอง .