- ข้อความ
- ประวัติศาสตร์
1. IntroductionAcrylamide is a subs
1. Introduction
Acrylamide is a substance commonly used in various industries
and is considered a genotoxin, neurotoxin and probable carcinogen
in humans (Bong-Kyung, 2006; Tareke, Rydberg, Karlsson, Eriksson,
& Törnqvist, 2002). Recently, researchers at the National Food
Administration of Sweden (NFA) and the University of Stockholm
reported that foods rich in carbohydrates generate significant
amounts of acrylamide when subjected to high temperatures
(Gökmen & Palazoglu, 2008; Masson et al., 2007). Since this substance
is harmful to health, having been classified in group 2A as “a
probable human carcinogen” by the International Agency for
Research on Cancer (IARC, 1994), its presence in foods is a cause for
great concern. Acrylamide is produced naturally in foods with a
high carbohydrate content and a low protein composition that,
when subjected to processes such as frying, baking or toasting,
generate this toxin mainly through the Maillard reaction (Mottram,
Wedzicha, & Dodson, 2002; Stadler et al., 2002; Taeymans &Wood,
2004; Taubert, Harlfinger, Henkes, Berkels, & Schömig, 2004). The
concentration of acrylamide can vary enormously in any one food
item, depending on factors such as temperature, cooking time, and
the amount of reducing sugars and free amino acids like asparagine
(Cheong, Hwang, & Hyong, 2005). Among the food types that may
present significant amounts of acrylamide are products derived
from cereals (cookies, bread and tostadas), coffee and, mainly, fried
potatoes (Granda, Moreira, & Tichy, 2004; Moreno, Armendáriz,
Gutiérrez, Fernández, & Torre, 2007; Takatsuki, Nemoto, Sasaki, &
Maitani, 2003). Up to 12, 000 mg/kg of acrylamide has been quantified
in fried potatoes (Friedman, 2003). The accepted levels of
acrylamide should not be higher than 0.5 mg/L in processes such as
water treatment (WHO, 2003) and not over 10 mg/kg in plastics
(European Commission, 1992).
Most of the research on this aspect is focused mainly on the
reduction of acrylamide in fried potatoes, since they are widely
consumed all over the world. The techniques currently applied to
achieve said reduction are based on the modification of frying
conditions (Granda et al., 2004), as well as the addition of other
compounds such as amino acids (Cheong et al., 2005), acids(Jung,Choi, & Ju, 2003; Kita, Brathen, Knutsen, & Wicklund, 2004), ions
(Mestdagh, De Wilde, Delporte, Van, & De Menulenaer, 2008) and
enzymes (Taeymans & Wood, 2004; Zyzak et al., 2003). However,
many of these methods affect their color, taste and texture. Recent
studies have reported a reduction of acrylamide levels through the
addition of plant extracts to food products. Becalski, Lau, Lewis, and
Seaman (2002) could decrease the amount of the toxin by adding
rosemary (Rosmarinus officinalis) to the oil used for frying potatoes.
Zhang, Chen, Zhang, Wu, and Zhang (2007) evaluated the effect of
an antioxidant extract from bamboo leaves on the formation of
acrylamide, achieving a decrease of 74% of the neurotoxin in fried
potatoes, whereas Zhang and Zhang (2007) obtained an 83%
reduction of acrylamide in bread by combining the extract from
bamboo leaves with green tea.
Plant extracts mainly contain phenolic compounds (Manzocco,
Anese, & Nicoli, 1998) such as flavonoids, cinnamic acids, coumarins,
phenolic acids, lignans and tannins, which all have antioxidant
activity and are probably responsible for decreasing toxin levels.
Many reports indicate that marjoram, thyme, cinnamon and
bougainvillea contain total phenolic compounds that confer antioxidant
activity (Shibamoto & Moon, 2009). Flowers of bougainvillea
exhibited the highest DPPH radical scavenging activity and
the major flavonoid found in flowers was quercetin and apigenin
(Kaisoon, Siramornpun, Weerapreeyakul, & Meeso, 2011). Therefore,
the objective of this study was to evaluate the reduction of
acrylamide in fried potatoes through their immersion in extracts
from diverse plants such as wild oregano, thyme, cinnamon,
bougainvillea and green tea.
2. Material and methods
2.1. Reagents
1,1-diphenyl-2-picrilhydrazil (DPPH), FolineCiocalteu reagent,
acrylamide (99%), L- ascorbic acid (>99.8%), gallic acid and L-glucose
were acquired from SigmaeAldrich (Mexico). All reagents and
solvents were of analytic grade.
2.2. Raw material
The dried plants used, wild oregano (Origanum vulgare), thyme
(Thymus vulgaris), cinnamon (Cinnamomum verum), bougainvillea
(Bougainvillea spp) and green tea (Camellia sinensis) belonging to
the trademarks Catarinos and La Merced, were purchased in a
local supermarket.
2.3. Preparation of extracts
Fifty grams of the each dry plant were homogenized using an
orbital shaker (MaxQ, Thermo Scientific, USA) at 200 rpm with
200 mL of distilled water at 60 C during 24 h then were filtered
with Whatman No.1 filter paper. The extracts were frozen with
liquid nitrogen and lyophilized, (being obtained, 1e2 g of powder)
(lyophilizer Labconco 4.5 L, Kansas, USA) for subsequent analysis.2.4. Analysis of antioxidant extracts
2.4.1. 1,1-Diphenyl-2-picrilhydrazil (DPPH)
The capacity for capturing free radicals was determined using
the radical 1,1-diphenyl-2-picrilhydrazil (DPPH) (Brand-Williams,
Cuvelier, & Berset, 1995). To 0.1 mL of a concentration of 1 mg/L
from the sample in methanol, 2.9 mL of the methanol solution of
DPPH (36 mg/mL) were added and the mixture was shaken vigorously.
The vials remained at ambient temperature for 30 min,
before measuring absorbance at 517 nm with a UVeVIS
spectrophotometer (Cary 100, Varian, Palo Alto, CA, USA). These
determinations were performed in duplicate.
2.4.2. Determination of total phenolic compounds
The quantification of total phenolic compounds with the Foline
Ciocalteau colorimetric reaction employed the method of Spanos
and Wrolstad (1990). To 50 mL of the sample (1 mg/mL dissolved
in distilled water), 2.5 mL of the FolineCiocalteu reagent (diluted 1/
10) and 2 mL of Na2CO3 (75% p/v) were added and the mixture
incubated at 45 C for 15 min. Absorbancewas measured at 765 nm
with a UVeVIS spectrophotometer (Cary 100, Varian, Palo Alto, CA,
USA), the final results being expressed as equivalent micrograms of
gallic acid per microgram of dry weight (mg EAG/mg dw) by interpolation
from the calibration curve with a range of 20e1000 mg/mL
of gallic acid (y ¼ 0.0011x þ 0.0688, R2 ¼ 0.9835).
2.4.3. Percentage of reducing power
The determination of the reducing power percentage was made
according to the method of Oyaizu (1986). To 0.125 mL of the
sample at a concentration of 1 mg/mL, 1.25 mL of phosphate buffer
(200 mM, pH 6.6) and 1.25 mL of potassium ferricyanide (1%) were
added. The mixture was incubated at 50 C for 20 min. Then,
1.25 mL of 10% trichloracetic acid was added to the mixture, which
was centrifuged at 650 g for 10 min. An aliquot of 2.5 mL was taken,
2.5 mL of distilled water and 0.5 mL of ferric chloride were added,
and the absorbance measured at 700 nm with a UVeVIS spectrophotometer
(Cary 100, Varian, Palo Alto, CA, USA). The results were
reported as the percentage of reducing power. Absorbance of
ascorbic acid at a concentration of 1 mg/mL was considered 100%
for reference.
2.5. Preparation and analysis of potatoes
2.5.1. Preparation of potatoes
In the experiment were used 10 kg of potato Solanum tuberosum
L. var. Atlantic obtained from the local market. The potatoes were
washed and disinfected. The bare was carried out with a peeler
friction and was removed black or green spots. Potatoes were cut
into slices approximately 1.5 0.2 mm thick, with a manual cutter.
After, samples were subjected to immersion treatment in antioxidant
extracts, then were fried and immediately after the antioxidant
and peroxide value were analyzed.
2.5.2. Quantification of total reducing sugars and pH in potatoes
The quantification of total reducing sugars was made through
the colorimetric method proposed by Somogyi and Norton (1952).
To quantify the reducing sugars in the extracts, their clarification
was first carried out. This was done by adding 1.0 mL of the extract
(1 g/L) to 0.9 mL of sub-acetate of lead, 1.5 m/L of saturated sodium
sulfate solution, 0.15 mL of glacial acetic acid, and 0.12 mL of zinc
acetate and potassium ferrocyanide. This mixture was centrifuged
for 5 min, and the reducing sugar content in the supernatant
determined by interpolation from the calibration curve of L-glucose
(10e100 mg/mL) (y ¼ 0.0082x þ 0.0649, R2 ¼ 0.9979). The pH
measurements were performed using a potentiometer according to
the method 943.02 (AOAC, 1998).
2.5.3. Extraction, identification and quantification of acrylamide
The extraction was performed with the technique proposed by
Biedermann et al. (2002). From the extract obtained, 2.0 ml of each
sample were injected in duplicate. A gas chromatograph (trademark
Hewlett-Packard, model 1800B, GCD System, Santa Clara, CA,
USA), equipped with a column CP-WAX 52CB (VARIAN)
(60 m 0.25 mm 0.25 mm), was used for the analysis. The initial
temperature of 80 C was maintained for 5 min and subsequently increased to 250 C using a heating ramp of 30 C/min. This temperature
was then maintained for15 min. Helium was used as the
carrier gas at a flow of 1 mL/min; the injector temperature was
250 C, with split less injection and a purging time of 1 min. The
mass spectra were obtained through ionization by electronic
impact (EI) at 70 eV. Data acquisition was accomplished in the SIM
mode, the monitored ions being m/z 71 and 44. Once the chromatograms
were obtained, identification was performed by
comparing the mass spectra obtained with the database HP
Chemstation-NIST 05 Mass Spectral search program, version 2.0d.
They were also compared with a standard for acrylamide analyzed
under the same conditions. For quantification, a calibration curve
with a range of 0.010e50 mg/mL (y ¼ 38465x þ 2751.4, R2 ¼ 0.9977)
was developed.
Acrylamide is a substance commonly used in various industries
and is considered a genotoxin, neurotoxin and probable carcinogen
in humans (Bong-Kyung, 2006; Tareke, Rydberg, Karlsson, Eriksson,
& Törnqvist, 2002). Recently, researchers at the National Food
Administration of Sweden (NFA) and the University of Stockholm
reported that foods rich in carbohydrates generate significant
amounts of acrylamide when subjected to high temperatures
(Gökmen & Palazoglu, 2008; Masson et al., 2007). Since this substance
is harmful to health, having been classified in group 2A as “a
probable human carcinogen” by the International Agency for
Research on Cancer (IARC, 1994), its presence in foods is a cause for
great concern. Acrylamide is produced naturally in foods with a
high carbohydrate content and a low protein composition that,
when subjected to processes such as frying, baking or toasting,
generate this toxin mainly through the Maillard reaction (Mottram,
Wedzicha, & Dodson, 2002; Stadler et al., 2002; Taeymans &Wood,
2004; Taubert, Harlfinger, Henkes, Berkels, & Schömig, 2004). The
concentration of acrylamide can vary enormously in any one food
item, depending on factors such as temperature, cooking time, and
the amount of reducing sugars and free amino acids like asparagine
(Cheong, Hwang, & Hyong, 2005). Among the food types that may
present significant amounts of acrylamide are products derived
from cereals (cookies, bread and tostadas), coffee and, mainly, fried
potatoes (Granda, Moreira, & Tichy, 2004; Moreno, Armendáriz,
Gutiérrez, Fernández, & Torre, 2007; Takatsuki, Nemoto, Sasaki, &
Maitani, 2003). Up to 12, 000 mg/kg of acrylamide has been quantified
in fried potatoes (Friedman, 2003). The accepted levels of
acrylamide should not be higher than 0.5 mg/L in processes such as
water treatment (WHO, 2003) and not over 10 mg/kg in plastics
(European Commission, 1992).
Most of the research on this aspect is focused mainly on the
reduction of acrylamide in fried potatoes, since they are widely
consumed all over the world. The techniques currently applied to
achieve said reduction are based on the modification of frying
conditions (Granda et al., 2004), as well as the addition of other
compounds such as amino acids (Cheong et al., 2005), acids(Jung,Choi, & Ju, 2003; Kita, Brathen, Knutsen, & Wicklund, 2004), ions
(Mestdagh, De Wilde, Delporte, Van, & De Menulenaer, 2008) and
enzymes (Taeymans & Wood, 2004; Zyzak et al., 2003). However,
many of these methods affect their color, taste and texture. Recent
studies have reported a reduction of acrylamide levels through the
addition of plant extracts to food products. Becalski, Lau, Lewis, and
Seaman (2002) could decrease the amount of the toxin by adding
rosemary (Rosmarinus officinalis) to the oil used for frying potatoes.
Zhang, Chen, Zhang, Wu, and Zhang (2007) evaluated the effect of
an antioxidant extract from bamboo leaves on the formation of
acrylamide, achieving a decrease of 74% of the neurotoxin in fried
potatoes, whereas Zhang and Zhang (2007) obtained an 83%
reduction of acrylamide in bread by combining the extract from
bamboo leaves with green tea.
Plant extracts mainly contain phenolic compounds (Manzocco,
Anese, & Nicoli, 1998) such as flavonoids, cinnamic acids, coumarins,
phenolic acids, lignans and tannins, which all have antioxidant
activity and are probably responsible for decreasing toxin levels.
Many reports indicate that marjoram, thyme, cinnamon and
bougainvillea contain total phenolic compounds that confer antioxidant
activity (Shibamoto & Moon, 2009). Flowers of bougainvillea
exhibited the highest DPPH radical scavenging activity and
the major flavonoid found in flowers was quercetin and apigenin
(Kaisoon, Siramornpun, Weerapreeyakul, & Meeso, 2011). Therefore,
the objective of this study was to evaluate the reduction of
acrylamide in fried potatoes through their immersion in extracts
from diverse plants such as wild oregano, thyme, cinnamon,
bougainvillea and green tea.
2. Material and methods
2.1. Reagents
1,1-diphenyl-2-picrilhydrazil (DPPH), FolineCiocalteu reagent,
acrylamide (99%), L- ascorbic acid (>99.8%), gallic acid and L-glucose
were acquired from SigmaeAldrich (Mexico). All reagents and
solvents were of analytic grade.
2.2. Raw material
The dried plants used, wild oregano (Origanum vulgare), thyme
(Thymus vulgaris), cinnamon (Cinnamomum verum), bougainvillea
(Bougainvillea spp) and green tea (Camellia sinensis) belonging to
the trademarks Catarinos and La Merced, were purchased in a
local supermarket.
2.3. Preparation of extracts
Fifty grams of the each dry plant were homogenized using an
orbital shaker (MaxQ, Thermo Scientific, USA) at 200 rpm with
200 mL of distilled water at 60 C during 24 h then were filtered
with Whatman No.1 filter paper. The extracts were frozen with
liquid nitrogen and lyophilized, (being obtained, 1e2 g of powder)
(lyophilizer Labconco 4.5 L, Kansas, USA) for subsequent analysis.2.4. Analysis of antioxidant extracts
2.4.1. 1,1-Diphenyl-2-picrilhydrazil (DPPH)
The capacity for capturing free radicals was determined using
the radical 1,1-diphenyl-2-picrilhydrazil (DPPH) (Brand-Williams,
Cuvelier, & Berset, 1995). To 0.1 mL of a concentration of 1 mg/L
from the sample in methanol, 2.9 mL of the methanol solution of
DPPH (36 mg/mL) were added and the mixture was shaken vigorously.
The vials remained at ambient temperature for 30 min,
before measuring absorbance at 517 nm with a UVeVIS
spectrophotometer (Cary 100, Varian, Palo Alto, CA, USA). These
determinations were performed in duplicate.
2.4.2. Determination of total phenolic compounds
The quantification of total phenolic compounds with the Foline
Ciocalteau colorimetric reaction employed the method of Spanos
and Wrolstad (1990). To 50 mL of the sample (1 mg/mL dissolved
in distilled water), 2.5 mL of the FolineCiocalteu reagent (diluted 1/
10) and 2 mL of Na2CO3 (75% p/v) were added and the mixture
incubated at 45 C for 15 min. Absorbancewas measured at 765 nm
with a UVeVIS spectrophotometer (Cary 100, Varian, Palo Alto, CA,
USA), the final results being expressed as equivalent micrograms of
gallic acid per microgram of dry weight (mg EAG/mg dw) by interpolation
from the calibration curve with a range of 20e1000 mg/mL
of gallic acid (y ¼ 0.0011x þ 0.0688, R2 ¼ 0.9835).
2.4.3. Percentage of reducing power
The determination of the reducing power percentage was made
according to the method of Oyaizu (1986). To 0.125 mL of the
sample at a concentration of 1 mg/mL, 1.25 mL of phosphate buffer
(200 mM, pH 6.6) and 1.25 mL of potassium ferricyanide (1%) were
added. The mixture was incubated at 50 C for 20 min. Then,
1.25 mL of 10% trichloracetic acid was added to the mixture, which
was centrifuged at 650 g for 10 min. An aliquot of 2.5 mL was taken,
2.5 mL of distilled water and 0.5 mL of ferric chloride were added,
and the absorbance measured at 700 nm with a UVeVIS spectrophotometer
(Cary 100, Varian, Palo Alto, CA, USA). The results were
reported as the percentage of reducing power. Absorbance of
ascorbic acid at a concentration of 1 mg/mL was considered 100%
for reference.
2.5. Preparation and analysis of potatoes
2.5.1. Preparation of potatoes
In the experiment were used 10 kg of potato Solanum tuberosum
L. var. Atlantic obtained from the local market. The potatoes were
washed and disinfected. The bare was carried out with a peeler
friction and was removed black or green spots. Potatoes were cut
into slices approximately 1.5 0.2 mm thick, with a manual cutter.
After, samples were subjected to immersion treatment in antioxidant
extracts, then were fried and immediately after the antioxidant
and peroxide value were analyzed.
2.5.2. Quantification of total reducing sugars and pH in potatoes
The quantification of total reducing sugars was made through
the colorimetric method proposed by Somogyi and Norton (1952).
To quantify the reducing sugars in the extracts, their clarification
was first carried out. This was done by adding 1.0 mL of the extract
(1 g/L) to 0.9 mL of sub-acetate of lead, 1.5 m/L of saturated sodium
sulfate solution, 0.15 mL of glacial acetic acid, and 0.12 mL of zinc
acetate and potassium ferrocyanide. This mixture was centrifuged
for 5 min, and the reducing sugar content in the supernatant
determined by interpolation from the calibration curve of L-glucose
(10e100 mg/mL) (y ¼ 0.0082x þ 0.0649, R2 ¼ 0.9979). The pH
measurements were performed using a potentiometer according to
the method 943.02 (AOAC, 1998).
2.5.3. Extraction, identification and quantification of acrylamide
The extraction was performed with the technique proposed by
Biedermann et al. (2002). From the extract obtained, 2.0 ml of each
sample were injected in duplicate. A gas chromatograph (trademark
Hewlett-Packard, model 1800B, GCD System, Santa Clara, CA,
USA), equipped with a column CP-WAX 52CB (VARIAN)
(60 m 0.25 mm 0.25 mm), was used for the analysis. The initial
temperature of 80 C was maintained for 5 min and subsequently increased to 250 C using a heating ramp of 30 C/min. This temperature
was then maintained for15 min. Helium was used as the
carrier gas at a flow of 1 mL/min; the injector temperature was
250 C, with split less injection and a purging time of 1 min. The
mass spectra were obtained through ionization by electronic
impact (EI) at 70 eV. Data acquisition was accomplished in the SIM
mode, the monitored ions being m/z 71 and 44. Once the chromatograms
were obtained, identification was performed by
comparing the mass spectra obtained with the database HP
Chemstation-NIST 05 Mass Spectral search program, version 2.0d.
They were also compared with a standard for acrylamide analyzed
under the same conditions. For quantification, a calibration curve
with a range of 0.010e50 mg/mL (y ¼ 38465x þ 2751.4, R2 ¼ 0.9977)
was developed.
0/5000
1. แนะนำ
อะคริลาไมด์เป็นสารที่ใช้ในอุตสาหกรรมต่าง ๆ
และถือเป็น genotoxin, neurotoxin และสารก่อมะเร็งดำรง
ในมนุษย์ (บอง-Kyung, 2006 Tareke ตัวริดเบิร์ก Karlsson วงการ เกม,
& Törnqvist, 2002) ล่าสุด นักวิจัยที่อาหารชาติ
ดูแลของสวีเดน (NFA) และมหาวิทยาลัยสตอกโฮล์ม
รายงานว่า อาหารที่อุดมไปด้วยคาร์โบไฮเดรตสร้างสำคัญ
ของอะคริลาไมด์เมื่ออยู่ภายใต้อุณหภูมิสูง
(Gökmen & Palazo glu, 2008 Masson et al., 2007) เนื่องจากสารนี้
เป็นอันตรายต่อสุขภาพ มีการจำแนกในกลุ่ม 2A เป็น "การ
น่าเป็นสารก่อมะเร็งที่มนุษย์" โดยตัวแทนนานาชาติ
วิจัยมะเร็ง (IARC, 1994), สถานะของตนในอาหารเป็นสาเหตุสำหรับ
กังวลมาก อะคริลาไมด์ถูกผลิตขึ้นตามธรรมชาติในอาหารกับการ
เนื้อหาคาร์โบไฮเดรตสูงและองค์ประกอบของโปรตีนต่ำที่,
เมื่อต้องการกระบวนการเช่นทอด อบ หรือ toasting,
สร้างพิษนี้ส่วนใหญ่ผ่านปฏิกิริยา Maillard (Mottram,
Wedzicha & Dodson, 2002 Stadler et al., 2002 Taeymans &Wood,
2004 Taubert, Harlfinger, Henkes, Berkels & Schömig, 2004) ใน
ความเข้มข้นของอะคริลาไมด์อาจแตกต่างกันไปในอาหารหนึ่ง
สินค้า ขึ้นอยู่กับปัจจัยต่าง ๆ เช่นอุณหภูมิ เวลา การทำอาหาร และ
ยอดลดน้ำตาลและกรดอะมิโนอิสระเช่น asparagine
(ชอง Hwang & Hyong, 2005) ระหว่างชนิดของอาหารที่อาจ
ยอดปัจจุบันสำคัญของอะคริลาไมด์เป็นผลิตภัณฑ์ที่ได้มา
จากธัญญาหารกาแฟ (คุกกี้ ขนมปัง และ tostadas), และ ส่วนใหญ่ ทอด
มันฝรั่ง (คาแกรนดา Moreira & Tichy, 2004 Moreno, Armendáriz,
Gutiérrez, Fernández &ทอร์เร คา 2007 ซะซะกิทาคาซึกิ Nemoto &
Maitani, 2003) ถึง 12, 000 mg/kg ของอะคริลาไมด์ได้ถูก quantified
ในมันฝรั่งทอด (ฟรีดแมน 2003) ในระดับที่ยอมรับของ
อะคริลาไมด์ไม่ควรมากกว่า 0.5 mg/L ในกระบวนการเช่น
น้ำรักษาผู้ 2003) และไม่ เกิน 10 mg/kg ในพลาสติก
(ซี 1992) .
ส่วนใหญ่ของการวิจัยในด้านนี้จะเน้นส่วนใหญ่ในการ
ลดของอะคริลาไมด์ในมันฝรั่งทอด เนื่องจากพวกเขามีกันอย่างแพร่หลาย
ใช้ทั่วโลก เทคนิคที่ใช้ในปัจจุบัน
บรรลุว่า ลดขึ้นอยู่กับการเปลี่ยนแปลงของทอด
เงื่อนไข (คาแกรนดาร้อยเอ็ด al., 2004), ตลอดจนการเพิ่มอื่น ๆ
สารเช่นกรดอะมิโน (ชอง et al., 2005), กรด (Jung, Choi &จู 2003 คิตะ Brathen, Knutsen & Wicklund, 2004), กัน
(Mestdagh เดอไวลด์ Delporte รถ ตู้ & De Menulenaer, 2008) และ
เอนไซม์ (Taeymans &ไม้ 2004 Zyzak และ al., 2003) อย่างไรก็ตาม,
หลายวิธีเหล่านี้มีผลต่อสีของพวกเขา รสชาติ และเนื้อสัมผัสนั้น ล่าสุด
ศึกษาได้รายงานการลดลงของอะคริลาไมด์ระดับผ่านการ
แห่งพืชสารสกัดจากผลิตภัณฑ์อาหาร Becalski, Lau ลูอิส และ
ซีแมน (2002) สามารถลดจำนวนสารพิษเพิ่ม
โรสแมรี่ (Rosmarinus officinalis) ให้น้ำมันที่ใช้ทอดมันฝรั่งได้
จาง เฉิน จาง อู่ และเตียว (2007) ประเมินผลของ
ต้านอนุมูลอิสระที่สกัดจากใบไผ่ในการก่อตัวของ
อะคริลาไมด์ บรรลุเป้าหมายลดลง 74% ของ neurotoxin ในทอด
มันฝรั่ง ในขณะที่เตียวและเตียว (2007) ได้รับการ 83%
ลดของอะคริลาไมด์ในขนมปังโดยการรวมสารสกัดจาก
ใบไผ่กับชาเขียว
สารสกัดจากพืชส่วนใหญ่ประกอบด้วยสารประกอบฟีนอ (Manzocco,
Anese & Nicoli, 1998) flavonoids กรดทรานส์-ซินนามิก coumarins,
กรดฟีนอ lignans และ tannins ซึ่งทั้งหมดที่มีสารต้านอนุมูลอิสระ
กิจกรรมและไม่รับผิดชอบอาจจะลดระดับสารพิษ.
รายงานหลายฉบับบ่งชี้ว่า marjoram, thyme อบเชย และ
รวมม่อฮ่อมที่ประสาทสารต้านอนุมูลอิสระประกอบด้วยเฟื่องฟ้า
กิจกรรม (Shibamoto &มูน 2009) ดอกไม้ของเฟื่องฟ้า
สูง DPPH รุนแรง scavenging กิจกรรมจัดแสดง และ
flavonoid สำคัญที่พบในดอกไม้ quercetin และ apigenin
(Kaisoon, Siramornpun, Weerapreeyakul & Meeso, 2011) ดังนั้น,
วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้เป็นการ ประเมินการลดของ
อะคริลาไมด์ในมันฝรั่งทอดผ่านการแช่ในสารสกัด
จากพืชหลากหลายเช่นป่าหอม thyme อบเชย,
เฟื่องฟ้าและชาเขียว
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 Reagents
1, 1-ฟีนิลได-2-picrilhydrazil (DPPH), รีเอเจนต์ FolineCiocalteu,
อะคริลาไมด์ (99%), L - กรดแอสคอร์บิค (> 99.8%), กรด gallic และกลูโคส L
ได้มาจาก SigmaeAldrich (เม็กซิโก) Reagents ทั้งหมด และ
หรือสารทำละลายได้ของคู่เกรด
2.2 ดิบ
ที่ใช้พืชแห้ง ป่าออริกาโน (Origanum vulgare), thyme
(Thymus vulgaris) อบเชย (Cinnamomum verum),
(Bougainvillea spp) เฟื่องฟ้า และชาเขียว (Camellia sinensis) ของ
เครื่องหมายการค้า Catarinos และลาเมอร์ ซื้อในการ
ซูเปอร์มาร์เก็ตท้องถิ่น.
2.3 การเตรียมสารสกัดจาก
50 กรัมในแต่ละพืชแห้งถูก homogenized เป็นกลุ่มโดยใช้การ
โคจรเชคเกอร์ (MaxQ เทอร์โมวิทยาศาสตร์ สหรัฐอเมริกา) ที่ 200 รอบต่อนาทีกับ
200 mL ของน้ำกลั่นที่ 60 C ใน 24 h แล้วถูกกรอง
ด้วยกระดาษกรอง Whatman No.1 สารสกัดถูกแช่แข็งด้วย
ไนโตรเจนเหลว และ lyophilized, (การรับ 1e2 g ผง)
(ใน lyophilizer ที่ Labconco 4.5 L แคนซัส สหรัฐอเมริกา) สำหรับ analysis.2.4 ตามมา วิเคราะห์สารต้านอนุมูลอิสระสารสกัดจาก
2.4.1 1.1 ฟีนิลได-2-picrilhydrazil (DPPH)
กำหนดกำลังการผลิตสำหรับการจับอนุมูลอิสระโดยใช้
รุนแรง 1.1 ฟีนิลได-2-picrilhydrazil (DPPH) (แบรนด์วิลเลียมส์,
Cuvelier & Berset, 1995) ไป 0.1 mL ของเข้มข้น 1 mg/L
จากในเมทานอล 29 mL ของเมทานอลโซลูชั่นของ
เพิ่ม DPPH (36 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร) และมีเขย่าผสมโยคะ
vials ยังคงอยู่ในอุณหภูมิใน 30 นาที,
ก่อนวัด absorbance ที่ 517 nm มีการ UVeVIS
เครื่องทดสอบกรดด่าง (แครีแกรนต์ 100 แล้วแต่กำหนด ดัลลัส CA, USA) เหล่านี้
determinations ดำเนินในซ้ำ
2.4.2 กำหนดรวมม่อฮ่อม
นับม่อฮ่อมรวมกับ Foline
Ciocalteau ปฏิกิริยาเหมือนจ้างวิธีการ Spanos
Wrolstad (1990) และการ ไป 50 มล.ของตัวอย่าง (1 mg/mL ส่วนยุบ
ในกลั่นน้ำ), 2.5 mL ของรีเอเจนต์ FolineCiocalteu (ผสม 1 /
10) และ 2 mL ของ Na2CO3 (p 75% v) เพิ่ม และส่วนผสม
incubated ที่ C 45 สำหรับ 15 นาที Absorbancewas วัดที่ 765 nm
ด้วยเครื่องทดสอบกรดด่าง UVeVIS (แครีแกรนต์ 100 แล้วแต่กำหนด ดัลลัส CA,
สหรัฐอเมริกา), ผลสุดท้ายที่ถูกแสดงเป็น micrograms เทียบเท่าของ
กรด gallic ต่อ microgram ของน้ำหนักแห้ง (mg dw EAG/มิลลิกรัม) โดยสอดแทรก
จากโค้งเทียบกับ 20e1000 mg/mL
ของกรด gallic (y ¼ 0.0011 x þ 0.0688, R2 ¼ 0.9835) .
2.4.3 เปอร์เซ็นต์การลดพลังงาน
ทำการกำหนดเปอร์เซ็นต์พลังงานลดลง
ตามวิธีของ Oyaizu (1986) การมล 0.125 ของ
ชิ้นงานตัวอย่างที่เข้มข้น 1 mg/mL, 1.25 mL ฟอสเฟตบัฟเฟอร์
(200 mM, pH 6.6) และ 1.25 mL ของโพแทสเซียม ferricyanide (1%)
เพิ่ม ส่วนผสมคือ incubated ที่ C 50 สำหรับ 20 นาที แล้ว,
1.25 mL ของกรด trichloracetic 10% เพิ่มการผสม การ
ถูก centrifuged ที่ g 650 สำหรับ 10 นาที ดำเนินการเป็นส่วนลงตัวของ 2.5 mL,
2.5 mL ของน้ำกลั่นและ 0.5 mL ของคคลอไรด์เพิ่ม,
และวัด absorbance ที่ 700 nm ด้วยเครื่องทดสอบกรดด่าง UVeVIS
(แครีแกรนต์ 100 แล้วแต่กำหนด ดัลลัส CA, USA) ก็
รายงานเป็นเปอร์เซ็นต์ของพลังงานที่ลดลง Absorbance ของ
กรดแอสคอร์บิคที่เข้มข้น 1 mg/mL ถือเป็น 100%
สำหรับอ้างอิง
2.5 เตรียมการและการวิเคราะห์ของมันฝรั่ง
2.5.1 การ การเตรียมการของมันฝรั่ง
ในทดลองใช้ 10 กก.ของมันฝรั่ง Solanum tuberosum
แอตแลนติกเพียง L. ที่ได้รับจากตลาดท้องถิ่น มันฝรั่งถูก
ล้าง และฆ่าเชื้อ เปลือยถูกดำเนินการ ด้วยมีดปอกเปลือกที่
แรงเสียดทาน และมีจุดสีดำ หรือสีเขียวเอาไว้ มันถูกตัด
เป็นชิ้นประมาณ 1.5 0.2 มม.หนา ด้วยตัวเองตัด
หลังจาก ตัวอย่างถูกต้องเพื่อรักษาแช่ในสารต้านอนุมูลอิสระ
สารสกัด แล้วก็ทอด และทันทีหลัง จากที่สารต้านอนุมูลอิสระ
และค่าเปอร์ออกไซด์ถูกวิเคราะห์
2.5.2 นับรวมน้ำตาลที่ลดลงและค่า pH ในมันฝรั่ง
นับรวมลดน้ำตาลที่ทำผ่าน
เสนอวิธีการวัดสี โดย Somogyi และ Norton (1952) .
วัดปริมาณน้ำตาลลดลงในสารสกัดจาก การชี้แจง
ครั้งแรกทำออกมา นี้ทำ โดยการเพิ่ม 1.0 mL ของสารสกัด
(1 g/L) กับ 0.9 mL ของ acetate ย่อยของเป้าหมาย 1.5 m/L อิ่มตัวโซเดียม
ซัลเฟตโซลูชัน 0.15 mL ของกรดน้ำส้มน้ำแข็ง และ 0.12 mL ของสังกะสี
ferrocyanide acetate และโพแทสเซียม ส่วนผสมนี้ถูก centrifuged
สำหรับ 5 นาที และการลดเนื้อหาใน supernatant น้ำตาล
ตามแทรกแทรงจากโค้งเทียบของกลูโคส L
(10e100 mg/mL) (y ¼ 0.0082 x þ 0.0649, R2 ¼ 0.9979) PH
วัดได้ดำเนินการโดยใช้มิเตอร์ตาม
วิธี 943.02 (AOAC, 1998) .
2.5.3 การ สกัด รหัส และนับของอะคริลาไมด์
ทำการสกัด ด้วยเทคนิคที่นำเสนอโดย
Biedermann et al. (2002) จากสารสกัดได้รับ 2.0 ml แต่ละ
อย่างถูกฉีดในซ้ำ Chromatograph ก๊าซ (เครื่องหมายการค้า
Hewlett-Packard รุ่น 1800B, GCD ระบบ ซานตาคลารา CA,
สหรัฐอเมริกา), พร้อม 52CB คอลัมน์ CP-ขี้ผึ้ง (แล้วแต่กำหนด)
(60 m 0.25 mm 0.25 mm), ใช้สำหรับการวิเคราะห์ ต้น
อุณหภูมิ 80 C รักษาใน 5 นาที และในเวลาต่อมาเพิ่มขึ้นถึง 250 C ใช้ทางลาดความร้อน 30 C/นาที อุณหภูมินี้
ถูก แล้ว for15 ยังคงอยู่นาทีฮีเลียมถูกใช้เป็น
ผู้ขนส่งก๊าซที่ไหล 1 มิลลิลิตร/นาที อุณหภูมิอัด
C 250 กับแยกน้อยกว่าการฉีดและเวลา purging 1 นาที ใน
แรมสเป็คตราโดยรวมได้รับผ่าน ionization โดยอิเล็กทรอนิกส์
ผล (EI) ที่ 70 eV ข้อมูลการได้สำเร็จใน SIM
โหมด ประจุตรวจสอบกำลัง m/z 71 และ 44 เมื่อ chromatograms
ได้รับ รหัสถูกดำเนินการโดย
แรมสเป็คตรามวลเปรียบเทียบได้กับฐานข้อมูล HP
โปรแกรมค้นหา Chemstation NIST 05 มวลสเปกตรัม รุ่น 2.0 d.
พวกเขายังถูกเปรียบเทียบกับมาตรฐานสำหรับอะคริลาไมด์ในการวิเคราะห์
ภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน การนับ เส้นโค้งเทียบ
กับ 0.010e50 mg/mL (y ¼ 38465 x þ 2751.4, R2 ¼ 0.9977)
ได้รับการพัฒนา
อะคริลาไมด์เป็นสารที่ใช้ในอุตสาหกรรมต่าง ๆ
และถือเป็น genotoxin, neurotoxin และสารก่อมะเร็งดำรง
ในมนุษย์ (บอง-Kyung, 2006 Tareke ตัวริดเบิร์ก Karlsson วงการ เกม,
& Törnqvist, 2002) ล่าสุด นักวิจัยที่อาหารชาติ
ดูแลของสวีเดน (NFA) และมหาวิทยาลัยสตอกโฮล์ม
รายงานว่า อาหารที่อุดมไปด้วยคาร์โบไฮเดรตสร้างสำคัญ
ของอะคริลาไมด์เมื่ออยู่ภายใต้อุณหภูมิสูง
(Gökmen & Palazo glu, 2008 Masson et al., 2007) เนื่องจากสารนี้
เป็นอันตรายต่อสุขภาพ มีการจำแนกในกลุ่ม 2A เป็น "การ
น่าเป็นสารก่อมะเร็งที่มนุษย์" โดยตัวแทนนานาชาติ
วิจัยมะเร็ง (IARC, 1994), สถานะของตนในอาหารเป็นสาเหตุสำหรับ
กังวลมาก อะคริลาไมด์ถูกผลิตขึ้นตามธรรมชาติในอาหารกับการ
เนื้อหาคาร์โบไฮเดรตสูงและองค์ประกอบของโปรตีนต่ำที่,
เมื่อต้องการกระบวนการเช่นทอด อบ หรือ toasting,
สร้างพิษนี้ส่วนใหญ่ผ่านปฏิกิริยา Maillard (Mottram,
Wedzicha & Dodson, 2002 Stadler et al., 2002 Taeymans &Wood,
2004 Taubert, Harlfinger, Henkes, Berkels & Schömig, 2004) ใน
ความเข้มข้นของอะคริลาไมด์อาจแตกต่างกันไปในอาหารหนึ่ง
สินค้า ขึ้นอยู่กับปัจจัยต่าง ๆ เช่นอุณหภูมิ เวลา การทำอาหาร และ
ยอดลดน้ำตาลและกรดอะมิโนอิสระเช่น asparagine
(ชอง Hwang & Hyong, 2005) ระหว่างชนิดของอาหารที่อาจ
ยอดปัจจุบันสำคัญของอะคริลาไมด์เป็นผลิตภัณฑ์ที่ได้มา
จากธัญญาหารกาแฟ (คุกกี้ ขนมปัง และ tostadas), และ ส่วนใหญ่ ทอด
มันฝรั่ง (คาแกรนดา Moreira & Tichy, 2004 Moreno, Armendáriz,
Gutiérrez, Fernández &ทอร์เร คา 2007 ซะซะกิทาคาซึกิ Nemoto &
Maitani, 2003) ถึง 12, 000 mg/kg ของอะคริลาไมด์ได้ถูก quantified
ในมันฝรั่งทอด (ฟรีดแมน 2003) ในระดับที่ยอมรับของ
อะคริลาไมด์ไม่ควรมากกว่า 0.5 mg/L ในกระบวนการเช่น
น้ำรักษาผู้ 2003) และไม่ เกิน 10 mg/kg ในพลาสติก
(ซี 1992) .
ส่วนใหญ่ของการวิจัยในด้านนี้จะเน้นส่วนใหญ่ในการ
ลดของอะคริลาไมด์ในมันฝรั่งทอด เนื่องจากพวกเขามีกันอย่างแพร่หลาย
ใช้ทั่วโลก เทคนิคที่ใช้ในปัจจุบัน
บรรลุว่า ลดขึ้นอยู่กับการเปลี่ยนแปลงของทอด
เงื่อนไข (คาแกรนดาร้อยเอ็ด al., 2004), ตลอดจนการเพิ่มอื่น ๆ
สารเช่นกรดอะมิโน (ชอง et al., 2005), กรด (Jung, Choi &จู 2003 คิตะ Brathen, Knutsen & Wicklund, 2004), กัน
(Mestdagh เดอไวลด์ Delporte รถ ตู้ & De Menulenaer, 2008) และ
เอนไซม์ (Taeymans &ไม้ 2004 Zyzak และ al., 2003) อย่างไรก็ตาม,
หลายวิธีเหล่านี้มีผลต่อสีของพวกเขา รสชาติ และเนื้อสัมผัสนั้น ล่าสุด
ศึกษาได้รายงานการลดลงของอะคริลาไมด์ระดับผ่านการ
แห่งพืชสารสกัดจากผลิตภัณฑ์อาหาร Becalski, Lau ลูอิส และ
ซีแมน (2002) สามารถลดจำนวนสารพิษเพิ่ม
โรสแมรี่ (Rosmarinus officinalis) ให้น้ำมันที่ใช้ทอดมันฝรั่งได้
จาง เฉิน จาง อู่ และเตียว (2007) ประเมินผลของ
ต้านอนุมูลอิสระที่สกัดจากใบไผ่ในการก่อตัวของ
อะคริลาไมด์ บรรลุเป้าหมายลดลง 74% ของ neurotoxin ในทอด
มันฝรั่ง ในขณะที่เตียวและเตียว (2007) ได้รับการ 83%
ลดของอะคริลาไมด์ในขนมปังโดยการรวมสารสกัดจาก
ใบไผ่กับชาเขียว
สารสกัดจากพืชส่วนใหญ่ประกอบด้วยสารประกอบฟีนอ (Manzocco,
Anese & Nicoli, 1998) flavonoids กรดทรานส์-ซินนามิก coumarins,
กรดฟีนอ lignans และ tannins ซึ่งทั้งหมดที่มีสารต้านอนุมูลอิสระ
กิจกรรมและไม่รับผิดชอบอาจจะลดระดับสารพิษ.
รายงานหลายฉบับบ่งชี้ว่า marjoram, thyme อบเชย และ
รวมม่อฮ่อมที่ประสาทสารต้านอนุมูลอิสระประกอบด้วยเฟื่องฟ้า
กิจกรรม (Shibamoto &มูน 2009) ดอกไม้ของเฟื่องฟ้า
สูง DPPH รุนแรง scavenging กิจกรรมจัดแสดง และ
flavonoid สำคัญที่พบในดอกไม้ quercetin และ apigenin
(Kaisoon, Siramornpun, Weerapreeyakul & Meeso, 2011) ดังนั้น,
วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้เป็นการ ประเมินการลดของ
อะคริลาไมด์ในมันฝรั่งทอดผ่านการแช่ในสารสกัด
จากพืชหลากหลายเช่นป่าหอม thyme อบเชย,
เฟื่องฟ้าและชาเขียว
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 Reagents
1, 1-ฟีนิลได-2-picrilhydrazil (DPPH), รีเอเจนต์ FolineCiocalteu,
อะคริลาไมด์ (99%), L - กรดแอสคอร์บิค (> 99.8%), กรด gallic และกลูโคส L
ได้มาจาก SigmaeAldrich (เม็กซิโก) Reagents ทั้งหมด และ
หรือสารทำละลายได้ของคู่เกรด
2.2 ดิบ
ที่ใช้พืชแห้ง ป่าออริกาโน (Origanum vulgare), thyme
(Thymus vulgaris) อบเชย (Cinnamomum verum),
(Bougainvillea spp) เฟื่องฟ้า และชาเขียว (Camellia sinensis) ของ
เครื่องหมายการค้า Catarinos และลาเมอร์ ซื้อในการ
ซูเปอร์มาร์เก็ตท้องถิ่น.
2.3 การเตรียมสารสกัดจาก
50 กรัมในแต่ละพืชแห้งถูก homogenized เป็นกลุ่มโดยใช้การ
โคจรเชคเกอร์ (MaxQ เทอร์โมวิทยาศาสตร์ สหรัฐอเมริกา) ที่ 200 รอบต่อนาทีกับ
200 mL ของน้ำกลั่นที่ 60 C ใน 24 h แล้วถูกกรอง
ด้วยกระดาษกรอง Whatman No.1 สารสกัดถูกแช่แข็งด้วย
ไนโตรเจนเหลว และ lyophilized, (การรับ 1e2 g ผง)
(ใน lyophilizer ที่ Labconco 4.5 L แคนซัส สหรัฐอเมริกา) สำหรับ analysis.2.4 ตามมา วิเคราะห์สารต้านอนุมูลอิสระสารสกัดจาก
2.4.1 1.1 ฟีนิลได-2-picrilhydrazil (DPPH)
กำหนดกำลังการผลิตสำหรับการจับอนุมูลอิสระโดยใช้
รุนแรง 1.1 ฟีนิลได-2-picrilhydrazil (DPPH) (แบรนด์วิลเลียมส์,
Cuvelier & Berset, 1995) ไป 0.1 mL ของเข้มข้น 1 mg/L
จากในเมทานอล 29 mL ของเมทานอลโซลูชั่นของ
เพิ่ม DPPH (36 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร) และมีเขย่าผสมโยคะ
vials ยังคงอยู่ในอุณหภูมิใน 30 นาที,
ก่อนวัด absorbance ที่ 517 nm มีการ UVeVIS
เครื่องทดสอบกรดด่าง (แครีแกรนต์ 100 แล้วแต่กำหนด ดัลลัส CA, USA) เหล่านี้
determinations ดำเนินในซ้ำ
2.4.2 กำหนดรวมม่อฮ่อม
นับม่อฮ่อมรวมกับ Foline
Ciocalteau ปฏิกิริยาเหมือนจ้างวิธีการ Spanos
Wrolstad (1990) และการ ไป 50 มล.ของตัวอย่าง (1 mg/mL ส่วนยุบ
ในกลั่นน้ำ), 2.5 mL ของรีเอเจนต์ FolineCiocalteu (ผสม 1 /
10) และ 2 mL ของ Na2CO3 (p 75% v) เพิ่ม และส่วนผสม
incubated ที่ C 45 สำหรับ 15 นาที Absorbancewas วัดที่ 765 nm
ด้วยเครื่องทดสอบกรดด่าง UVeVIS (แครีแกรนต์ 100 แล้วแต่กำหนด ดัลลัส CA,
สหรัฐอเมริกา), ผลสุดท้ายที่ถูกแสดงเป็น micrograms เทียบเท่าของ
กรด gallic ต่อ microgram ของน้ำหนักแห้ง (mg dw EAG/มิลลิกรัม) โดยสอดแทรก
จากโค้งเทียบกับ 20e1000 mg/mL
ของกรด gallic (y ¼ 0.0011 x þ 0.0688, R2 ¼ 0.9835) .
2.4.3 เปอร์เซ็นต์การลดพลังงาน
ทำการกำหนดเปอร์เซ็นต์พลังงานลดลง
ตามวิธีของ Oyaizu (1986) การมล 0.125 ของ
ชิ้นงานตัวอย่างที่เข้มข้น 1 mg/mL, 1.25 mL ฟอสเฟตบัฟเฟอร์
(200 mM, pH 6.6) และ 1.25 mL ของโพแทสเซียม ferricyanide (1%)
เพิ่ม ส่วนผสมคือ incubated ที่ C 50 สำหรับ 20 นาที แล้ว,
1.25 mL ของกรด trichloracetic 10% เพิ่มการผสม การ
ถูก centrifuged ที่ g 650 สำหรับ 10 นาที ดำเนินการเป็นส่วนลงตัวของ 2.5 mL,
2.5 mL ของน้ำกลั่นและ 0.5 mL ของคคลอไรด์เพิ่ม,
และวัด absorbance ที่ 700 nm ด้วยเครื่องทดสอบกรดด่าง UVeVIS
(แครีแกรนต์ 100 แล้วแต่กำหนด ดัลลัส CA, USA) ก็
รายงานเป็นเปอร์เซ็นต์ของพลังงานที่ลดลง Absorbance ของ
กรดแอสคอร์บิคที่เข้มข้น 1 mg/mL ถือเป็น 100%
สำหรับอ้างอิง
2.5 เตรียมการและการวิเคราะห์ของมันฝรั่ง
2.5.1 การ การเตรียมการของมันฝรั่ง
ในทดลองใช้ 10 กก.ของมันฝรั่ง Solanum tuberosum
แอตแลนติกเพียง L. ที่ได้รับจากตลาดท้องถิ่น มันฝรั่งถูก
ล้าง และฆ่าเชื้อ เปลือยถูกดำเนินการ ด้วยมีดปอกเปลือกที่
แรงเสียดทาน และมีจุดสีดำ หรือสีเขียวเอาไว้ มันถูกตัด
เป็นชิ้นประมาณ 1.5 0.2 มม.หนา ด้วยตัวเองตัด
หลังจาก ตัวอย่างถูกต้องเพื่อรักษาแช่ในสารต้านอนุมูลอิสระ
สารสกัด แล้วก็ทอด และทันทีหลัง จากที่สารต้านอนุมูลอิสระ
และค่าเปอร์ออกไซด์ถูกวิเคราะห์
2.5.2 นับรวมน้ำตาลที่ลดลงและค่า pH ในมันฝรั่ง
นับรวมลดน้ำตาลที่ทำผ่าน
เสนอวิธีการวัดสี โดย Somogyi และ Norton (1952) .
วัดปริมาณน้ำตาลลดลงในสารสกัดจาก การชี้แจง
ครั้งแรกทำออกมา นี้ทำ โดยการเพิ่ม 1.0 mL ของสารสกัด
(1 g/L) กับ 0.9 mL ของ acetate ย่อยของเป้าหมาย 1.5 m/L อิ่มตัวโซเดียม
ซัลเฟตโซลูชัน 0.15 mL ของกรดน้ำส้มน้ำแข็ง และ 0.12 mL ของสังกะสี
ferrocyanide acetate และโพแทสเซียม ส่วนผสมนี้ถูก centrifuged
สำหรับ 5 นาที และการลดเนื้อหาใน supernatant น้ำตาล
ตามแทรกแทรงจากโค้งเทียบของกลูโคส L
(10e100 mg/mL) (y ¼ 0.0082 x þ 0.0649, R2 ¼ 0.9979) PH
วัดได้ดำเนินการโดยใช้มิเตอร์ตาม
วิธี 943.02 (AOAC, 1998) .
2.5.3 การ สกัด รหัส และนับของอะคริลาไมด์
ทำการสกัด ด้วยเทคนิคที่นำเสนอโดย
Biedermann et al. (2002) จากสารสกัดได้รับ 2.0 ml แต่ละ
อย่างถูกฉีดในซ้ำ Chromatograph ก๊าซ (เครื่องหมายการค้า
Hewlett-Packard รุ่น 1800B, GCD ระบบ ซานตาคลารา CA,
สหรัฐอเมริกา), พร้อม 52CB คอลัมน์ CP-ขี้ผึ้ง (แล้วแต่กำหนด)
(60 m 0.25 mm 0.25 mm), ใช้สำหรับการวิเคราะห์ ต้น
อุณหภูมิ 80 C รักษาใน 5 นาที และในเวลาต่อมาเพิ่มขึ้นถึง 250 C ใช้ทางลาดความร้อน 30 C/นาที อุณหภูมินี้
ถูก แล้ว for15 ยังคงอยู่นาทีฮีเลียมถูกใช้เป็น
ผู้ขนส่งก๊าซที่ไหล 1 มิลลิลิตร/นาที อุณหภูมิอัด
C 250 กับแยกน้อยกว่าการฉีดและเวลา purging 1 นาที ใน
แรมสเป็คตราโดยรวมได้รับผ่าน ionization โดยอิเล็กทรอนิกส์
ผล (EI) ที่ 70 eV ข้อมูลการได้สำเร็จใน SIM
โหมด ประจุตรวจสอบกำลัง m/z 71 และ 44 เมื่อ chromatograms
ได้รับ รหัสถูกดำเนินการโดย
แรมสเป็คตรามวลเปรียบเทียบได้กับฐานข้อมูล HP
โปรแกรมค้นหา Chemstation NIST 05 มวลสเปกตรัม รุ่น 2.0 d.
พวกเขายังถูกเปรียบเทียบกับมาตรฐานสำหรับอะคริลาไมด์ในการวิเคราะห์
ภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน การนับ เส้นโค้งเทียบ
กับ 0.010e50 mg/mL (y ¼ 38465 x þ 2751.4, R2 ¼ 0.9977)
ได้รับการพัฒนา
การแปล กรุณารอสักครู่..
1 บทนำ
Acrylamide เป็นสารที่นิยมใช้ในอุตสาหกรรมต่างๆ
และมีการพิจารณา genotoxin neurotoxin และสารก่อมะเร็งที่อาจเกิดขึ้น
ในมนุษย์ (บงยอง, 2006; Tareke, แอสทาทีนคาล์, อีริคสัน,
และTörnqvist, 2002) เมื่อเร็ว ๆ นี้นักวิจัยที่สำนักงานคณะกรรมการอาหารแห่งชาติ
การบริหารงานของสวีเดน (NFA) และมหาวิทยาลัยสตอกโฮล์ม
รายงานว่าอาหารที่อุดมด้วยคาร์โบไฮเดรตสร้างอย่างมีนัยสำคัญ
ปริมาณของริลาไมด์เมื่ออยู่ภายใต้อุณหภูมิสูง
(Gökmen & Palazo Glu 2008;. ซซ็อง et al, 2007) . เนื่องจากสารนี้
เป็นอันตรายต่อสุขภาพได้รับการจัดอยู่ในกลุ่ม 2A เป็น "
สารก่อมะเร็งในมนุษย์น่าจะ "โดยองค์การระหว่างประเทศเพื่อ
การวิจัยมะเร็ง (IARC, 1994), การแสดงตนในอาหารเป็นสาเหตุสำหรับ
กังวลมาก ริลาไมด์ที่ผลิตตามธรรมชาติในอาหารที่มี
ปริมาณคาร์โบไฮเดรตสูงและองค์ประกอบของโปรตีนต่ำที่
เมื่อภายใต้กระบวนการดังกล่าวเป็นทอดอบหรือปิ้ง,
สร้างสารพิษนี้ส่วนใหญ่ผ่านปฏิกิริยา Maillard (Mottram,
Wedzicha และดอด 2002; Stadler และ อัล 2002. Taeymans และไม้,
2004; Taubert, Harlfinger, Henkes, Berkels และSchömig, 2004)
ความเข้มข้นของริลาไมด์สามารถแตกต่างกันอย่างมากมายในอาหารหนึ่ง
รายการขึ้นอยู่กับปัจจัยต่างๆเช่นอุณหภูมิเวลาทำอาหารและ
ปริมาณของการลดน้ำตาลและกรดอะมิโนฟรีเช่น asparagine
(ชองฮวง & Hyong 2005) ในประเภทอาหารที่อาจ
นำเสนอเป็นจำนวนมากของริลาไมด์เป็นผลิตภัณฑ์ที่ได้
จากธัญพืช (คุกกี้, ขนมปังและ tostadas) กาแฟและส่วนใหญ่ทอด
มันฝรั่ง (Granda, Moreira, และทิช 2004; โมเรโนArmendáriz,
Gutiérrez, Fernándezและ Torre 2007; Takatsuki, Nemoto, ซาซากิและ
Maitani 2003) ถึง 12, 000 mg / kg ของริลาไมด์ที่ได้รับการวัด
ในมันฝรั่งทอด (ฟรีดแมน 2003) ได้รับการยอมรับระดับของ
ริลาไมด์ไม่ควรจะสูงกว่า 0.5 mg / L ในกระบวนการเช่นการ
บำบัดน้ำเสีย (WHO 2003) และไม่เกิน 10 mg / kg ในพลาสติก
(คณะกรรมาธิการยุโรป, 1992)
ส่วนใหญ่ของการวิจัยในด้านนี้จะเน้น ส่วนใหญ่เกี่ยวกับ
การลดลงของริลาไมด์ในมันฝรั่งทอดเนื่องจากพวกเขาจะใช้กันอย่างแพร่หลาย
บริโภคทั่วโลก เทคนิคที่นำมาใช้ในปัจจุบันเพื่อ
ให้บรรลุการลดลงดังกล่าวจะขึ้นอยู่กับการเปลี่ยนแปลงของทอด
เงื่อนไข (Granda et al., 2004) เช่นเดียวกับการเพิ่มขึ้นของอื่น ๆ
สารประกอบเช่นกรดอะมิโน (Cheong et al., 2005) กรด (จุง ชอยและยูโด 2003; Kita, Brathen, Knutsen และ Wicklund, 2004) ไอออน
(Mestdagh, De Wilde, Delporte รถตู้และ De Menulenaer 2008) และ
เอนไซม์ (Taeymans และไม้ 2004. Zyzak และคณะ, 2003) แต่
หลายวิธีการเหล่านี้ส่งผลกระทบต่อสีของพวกเขารสชาติและเนื้อสัมผัส เมื่อเร็ว ๆ นี้
การศึกษาได้รายงานการลดลงของระดับริลาไมด์ผ่าน
การเพิ่มขึ้นของสารสกัดจากพืชกับผลิตภัณฑ์อาหาร Becalski, Lau, ลูอิสและ
นาวิน (2002) สามารถลดปริมาณของสารพิษโดยการเพิ่ม
โรสแมรี่ (Rosmarinus officinalis) กับน้ำมันที่ใช้ในการทอดมันฝรั่ง
Zhang, เฉินเหวยอู๋และ Zhang (2007) การประเมินผลกระทบของการ
สารสกัดจากสารต้านอนุมูลอิสระจากใบไผ่ในการก่อตัวของ
ริลาไมด์ประสบความสำเร็จลดลง 74% จาก neurotoxin ในทอด
มันฝรั่งในขณะที่เหวยเหวย (2007) ได้รับ 83%
การลดลงของริลาไมด์ในขนมปังโดยการรวมสารสกัดจาก
ใบไผ่ที่มีสีเขียว ชา
สารสกัดจากพืชส่วนใหญ่มีสารฟีนอล (Manzocco,
Anese และ Nicoli, 1998) เช่น flavonoids กรดซินนามิก, coumarins,
กรดฟีนอล lignans และแทนนินซึ่งมีสารต้านอนุมูลอิสระ
และกิจกรรมที่น่าจะเป็นผู้รับผิดชอบในการลดระดับสารพิษ
รายงานหลายฉบับ ระบุว่ามินท์, โหระพา, อบเชยและ
เฟื่องฟ้ามีสารฟีนอลทั้งหมดที่นำมาซึ่งสารต้านอนุมูลอิสระ
กิจกรรม (Shibamoto & Moon 2009) ดอกเฟื่องฟ้า
แสดง DPPH กิจกรรมขับสูงสุดรุนแรงและ
flavonoid สำคัญที่พบในดอกไม้เป็น quercetin และ apigenin
(Kaisoon, Siramornpun, Weerapreeyakul และ Meeso, 2011) ดังนั้น
วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้เพื่อประเมินการลดลงของ
ริลาไมด์ในมันฝรั่งทอดผ่านการแช่ในสารสกัด
จากพืชที่หลากหลายเช่นออริกาโนป่าโหระพา, อบเชย,
เฟื่องฟ้าและชาเขียว
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 สาร
1,1-diphenyl-2-picrilhydrazil (DPPH) FolineCiocalteu น้ำยา
ริลาไมด์ (99%), วิตามินซี L- (> 99.8%), ฝรั่งเศสกรดและ L-กลูโคส
ได้มาจาก SigmaeAldrich (เม็กซิโก) สารเคมีและ
ตัวทำละลายที่มีการวิเคราะห์ของเกรด
2.2 วัตถุดิบ
พืชแห้งใช้ออริกาโนป่า (Origanum vulgare), โหระพา
(ไธมัสขิง), อบเชย (Cinnamomum verum) เฟื่องฟ้า
(Bougainvillea เอสพีพี) และชาเขียว (Camellia sinensis) เป็น
เครื่องหมายการค้า Catarinos? และ La Merced ?, กำลังซื้อใน
ซูเปอร์มาร์เก็ตท้องถิ่น
2.3 การเตรียมสารสกัดจาก
ห้าสิบกรัมของพืชแห้งแต่ละถูกหดหายโดยใช้
เครื่องปั่นวง (MaxQ ?, เทอร์โมวิทยาศาสตร์สหรัฐอเมริกา) ที่ 200 รอบต่อนาทีกับ
200 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นที่ 60 องศาเซลเซียสในช่วง 24 ชั่วโมงจากนั้นได้รับการกรอง
ด้วยตัวกรองที่ 1 Whatman กระดาษ สารสกัดถูกแช่แข็งด้วย
ไนโตรเจนเหลวและแห้ง (ถูกรับ 1E2 กรัมผง)
(lyophilizer Labconco 4.5 L, แคนซัสสหรัฐอเมริกา) สำหรับ analysis.2.4 ภายหลัง การวิเคราะห์ของสารสกัดจากสารต้านอนุมูลอิสระ
2.4.1 1,1-Diphenyl-2-picrilhydrazil (DPPH)
ความสามารถในการจับอนุมูลอิสระที่ได้รับการกำหนดโดยใช้
ความรุนแรง 1,1-diphenyl-2-picrilhydrazil (DPPH) (แบรนด์วิลเลียมส์
Cuvelier และ Berset, 1995) 0.1 มิลลิลิตรของความเข้มข้นของ 1 mg / L
จากตัวอย่างในเมทานอล, 2.9 มิลลิลิตรของสารละลายเมทานอลของ
DPPH (36 mg / มิลลิลิตร) และมีการเพิ่มส่วนผสมเขย่าแรง ๆ
ขวดที่ยังคงอยู่ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที,
ก่อนที่จะวัดการดูดกลืนแสงที่ 517 นาโนเมตรด้วย UVeVIS
spectrophotometer (แครี 100, Varian, พาโลอัลโต, CA, USA) เหล่านี้
ตรวจวัดได้ดำเนินการในที่ซ้ำกัน
2.4.2 ความมุ่งมั่นของฟีนอลทั้งหมดสารประกอบ
ปริมาณของสารประกอบฟีนอลทั้งหมดที่มี Foline
ปฏิกิริยาสี Ciocalteau ใช้วิธีการของ Spanos
และ Wrolstad (1990) 50 มิลลิลิตรของตัวอย่าง (1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรละลาย
ในน้ำกลั่น), 2.5 มิลลิลิตรของสาร FolineCiocalteu (ปรับลด 1 /
10) และ 2 มิลลิลิตร Na2CO3 (75% P / v) ที่เพิ่มขึ้นและมีส่วนผสม
บ่มที่ 45? C เป็นเวลา 15 นาที Absorbancewas วัดที่ 765 นาโนเมตร
ด้วย spectrophotometer UVeVIS (แครี 100, Varian, พาโลอัลโต, CA,
USA) ผลสุดท้ายถูกแสดงเป็นไมโครกรัมเทียบเท่า
กรดแกลต่อไมโครกรัมของน้ำหนักแห้ง (มก EAG / มิลลิกรัม DW) โดยการแก้ไข
จาก เส้นโค้งการสอบเทียบกับช่วงของ 20e1000 mg / ml
ของกรดแกลลิ (Y ¼ 0.0011x þ .0688, R2 ¼ 0.9835)
2.4.3 ร้อยละของการลดอำนาจ
การกำหนดเปอร์เซ็นต์การลดการใช้พลังงานที่ถูกสร้างขึ้น
ตามวิธีการของ Oyaizu (1986) ที่ 0.125 มิลลิลิตรของ
ตัวอย่างที่ความเข้มข้น 1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร 1.25 มิลลิลิตรฟอสเฟตบัฟเฟอร์
(ไม่เกิน 200 มิลลิค่า pH 6.6) และ 1.25 มิลลิลิตรของโพแทสเซียม ferricyanide (1%) ถูก
เพิ่ม ส่วนผสมที่ได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาที แล้ว
1.25 มิลลิลิตรของกรด trichloracetic 10% ได้รับการเพิ่มส่วนผสมที่
ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 650 กรัมเป็นเวลา 10 นาที aliquot 2.5 มิลลิลิตรถูกนำตัว,
2.5 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นและ 0.5 มิลลิลิตรคลอเสริม
และการดูดกลืนแสงวัดที่ 700 นาโนเมตรด้วย spectrophotometer UVeVIS
(แครี 100, Varian, พาโลอัลโต, CA, USA) ผลที่ได้รับ
รายงานเป็นร้อยละของการลดอำนาจ การดูดกลืนแสงของ
วิตามินซีที่มีความเข้มข้น 1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรถือเป็น 100%
สำหรับการอ้างอิง
2.5 การเตรียมและการวิเคราะห์ของมันฝรั่ง
2.5.1 การเตรียมความพร้อมของมันฝรั่ง
ในการทดลองที่ถูกนำมาใช้ 10 กิโลกรัมของมันฝรั่งมะเขือ tuberosum
L. var แอตแลนติกที่ได้รับจากตลาดในประเทศ มันฝรั่งที่ได้รับการ
ล้างและฆ่าเชื้อ เปลือยได้ดำเนินการกับเครื่องปอก
แรงเสียดทานและถูกลบออกจุดด่างดำหรือสีเขียว มันฝรั่งถูกตัด
เป็นชิ้นประมาณ 1.5? 0.2 มมหนากับเครื่องตัดคู่มือ
หลังจากที่ตัวอย่างได้รับภายใต้การรักษาการแช่ในสารต้านอนุมูลอิสระ
สารสกัดจากนั้นได้รับการทอดและทันทีหลังจากที่สารต้านอนุมูลอิสระ
และเปอร์ออกไซด์ค่าวิเคราะห์
2.5.2 ปริมาณรวมลดน้ำตาลและความเป็นกรดด่างในมันฝรั่ง
ปริมาณของน้ำตาลลดทั้งหมดที่ถูกสร้างขึ้นผ่าน
วิธีการสีที่เสนอโดย Somogyi และ Norton (1952)
ที่ปริมาณน้ำตาลลดในสารสกัดชี้แจงของพวกเขา
ได้รับการดำเนินการครั้งแรก นี้ทำโดยการเพิ่ม 1.0 มิลลิลิตรของสารสกัด
(1 กรัม / ลิตร) 0.9 มิลลิลิตรย่อยอะซิเตทของตะกั่ว 1.5 เมตร / ลิตรอิ่มตัวโซเดียม
โซลูชั่นซัลเฟต 0.15 มิลลิลิตรของกรดอะซิติกน้ำแข็งและ 0.12 มิลลิลิตรของสังกะสี
อะซิเตทและ โพแทสเซียม ferrocyanide ส่วนผสมนี้ถูกปั่น
เป็นเวลา 5 นาทีและลดปริมาณน้ำตาลในสารละลาย
ที่กำหนดโดยการสอดแทรกจากเส้นโค้งการสอบเทียบ L-กลูโคส
(10e100 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) (Y ¼ 0.0082x þ .0649, R2 ¼ 0.9979) ค่า pH ที่
วัดได้ดำเนินการโดยใช้มิเตอร์ตาม
วิธีการที่ 943.02 (AOAC, 1998)
2.5.3 การสกัดการระบุและปริมาณของริลาไมด์
สกัดได้ดำเนินการกับเทคนิคที่เสนอโดย
Biedermann และคณะ (2002) จากสารสกัดที่ได้รับ 2.0 มิลลิลิตรของแต่ละ
ตัวอย่างถูกฉีดในที่ซ้ำกัน ก๊าซ Chromatograph (เครื่องหมายการค้า
Hewlett-Packard, รุ่น 1800B, GCD ระบบซานตาคลารา, CA,
USA) พร้อมกับคอลัมน์ CP-WAX 52CB (VARIAN)
(60 เมตร? 0.25 มม? 0.25 มิลลิเมตร) ถูกนำมาใช้ในการวิเคราะห์ . เริ่มต้นที่
อุณหภูมิ 80 องศาเซลเซียสได้รับการเก็บรักษาไว้เป็นเวลา 5 นาทีและต่อมาเพิ่มขึ้นถึง 250 องศาเซลเซียสโดยใช้ทางลาดความร้อนที่ 30 องศาเซลเซียส / นาที อุณหภูมินี้
ได้รับการรักษาแล้ว for15 นาที ฮีเลียมถูกใช้เป็น
ก๊าซที่ให้บริการการไหลของ 1 มิลลิลิตร / นาที; อุณหภูมิหัวฉีดได้
250 องศาเซลเซียสที่มีการแยกการฉีดน้อยลงและเวลาการกวาดล้างของ 1 นาที
สเปกตรัมมวลที่ได้รับผ่านการไอออไนซ์อิเล็กทรอนิกส์
ผลกระทบ (EI) ที่ 70 eV ข้อมูลที่ได้มาก็ประสบความสำเร็จในซิมการ์ด
โหมดไอออนตรวจสอบการเป็นม / ซี 71 และ 44 เมื่อโครมาโต
ที่ได้รับบัตรประจำตัวถูกดำเนินการโดย
การเปรียบเทียบสเปกตรัมมวลที่ได้รับกับฐานข้อมูลของเอชพี
Chemstation-NIST โปรแกรมค้นหา 05 มวลผีรุ่น 2.0 ง
พวกเขายังถูกเมื่อเทียบกับมาตรฐานสำหรับการวิเคราะห์ริลาไมด์
ภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน สำหรับปริมาณเส้นโค้งการสอบเทียบ
กับช่วงของ 0.010e50 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร (Y ¼ 38465x þ 2751.4, R2 ¼ 0.9977)
ได้รับการพัฒนา
Acrylamide เป็นสารที่นิยมใช้ในอุตสาหกรรมต่างๆ
และมีการพิจารณา genotoxin neurotoxin และสารก่อมะเร็งที่อาจเกิดขึ้น
ในมนุษย์ (บงยอง, 2006; Tareke, แอสทาทีนคาล์, อีริคสัน,
และTörnqvist, 2002) เมื่อเร็ว ๆ นี้นักวิจัยที่สำนักงานคณะกรรมการอาหารแห่งชาติ
การบริหารงานของสวีเดน (NFA) และมหาวิทยาลัยสตอกโฮล์ม
รายงานว่าอาหารที่อุดมด้วยคาร์โบไฮเดรตสร้างอย่างมีนัยสำคัญ
ปริมาณของริลาไมด์เมื่ออยู่ภายใต้อุณหภูมิสูง
(Gökmen & Palazo Glu 2008;. ซซ็อง et al, 2007) . เนื่องจากสารนี้
เป็นอันตรายต่อสุขภาพได้รับการจัดอยู่ในกลุ่ม 2A เป็น "
สารก่อมะเร็งในมนุษย์น่าจะ "โดยองค์การระหว่างประเทศเพื่อ
การวิจัยมะเร็ง (IARC, 1994), การแสดงตนในอาหารเป็นสาเหตุสำหรับ
กังวลมาก ริลาไมด์ที่ผลิตตามธรรมชาติในอาหารที่มี
ปริมาณคาร์โบไฮเดรตสูงและองค์ประกอบของโปรตีนต่ำที่
เมื่อภายใต้กระบวนการดังกล่าวเป็นทอดอบหรือปิ้ง,
สร้างสารพิษนี้ส่วนใหญ่ผ่านปฏิกิริยา Maillard (Mottram,
Wedzicha และดอด 2002; Stadler และ อัล 2002. Taeymans และไม้,
2004; Taubert, Harlfinger, Henkes, Berkels และSchömig, 2004)
ความเข้มข้นของริลาไมด์สามารถแตกต่างกันอย่างมากมายในอาหารหนึ่ง
รายการขึ้นอยู่กับปัจจัยต่างๆเช่นอุณหภูมิเวลาทำอาหารและ
ปริมาณของการลดน้ำตาลและกรดอะมิโนฟรีเช่น asparagine
(ชองฮวง & Hyong 2005) ในประเภทอาหารที่อาจ
นำเสนอเป็นจำนวนมากของริลาไมด์เป็นผลิตภัณฑ์ที่ได้
จากธัญพืช (คุกกี้, ขนมปังและ tostadas) กาแฟและส่วนใหญ่ทอด
มันฝรั่ง (Granda, Moreira, และทิช 2004; โมเรโนArmendáriz,
Gutiérrez, Fernándezและ Torre 2007; Takatsuki, Nemoto, ซาซากิและ
Maitani 2003) ถึง 12, 000 mg / kg ของริลาไมด์ที่ได้รับการวัด
ในมันฝรั่งทอด (ฟรีดแมน 2003) ได้รับการยอมรับระดับของ
ริลาไมด์ไม่ควรจะสูงกว่า 0.5 mg / L ในกระบวนการเช่นการ
บำบัดน้ำเสีย (WHO 2003) และไม่เกิน 10 mg / kg ในพลาสติก
(คณะกรรมาธิการยุโรป, 1992)
ส่วนใหญ่ของการวิจัยในด้านนี้จะเน้น ส่วนใหญ่เกี่ยวกับ
การลดลงของริลาไมด์ในมันฝรั่งทอดเนื่องจากพวกเขาจะใช้กันอย่างแพร่หลาย
บริโภคทั่วโลก เทคนิคที่นำมาใช้ในปัจจุบันเพื่อ
ให้บรรลุการลดลงดังกล่าวจะขึ้นอยู่กับการเปลี่ยนแปลงของทอด
เงื่อนไข (Granda et al., 2004) เช่นเดียวกับการเพิ่มขึ้นของอื่น ๆ
สารประกอบเช่นกรดอะมิโน (Cheong et al., 2005) กรด (จุง ชอยและยูโด 2003; Kita, Brathen, Knutsen และ Wicklund, 2004) ไอออน
(Mestdagh, De Wilde, Delporte รถตู้และ De Menulenaer 2008) และ
เอนไซม์ (Taeymans และไม้ 2004. Zyzak และคณะ, 2003) แต่
หลายวิธีการเหล่านี้ส่งผลกระทบต่อสีของพวกเขารสชาติและเนื้อสัมผัส เมื่อเร็ว ๆ นี้
การศึกษาได้รายงานการลดลงของระดับริลาไมด์ผ่าน
การเพิ่มขึ้นของสารสกัดจากพืชกับผลิตภัณฑ์อาหาร Becalski, Lau, ลูอิสและ
นาวิน (2002) สามารถลดปริมาณของสารพิษโดยการเพิ่ม
โรสแมรี่ (Rosmarinus officinalis) กับน้ำมันที่ใช้ในการทอดมันฝรั่ง
Zhang, เฉินเหวยอู๋และ Zhang (2007) การประเมินผลกระทบของการ
สารสกัดจากสารต้านอนุมูลอิสระจากใบไผ่ในการก่อตัวของ
ริลาไมด์ประสบความสำเร็จลดลง 74% จาก neurotoxin ในทอด
มันฝรั่งในขณะที่เหวยเหวย (2007) ได้รับ 83%
การลดลงของริลาไมด์ในขนมปังโดยการรวมสารสกัดจาก
ใบไผ่ที่มีสีเขียว ชา
สารสกัดจากพืชส่วนใหญ่มีสารฟีนอล (Manzocco,
Anese และ Nicoli, 1998) เช่น flavonoids กรดซินนามิก, coumarins,
กรดฟีนอล lignans และแทนนินซึ่งมีสารต้านอนุมูลอิสระ
และกิจกรรมที่น่าจะเป็นผู้รับผิดชอบในการลดระดับสารพิษ
รายงานหลายฉบับ ระบุว่ามินท์, โหระพา, อบเชยและ
เฟื่องฟ้ามีสารฟีนอลทั้งหมดที่นำมาซึ่งสารต้านอนุมูลอิสระ
กิจกรรม (Shibamoto & Moon 2009) ดอกเฟื่องฟ้า
แสดง DPPH กิจกรรมขับสูงสุดรุนแรงและ
flavonoid สำคัญที่พบในดอกไม้เป็น quercetin และ apigenin
(Kaisoon, Siramornpun, Weerapreeyakul และ Meeso, 2011) ดังนั้น
วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้เพื่อประเมินการลดลงของ
ริลาไมด์ในมันฝรั่งทอดผ่านการแช่ในสารสกัด
จากพืชที่หลากหลายเช่นออริกาโนป่าโหระพา, อบเชย,
เฟื่องฟ้าและชาเขียว
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 สาร
1,1-diphenyl-2-picrilhydrazil (DPPH) FolineCiocalteu น้ำยา
ริลาไมด์ (99%), วิตามินซี L- (> 99.8%), ฝรั่งเศสกรดและ L-กลูโคส
ได้มาจาก SigmaeAldrich (เม็กซิโก) สารเคมีและ
ตัวทำละลายที่มีการวิเคราะห์ของเกรด
2.2 วัตถุดิบ
พืชแห้งใช้ออริกาโนป่า (Origanum vulgare), โหระพา
(ไธมัสขิง), อบเชย (Cinnamomum verum) เฟื่องฟ้า
(Bougainvillea เอสพีพี) และชาเขียว (Camellia sinensis) เป็น
เครื่องหมายการค้า Catarinos? และ La Merced ?, กำลังซื้อใน
ซูเปอร์มาร์เก็ตท้องถิ่น
2.3 การเตรียมสารสกัดจาก
ห้าสิบกรัมของพืชแห้งแต่ละถูกหดหายโดยใช้
เครื่องปั่นวง (MaxQ ?, เทอร์โมวิทยาศาสตร์สหรัฐอเมริกา) ที่ 200 รอบต่อนาทีกับ
200 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นที่ 60 องศาเซลเซียสในช่วง 24 ชั่วโมงจากนั้นได้รับการกรอง
ด้วยตัวกรองที่ 1 Whatman กระดาษ สารสกัดถูกแช่แข็งด้วย
ไนโตรเจนเหลวและแห้ง (ถูกรับ 1E2 กรัมผง)
(lyophilizer Labconco 4.5 L, แคนซัสสหรัฐอเมริกา) สำหรับ analysis.2.4 ภายหลัง การวิเคราะห์ของสารสกัดจากสารต้านอนุมูลอิสระ
2.4.1 1,1-Diphenyl-2-picrilhydrazil (DPPH)
ความสามารถในการจับอนุมูลอิสระที่ได้รับการกำหนดโดยใช้
ความรุนแรง 1,1-diphenyl-2-picrilhydrazil (DPPH) (แบรนด์วิลเลียมส์
Cuvelier และ Berset, 1995) 0.1 มิลลิลิตรของความเข้มข้นของ 1 mg / L
จากตัวอย่างในเมทานอล, 2.9 มิลลิลิตรของสารละลายเมทานอลของ
DPPH (36 mg / มิลลิลิตร) และมีการเพิ่มส่วนผสมเขย่าแรง ๆ
ขวดที่ยังคงอยู่ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที,
ก่อนที่จะวัดการดูดกลืนแสงที่ 517 นาโนเมตรด้วย UVeVIS
spectrophotometer (แครี 100, Varian, พาโลอัลโต, CA, USA) เหล่านี้
ตรวจวัดได้ดำเนินการในที่ซ้ำกัน
2.4.2 ความมุ่งมั่นของฟีนอลทั้งหมดสารประกอบ
ปริมาณของสารประกอบฟีนอลทั้งหมดที่มี Foline
ปฏิกิริยาสี Ciocalteau ใช้วิธีการของ Spanos
และ Wrolstad (1990) 50 มิลลิลิตรของตัวอย่าง (1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรละลาย
ในน้ำกลั่น), 2.5 มิลลิลิตรของสาร FolineCiocalteu (ปรับลด 1 /
10) และ 2 มิลลิลิตร Na2CO3 (75% P / v) ที่เพิ่มขึ้นและมีส่วนผสม
บ่มที่ 45? C เป็นเวลา 15 นาที Absorbancewas วัดที่ 765 นาโนเมตร
ด้วย spectrophotometer UVeVIS (แครี 100, Varian, พาโลอัลโต, CA,
USA) ผลสุดท้ายถูกแสดงเป็นไมโครกรัมเทียบเท่า
กรดแกลต่อไมโครกรัมของน้ำหนักแห้ง (มก EAG / มิลลิกรัม DW) โดยการแก้ไข
จาก เส้นโค้งการสอบเทียบกับช่วงของ 20e1000 mg / ml
ของกรดแกลลิ (Y ¼ 0.0011x þ .0688, R2 ¼ 0.9835)
2.4.3 ร้อยละของการลดอำนาจ
การกำหนดเปอร์เซ็นต์การลดการใช้พลังงานที่ถูกสร้างขึ้น
ตามวิธีการของ Oyaizu (1986) ที่ 0.125 มิลลิลิตรของ
ตัวอย่างที่ความเข้มข้น 1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร 1.25 มิลลิลิตรฟอสเฟตบัฟเฟอร์
(ไม่เกิน 200 มิลลิค่า pH 6.6) และ 1.25 มิลลิลิตรของโพแทสเซียม ferricyanide (1%) ถูก
เพิ่ม ส่วนผสมที่ได้รับการบ่มที่อุณหภูมิ 50 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 20 นาที แล้ว
1.25 มิลลิลิตรของกรด trichloracetic 10% ได้รับการเพิ่มส่วนผสมที่
ถูกหมุนเหวี่ยงที่ 650 กรัมเป็นเวลา 10 นาที aliquot 2.5 มิลลิลิตรถูกนำตัว,
2.5 มิลลิลิตรของน้ำกลั่นและ 0.5 มิลลิลิตรคลอเสริม
และการดูดกลืนแสงวัดที่ 700 นาโนเมตรด้วย spectrophotometer UVeVIS
(แครี 100, Varian, พาโลอัลโต, CA, USA) ผลที่ได้รับ
รายงานเป็นร้อยละของการลดอำนาจ การดูดกลืนแสงของ
วิตามินซีที่มีความเข้มข้น 1 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรถือเป็น 100%
สำหรับการอ้างอิง
2.5 การเตรียมและการวิเคราะห์ของมันฝรั่ง
2.5.1 การเตรียมความพร้อมของมันฝรั่ง
ในการทดลองที่ถูกนำมาใช้ 10 กิโลกรัมของมันฝรั่งมะเขือ tuberosum
L. var แอตแลนติกที่ได้รับจากตลาดในประเทศ มันฝรั่งที่ได้รับการ
ล้างและฆ่าเชื้อ เปลือยได้ดำเนินการกับเครื่องปอก
แรงเสียดทานและถูกลบออกจุดด่างดำหรือสีเขียว มันฝรั่งถูกตัด
เป็นชิ้นประมาณ 1.5? 0.2 มมหนากับเครื่องตัดคู่มือ
หลังจากที่ตัวอย่างได้รับภายใต้การรักษาการแช่ในสารต้านอนุมูลอิสระ
สารสกัดจากนั้นได้รับการทอดและทันทีหลังจากที่สารต้านอนุมูลอิสระ
และเปอร์ออกไซด์ค่าวิเคราะห์
2.5.2 ปริมาณรวมลดน้ำตาลและความเป็นกรดด่างในมันฝรั่ง
ปริมาณของน้ำตาลลดทั้งหมดที่ถูกสร้างขึ้นผ่าน
วิธีการสีที่เสนอโดย Somogyi และ Norton (1952)
ที่ปริมาณน้ำตาลลดในสารสกัดชี้แจงของพวกเขา
ได้รับการดำเนินการครั้งแรก นี้ทำโดยการเพิ่ม 1.0 มิลลิลิตรของสารสกัด
(1 กรัม / ลิตร) 0.9 มิลลิลิตรย่อยอะซิเตทของตะกั่ว 1.5 เมตร / ลิตรอิ่มตัวโซเดียม
โซลูชั่นซัลเฟต 0.15 มิลลิลิตรของกรดอะซิติกน้ำแข็งและ 0.12 มิลลิลิตรของสังกะสี
อะซิเตทและ โพแทสเซียม ferrocyanide ส่วนผสมนี้ถูกปั่น
เป็นเวลา 5 นาทีและลดปริมาณน้ำตาลในสารละลาย
ที่กำหนดโดยการสอดแทรกจากเส้นโค้งการสอบเทียบ L-กลูโคส
(10e100 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร) (Y ¼ 0.0082x þ .0649, R2 ¼ 0.9979) ค่า pH ที่
วัดได้ดำเนินการโดยใช้มิเตอร์ตาม
วิธีการที่ 943.02 (AOAC, 1998)
2.5.3 การสกัดการระบุและปริมาณของริลาไมด์
สกัดได้ดำเนินการกับเทคนิคที่เสนอโดย
Biedermann และคณะ (2002) จากสารสกัดที่ได้รับ 2.0 มิลลิลิตรของแต่ละ
ตัวอย่างถูกฉีดในที่ซ้ำกัน ก๊าซ Chromatograph (เครื่องหมายการค้า
Hewlett-Packard, รุ่น 1800B, GCD ระบบซานตาคลารา, CA,
USA) พร้อมกับคอลัมน์ CP-WAX 52CB (VARIAN)
(60 เมตร? 0.25 มม? 0.25 มิลลิเมตร) ถูกนำมาใช้ในการวิเคราะห์ . เริ่มต้นที่
อุณหภูมิ 80 องศาเซลเซียสได้รับการเก็บรักษาไว้เป็นเวลา 5 นาทีและต่อมาเพิ่มขึ้นถึง 250 องศาเซลเซียสโดยใช้ทางลาดความร้อนที่ 30 องศาเซลเซียส / นาที อุณหภูมินี้
ได้รับการรักษาแล้ว for15 นาที ฮีเลียมถูกใช้เป็น
ก๊าซที่ให้บริการการไหลของ 1 มิลลิลิตร / นาที; อุณหภูมิหัวฉีดได้
250 องศาเซลเซียสที่มีการแยกการฉีดน้อยลงและเวลาการกวาดล้างของ 1 นาที
สเปกตรัมมวลที่ได้รับผ่านการไอออไนซ์อิเล็กทรอนิกส์
ผลกระทบ (EI) ที่ 70 eV ข้อมูลที่ได้มาก็ประสบความสำเร็จในซิมการ์ด
โหมดไอออนตรวจสอบการเป็นม / ซี 71 และ 44 เมื่อโครมาโต
ที่ได้รับบัตรประจำตัวถูกดำเนินการโดย
การเปรียบเทียบสเปกตรัมมวลที่ได้รับกับฐานข้อมูลของเอชพี
Chemstation-NIST โปรแกรมค้นหา 05 มวลผีรุ่น 2.0 ง
พวกเขายังถูกเมื่อเทียบกับมาตรฐานสำหรับการวิเคราะห์ริลาไมด์
ภายใต้เงื่อนไขเดียวกัน สำหรับปริมาณเส้นโค้งการสอบเทียบ
กับช่วงของ 0.010e50 มิลลิกรัม / มิลลิลิตร (Y ¼ 38465x þ 2751.4, R2 ¼ 0.9977)
ได้รับการพัฒนา
การแปล กรุณารอสักครู่..
1 . บทนำ
อะครีลาไมด์เป็นสารที่นิยมใช้ในอุตสาหกรรมต่าง ๆ และถือว่าเป็น
genotoxin ประสาท , และน่าจะเป็นสารก่อมะเร็งในมนุษย์ ( บงยอง , 2006 ; tareke ริดเบอร์ก คาร์ลสัน ริคสัน , , , ,
& T ö rnqvist , 2002 ) เมื่อเร็วๆ นี้ นักวิจัยที่อาหารแห่งชาติ
การบริหารของสวีเดน ( NFA ) และมหาวิทยาลัยสต็อกโฮล์ม
รายงานว่าอาหารที่อุดมไปด้วยคาร์โบไฮเดรตสร้างยอดเงินที่สําคัญ
ของอะคริลาไมด์เมื่อเก็บรักษาที่อุณหภูมิสูง
( G ö kmen & palazo GLU , 2008 ; แมสเซิ่น et al . , 2007 ) เนื่องจากสาร
ที่เป็นอันตรายต่อสุขภาพ ได้จัดอยู่ในกลุ่มที่ 2A "
น่าจะเป็นมนุษย์สารก่อมะเร็ง " โดยหน่วยงานระหว่างประเทศเพื่อการวิจัยมะเร็ง ( ร่วมกับ
, 1994 ) ที่มีอยู่ในอาหารเป็นสาเหตุ
กังวลมาก เทปผลิตตามธรรมชาติในอาหารที่มีปริมาณคาร์โบไฮเดรตสูงและต่ำ
เมื่อโปรตีนที่เป็นองค์ประกอบที่ ภายใต้กระบวนการ เช่น ทอด อบ หรือ toasting ,
สร้างสารพิษนี้ส่วนใหญ่ผ่าน Maillard reaction ( มอททรามส์
wedzicha , & , ดอด , 2002 ; Stadler et al . , 2002 ; taeymans
&ไม้ 2004 ; taubert harlfinger henkes berkels , , , , & Sch ö MIG , 2004 )
ความเข้มข้นของอะคริลาไมด์สามารถแตกต่างกันอย่างมากในสินค้าอาหาร
หนึ่งใด ขึ้นอยู่กับปัจจัยต่างๆ เช่น อุณหภูมิ , เวลาการปรุงอาหารและ
จํานวนลดน้ำตาลและกรดอะมิโนอิสระ เช่น แอสปาราจีน
( ชอง ฮวาง &ฮยอง , 2005 ) ระหว่างชนิดอาหารที่อาจ
ปัจจุบันจํานวนมากของอะคริลาไมด์เป็นผลิตภัณฑ์ที่มาจากธัญพืช
( คุกกี้ , ขนมปังและ tostadas ) , กาแฟ และ ส่วนใหญ่ ทอด
มันฝรั่ง ( กรานดา โมไรร่า , & tichy , 2004 ; Moreno , armend . kgm ริซ
กูติ , ผู้ rrez เฟร์นันเดซ , & , ตอร์เรส , 2007 ; Takatsuki , nemoto ซาซากิ&
maitani , 2003 ) ถึง 12 , 000 มิลลิกรัม / กิโลกรัมของอะคริลาไมด์ถูก quantified
ในมันฝรั่งทอด ( Friedman , 2003 ) ที่ได้รับการยอมรับระดับ
อะคริลาไมด์ไม่ควรสูงกว่า 0.5 มก. / ล. ในกระบวนการเช่น
น้ำ ( 2003 ) และไม่เกิน 10 มิลลิกรัม / กิโลกรัม ในพลาสติก
( European Commission , 1992 ) .
ส่วนใหญ่ของการวิจัยในด้านนี้จะเน้นหลักในการลดอะคริลาไมด์ในมันฝรั่งทอด
ใช้ตั้งแต่พวกเขาเป็นกันอย่างแพร่หลายทั่วโลก เทคนิคที่ใช้ในปัจจุบัน
บรรลุบอกว่าลดจะขึ้นอยู่กับการปรับเปลี่ยนของทอด
เงื่อนไข ( กรานดา et al . , 2004 ) รวมทั้งยังมีสารประกอบอื่น
เช่นกรดอะมิโน ( Cheong et al . ,2005 ) , กรด ( จอง ชอย &จู , 2003 ; คิตะ brathen knutsen & , , wicklund , 2004 ) , ไอออน
( mestdagh de Wilde , delporte , รถตู้ , & de menulenaer , 2008 ) และ
เอนไซม์ ( taeymans &ไม้ , 2004 ; zyzak et al . , 2003 ) อย่างไรก็ตาม วิธีการเหล่านี้มีผลต่อ
หลายสี รสชาติ และเนื้อสัมผัส การศึกษาล่าสุดมีรายงานการลดลงของอะคริลาไมด์
เพิ่มระดับด้วยสารสกัดจากพืชในผลิตภัณฑ์อาหารbecalski เลา ลูอิสและ
กะลาสี ( 2002 ) สามารถลดปริมาณของสารพิษโดยการเพิ่ม
โรสแมรี่ ( rosmarinus officinalis ) กับน้ำมันที่ใช้ทอดมันฝรั่ง
จาง เฉิน จาง วู และ จาง ( 2007 ) ประเมิน ผลของสารสกัดจากใบไผ่
สารต้านอนุมูลอิสระในรูปของ
เทปบรรลุลดลง 74% ของระบบประสาทในทอด
มันฝรั่งขณะที่จางและจาง ( 2550 ) ที่ได้ 83 %
ลดอะคริลาไมด์ในขนม โดยการรวมสารสกัดจากไม้ไผ่ ด้วยใบชาเขียว
.
สารสกัดจากพืชส่วนใหญ่ประกอบด้วยสารประกอบฟีนอล ( manzocco
, ญี่ปุ่น & นิโคลิ , 1998 ) เช่น ฟลาโวนอยด์ , ซินนามิกกรด มาริน
ฟีโนลิก กรดแทนนินและลิกแนนส์ , ซึ่งทั้งหมดมีสารต้านอนุมูลอิสระ
กิจกรรมและอาจจะรับผิดชอบเพื่อลดสารพิษระดับ
รายงานหลายคนระบุว่า ออริกาโน , โหระพา , อบเชยและ
เฟื่องฟ้าประกอบด้วยรวมสารประกอบฟีนอลที่ให้สารต้านอนุมูลอิสระ
( ชิบาโมโตะเลย&ดวงจันทร์ , 2009 ) ดอกของเฟื่องฟ้า
แสดง dpph สูงสุดเป็นตัวเร่งปฏิกิริยาและกิจกรรมหลัก ฟลาโวนอยด์ที่พบในดอกไม้
( kaisoon พิจินินคือ ซี เอช ,siramornpun weerapreeyakul &มีโซ , , , 2011 ) ดังนั้น
วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้เพื่อประเมินผลการลด
อะคริลาไมด์ในมันฝรั่งทอดผ่านการแช่ในสารสกัดจากพืชป่า
หลากหลายเช่นออริกาโน , โหระพา , อบเชย , เฟื่องฟ้า และชาเขียว
.
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 . สารเคมี
1,1-diphenyl-2-picrilhydrazil ( dpph ) folineciocalteu รีเอเจนต์
อะคริลาไมด์ ( 99% )L - กรดแอสคอร์บิค ( 99.8% ) และเพิ่มขึ้น l-glucose
ได้มาจาก sigmaealdrich ( เม็กซิโก ) สารเคมีและตัวทำละลายของเกรดวิเคราะห์
.
2.2 . วัตถุดิบ
แห้ง พืชที่ใช้ , ป่า , โหระพาออริกาโน ( Origanum vulgare )
( ต่อมไทมัส vulgaris ) อบเชย ( Cinnamomum verum ) เฟื่องฟ้า ( Bougainvillea
spp ) และชาเขียว ( ต้นชา ) เป็นเครื่องหมายการค้า catarinos
และ La Merced ,ซื้อในซูเปอร์มาร์เก็ตท้องถิ่น
.
2.3 การเตรียมสารสกัด
50 กรัมของแต่ละบริการของพืชบดโดยใช้
เครื่องปั่นเบ้าตา ( maxq , เทอร์โมวิทยาศาสตร์ , USA ) ที่ความเร็วรอบ 200 รอบต่อนาทีกับ
200 มล. น้ำกลั่นที่ 60 C ในช่วง 24 ชั่วโมง แล้วกรองด้วย whatman
1 กระดาษกรอง สารสกัดถูกแช่แข็งด้วยไนโตรเจนเหลวและแห้ง
( เป็น ) 1e2 กรัมผง )
( ไลโอฟิไลเซอร์แล็บคอนโก้ 4.5 ลิตร แคนซัส สหรัฐอเมริกา ) สำหรับการวิเคราะห์ที่ตามมา 2.4 . การวิเคราะห์สารสกัดสารต้านอนุมูลอิสระ
เครื่องมือกำจัดเพื่อย้าย . 1,1-diphenyl-2-picrilhydrazil ( dpph )
ความสามารถในการจับอนุมูลอิสระ ตั้งใจใช้
1,1-diphenyl-2-picrilhydrazil หัวรุนแรง ( dpph ) ( ตรา วิลเลียมส์ คว เลอร์&
, berset , 1995 ) 0.1 มล. ความเข้มข้น 1 มิลลิกรัม / ลิตร
จากตัวอย่างในเมทานอล , 29 มิลลิลิตรของสารละลายเมทานอล
dpph ( 36 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรและเพิ่มส่วนผสมที่ถูกเขย่าอย่างแรง .
หลอดอยู่ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที ก่อนวัดค่าการดูดกลืนแสงที่
517 nm กับ uvevis
Spectrophotometer ( แครี่ 100 , เครื่อง , พาโลอัลโต แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) หาที่ซ้ำกันได้ในนี้
.
2.4.2 . วิเคราะห์ปริมาณสารประกอบฟีนอล
การรวมปริมาณของสารประกอบฟีนอลด้วย foline
ciocalteau 7.4 ปฏิกิริยาที่ใช้วิธีการ Spanos
และ wrolstad ( 1990 ) 50 ml ของกลุ่มตัวอย่าง ( 1 mg / mL ละลาย
ในน้ำกลั่น , 2.5 ml ของ folineciocalteu Reagent ( เจือจาง 1 : 10 ) และ 2 ml ของ Na2CO3 ( 75 % p / V ) เพิ่มส่วนผสม
บ่มที่อุณหภูมิ 45 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที absorbancewas วัดที่ 765 nm
กับ uvevis Spectrophotometer ( แครี่ 100 , เครื่อง , พาโลอัลโต , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา ,
) ผลลัพธ์สุดท้ายถูกแสดงเป็นเทียบเท่าไมโครกรัมของกรดแกลลิค
ต่อไมโครกรัมของน้ำหนักแห้ง ( มก. / mg dw EAG ) โดยสอดแทรก
จากเส้นปรับเทียบกับช่วงของ 20e1000 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรของกรดแกลลิค
( Y ¼ 0.0011x þ 0.0688 อาร์ทู¼ 0.9835 ) .
2.4.3 . ร้อยละของการลดใช้พลังงาน
ความตั้งใจของการลดใช้พลังงานร้อยละา
ตามวิธีการของ oyaizu ( 1986 ) กับ 0.125 มล.
ตัวอย่างที่ระดับความเข้มข้น 1 มก. / มล. 1.25 มล.
ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( 200 มม. , pH 6.6 ) และ 1.25 กรัมโพแทสเซียมเฟอร์ริกไซนาไนด์ ( 1% )
เพิ่ม ส่วนผสม บ่มที่อุณหภูมิ 50 C เป็นเวลา 20 นาทีจากนั้น
1.25 มล. 10 % trichloracetic กรดถูกเพิ่มลงในส่วนผสม ซึ่ง
คือระดับที่ 650 กรัม 10 นาทีเป็นส่วนลงตัวของ 2.5 มล. ถ่าย
2.5 มล. น้ำกลั่นและ 0.5 มิลลิลิตร เฟอร์ริค คลอไรด์เพิ่มขึ้น และค่า
วัดที่ 700 nm กับ uvevis Spectrophotometer
( - 100 , เครื่อง , พาโลอัลโต แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) ผลลัพธ์ที่ได้รายงานเป็นร้อยละของ
ลดพลังงาน การดูดกลืนแสงของ
วิตามินซีความเข้มข้น 1 มก. / มล. ถือว่า 100%
สำหรับการอ้างอิง .
2.5 การเตรียมการและการวิเคราะห์ของฝรั่ง
ดาวน์โหลด . เตรียมมันฝรั่ง
ในการทดลองใช้ 10 กก. tuberosum
L . var . แอตแลนติกมันฝรั่งโซลานัม ได้จากตลาดท้องถิ่น มันฝรั่งถูก
ล้างและฆ่าเชื้อ เปลือยถูกหามออกด้วยเครื่องปอก
แรงเสียดทานและถูกลบออกจุดสีดำหรือสีเขียว มันฝรั่งหั่นเป็นชิ้นประมาณ 1.5
หนา 0.2 มม.ด้วยเครื่องตัดด้วยมือ
หลังจากตัวอย่าง ภายใต้การรักษาแช่สารสกัดสารต้านอนุมูลอิสระ
แล้วทอดและทันทีหลังจากที่สารต้านอนุมูลอิสระ
และค่าเปอร์ออกไซด์ข้อมูล งานวาง . ปริมาณรวมของการลดน้ำตาลและความเป็นกรดในมันฝรั่ง
ปริมาณรวมลดน้ำตาลได้ผ่านวิธี Colorimetric
เสนอโดย somogyi และ Norton
( 1952 )ช่วงลดน้ำตาลใน สารสกัด ตนชี้แจง
เป็นครั้งแรกที่ดำเนินการ นี้ถูกทำโดยการเพิ่ม 1.0 มิลลิลิตรของสารสกัด
1 g / L ) 0.9 ml ย่อยอะซิเตทตะกั่ว 1.5 M / L ของไขมันอิ่มตัว โซเดียม
สารละลายซัลเฟต 0.15 มิลลิลิตรของกรดแอซีติกและ 0.12 มล. สังกะสีอะซิเตท
และโพแทสเซียมเฟอร์โรไซยาเนท . ส่วนผสมนี้อยู่ที่ระดับ
5 นาทีและลดปริมาณน้ำตาลในน่าน
กำหนดโดยการแก้ไขจากรูปโค้งของ l-glucose
( 10e100 mg / ml ) ( Y ¼ 0.0082x þ 0.0649 อาร์ทู¼ 0.9979 ) พีเอชมิเตอร์วัดการใช้
ตามวิธี 943.02 ( โปรตีน , 1998 ) .
2.5.3 . การสกัด , การระบุและปริมาณของอะคริลาไมด์
การสกัดได้ ด้วยเทคนิคการนำเสนอด้วย
biedermann et al . ( 2002 ) สารสกัดที่ได้จาก 2.0 มิลลิลิตรของแต่ละ
ตัวอย่างถูกฉีดซ้ำ แก๊สโครมาโตกราฟ ( เครื่องหมายการค้า
Hewlett Packard , รูปแบบ 1800b LCD , ระบบ , ซานตาคลารา , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา ,
) พร้อมกับคอลัมน์ cp-wax 52cb ( ไร้ )
( 60 เมตร 0.25 มม. 0.25 มม. ) ใช้สำหรับการวิเคราะห์ เริ่มต้น
อุณหภูมิ 80 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที ไว้และต่อมาเพิ่มขึ้นเป็น 250 C ใช้ทางลาดความร้อน 30 C / นาที อุณหภูมินี้ไว้ 15 นาทีแล้ว
ฮีเลียมถูกใช้เป็นแก๊สตัวพาในการไหลของหัวฉีด 1 มิลลิลิตร / นาที ; อุณหภูมิ
250 C ด้วยการฉีดแยก น้อยกว่า และการกวาดล้างเวลา 1 นาที
มวลสเปกตรัมได้ผ่านไออิเล็กทรอนิกส์
โดยผลกระทบ ( EI ) ที่ 70 ปีที่ . ข้อมูลเพิ่มเติมได้ในโหมดซิม
, ตรวจสอบไอออนเป็น M / Z 71 และ 44 เมื่อกลิ่น
ได้รับ การกระทำโดย
เปรียบเทียบมวลจะมีค่า HP กับฐานข้อมูล
chemstation NIST 05 มวลการค้นหาโปรแกรม 2.0d รุ่น .
พวกเขาถูกเมื่อเทียบกับมาตรฐานของอะคริลาไมด์วิเคราะห์
ภายใต้เงื่อนไขเดียวกันสำหรับปริมาณ เป็นรูปโค้ง
กับช่วงของ 0.010e50 mg / ml ( Y ¼ 38465x þ 2751.4 อาร์ทู¼ 0.9977 )
ถูกพัฒนาขึ้น
อะครีลาไมด์เป็นสารที่นิยมใช้ในอุตสาหกรรมต่าง ๆ และถือว่าเป็น
genotoxin ประสาท , และน่าจะเป็นสารก่อมะเร็งในมนุษย์ ( บงยอง , 2006 ; tareke ริดเบอร์ก คาร์ลสัน ริคสัน , , , ,
& T ö rnqvist , 2002 ) เมื่อเร็วๆ นี้ นักวิจัยที่อาหารแห่งชาติ
การบริหารของสวีเดน ( NFA ) และมหาวิทยาลัยสต็อกโฮล์ม
รายงานว่าอาหารที่อุดมไปด้วยคาร์โบไฮเดรตสร้างยอดเงินที่สําคัญ
ของอะคริลาไมด์เมื่อเก็บรักษาที่อุณหภูมิสูง
( G ö kmen & palazo GLU , 2008 ; แมสเซิ่น et al . , 2007 ) เนื่องจากสาร
ที่เป็นอันตรายต่อสุขภาพ ได้จัดอยู่ในกลุ่มที่ 2A "
น่าจะเป็นมนุษย์สารก่อมะเร็ง " โดยหน่วยงานระหว่างประเทศเพื่อการวิจัยมะเร็ง ( ร่วมกับ
, 1994 ) ที่มีอยู่ในอาหารเป็นสาเหตุ
กังวลมาก เทปผลิตตามธรรมชาติในอาหารที่มีปริมาณคาร์โบไฮเดรตสูงและต่ำ
เมื่อโปรตีนที่เป็นองค์ประกอบที่ ภายใต้กระบวนการ เช่น ทอด อบ หรือ toasting ,
สร้างสารพิษนี้ส่วนใหญ่ผ่าน Maillard reaction ( มอททรามส์
wedzicha , & , ดอด , 2002 ; Stadler et al . , 2002 ; taeymans
&ไม้ 2004 ; taubert harlfinger henkes berkels , , , , & Sch ö MIG , 2004 )
ความเข้มข้นของอะคริลาไมด์สามารถแตกต่างกันอย่างมากในสินค้าอาหาร
หนึ่งใด ขึ้นอยู่กับปัจจัยต่างๆ เช่น อุณหภูมิ , เวลาการปรุงอาหารและ
จํานวนลดน้ำตาลและกรดอะมิโนอิสระ เช่น แอสปาราจีน
( ชอง ฮวาง &ฮยอง , 2005 ) ระหว่างชนิดอาหารที่อาจ
ปัจจุบันจํานวนมากของอะคริลาไมด์เป็นผลิตภัณฑ์ที่มาจากธัญพืช
( คุกกี้ , ขนมปังและ tostadas ) , กาแฟ และ ส่วนใหญ่ ทอด
มันฝรั่ง ( กรานดา โมไรร่า , & tichy , 2004 ; Moreno , armend . kgm ริซ
กูติ , ผู้ rrez เฟร์นันเดซ , & , ตอร์เรส , 2007 ; Takatsuki , nemoto ซาซากิ&
maitani , 2003 ) ถึง 12 , 000 มิลลิกรัม / กิโลกรัมของอะคริลาไมด์ถูก quantified
ในมันฝรั่งทอด ( Friedman , 2003 ) ที่ได้รับการยอมรับระดับ
อะคริลาไมด์ไม่ควรสูงกว่า 0.5 มก. / ล. ในกระบวนการเช่น
น้ำ ( 2003 ) และไม่เกิน 10 มิลลิกรัม / กิโลกรัม ในพลาสติก
( European Commission , 1992 ) .
ส่วนใหญ่ของการวิจัยในด้านนี้จะเน้นหลักในการลดอะคริลาไมด์ในมันฝรั่งทอด
ใช้ตั้งแต่พวกเขาเป็นกันอย่างแพร่หลายทั่วโลก เทคนิคที่ใช้ในปัจจุบัน
บรรลุบอกว่าลดจะขึ้นอยู่กับการปรับเปลี่ยนของทอด
เงื่อนไข ( กรานดา et al . , 2004 ) รวมทั้งยังมีสารประกอบอื่น
เช่นกรดอะมิโน ( Cheong et al . ,2005 ) , กรด ( จอง ชอย &จู , 2003 ; คิตะ brathen knutsen & , , wicklund , 2004 ) , ไอออน
( mestdagh de Wilde , delporte , รถตู้ , & de menulenaer , 2008 ) และ
เอนไซม์ ( taeymans &ไม้ , 2004 ; zyzak et al . , 2003 ) อย่างไรก็ตาม วิธีการเหล่านี้มีผลต่อ
หลายสี รสชาติ และเนื้อสัมผัส การศึกษาล่าสุดมีรายงานการลดลงของอะคริลาไมด์
เพิ่มระดับด้วยสารสกัดจากพืชในผลิตภัณฑ์อาหารbecalski เลา ลูอิสและ
กะลาสี ( 2002 ) สามารถลดปริมาณของสารพิษโดยการเพิ่ม
โรสแมรี่ ( rosmarinus officinalis ) กับน้ำมันที่ใช้ทอดมันฝรั่ง
จาง เฉิน จาง วู และ จาง ( 2007 ) ประเมิน ผลของสารสกัดจากใบไผ่
สารต้านอนุมูลอิสระในรูปของ
เทปบรรลุลดลง 74% ของระบบประสาทในทอด
มันฝรั่งขณะที่จางและจาง ( 2550 ) ที่ได้ 83 %
ลดอะคริลาไมด์ในขนม โดยการรวมสารสกัดจากไม้ไผ่ ด้วยใบชาเขียว
.
สารสกัดจากพืชส่วนใหญ่ประกอบด้วยสารประกอบฟีนอล ( manzocco
, ญี่ปุ่น & นิโคลิ , 1998 ) เช่น ฟลาโวนอยด์ , ซินนามิกกรด มาริน
ฟีโนลิก กรดแทนนินและลิกแนนส์ , ซึ่งทั้งหมดมีสารต้านอนุมูลอิสระ
กิจกรรมและอาจจะรับผิดชอบเพื่อลดสารพิษระดับ
รายงานหลายคนระบุว่า ออริกาโน , โหระพา , อบเชยและ
เฟื่องฟ้าประกอบด้วยรวมสารประกอบฟีนอลที่ให้สารต้านอนุมูลอิสระ
( ชิบาโมโตะเลย&ดวงจันทร์ , 2009 ) ดอกของเฟื่องฟ้า
แสดง dpph สูงสุดเป็นตัวเร่งปฏิกิริยาและกิจกรรมหลัก ฟลาโวนอยด์ที่พบในดอกไม้
( kaisoon พิจินินคือ ซี เอช ,siramornpun weerapreeyakul &มีโซ , , , 2011 ) ดังนั้น
วัตถุประสงค์ของการศึกษานี้เพื่อประเมินผลการลด
อะคริลาไมด์ในมันฝรั่งทอดผ่านการแช่ในสารสกัดจากพืชป่า
หลากหลายเช่นออริกาโน , โหระพา , อบเชย , เฟื่องฟ้า และชาเขียว
.
2 วัสดุและวิธีการ
2.1 . สารเคมี
1,1-diphenyl-2-picrilhydrazil ( dpph ) folineciocalteu รีเอเจนต์
อะคริลาไมด์ ( 99% )L - กรดแอสคอร์บิค ( 99.8% ) และเพิ่มขึ้น l-glucose
ได้มาจาก sigmaealdrich ( เม็กซิโก ) สารเคมีและตัวทำละลายของเกรดวิเคราะห์
.
2.2 . วัตถุดิบ
แห้ง พืชที่ใช้ , ป่า , โหระพาออริกาโน ( Origanum vulgare )
( ต่อมไทมัส vulgaris ) อบเชย ( Cinnamomum verum ) เฟื่องฟ้า ( Bougainvillea
spp ) และชาเขียว ( ต้นชา ) เป็นเครื่องหมายการค้า catarinos
และ La Merced ,ซื้อในซูเปอร์มาร์เก็ตท้องถิ่น
.
2.3 การเตรียมสารสกัด
50 กรัมของแต่ละบริการของพืชบดโดยใช้
เครื่องปั่นเบ้าตา ( maxq , เทอร์โมวิทยาศาสตร์ , USA ) ที่ความเร็วรอบ 200 รอบต่อนาทีกับ
200 มล. น้ำกลั่นที่ 60 C ในช่วง 24 ชั่วโมง แล้วกรองด้วย whatman
1 กระดาษกรอง สารสกัดถูกแช่แข็งด้วยไนโตรเจนเหลวและแห้ง
( เป็น ) 1e2 กรัมผง )
( ไลโอฟิไลเซอร์แล็บคอนโก้ 4.5 ลิตร แคนซัส สหรัฐอเมริกา ) สำหรับการวิเคราะห์ที่ตามมา 2.4 . การวิเคราะห์สารสกัดสารต้านอนุมูลอิสระ
เครื่องมือกำจัดเพื่อย้าย . 1,1-diphenyl-2-picrilhydrazil ( dpph )
ความสามารถในการจับอนุมูลอิสระ ตั้งใจใช้
1,1-diphenyl-2-picrilhydrazil หัวรุนแรง ( dpph ) ( ตรา วิลเลียมส์ คว เลอร์&
, berset , 1995 ) 0.1 มล. ความเข้มข้น 1 มิลลิกรัม / ลิตร
จากตัวอย่างในเมทานอล , 29 มิลลิลิตรของสารละลายเมทานอล
dpph ( 36 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรและเพิ่มส่วนผสมที่ถูกเขย่าอย่างแรง .
หลอดอยู่ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 นาที ก่อนวัดค่าการดูดกลืนแสงที่
517 nm กับ uvevis
Spectrophotometer ( แครี่ 100 , เครื่อง , พาโลอัลโต แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) หาที่ซ้ำกันได้ในนี้
.
2.4.2 . วิเคราะห์ปริมาณสารประกอบฟีนอล
การรวมปริมาณของสารประกอบฟีนอลด้วย foline
ciocalteau 7.4 ปฏิกิริยาที่ใช้วิธีการ Spanos
และ wrolstad ( 1990 ) 50 ml ของกลุ่มตัวอย่าง ( 1 mg / mL ละลาย
ในน้ำกลั่น , 2.5 ml ของ folineciocalteu Reagent ( เจือจาง 1 : 10 ) และ 2 ml ของ Na2CO3 ( 75 % p / V ) เพิ่มส่วนผสม
บ่มที่อุณหภูมิ 45 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 15 นาที absorbancewas วัดที่ 765 nm
กับ uvevis Spectrophotometer ( แครี่ 100 , เครื่อง , พาโลอัลโต , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา ,
) ผลลัพธ์สุดท้ายถูกแสดงเป็นเทียบเท่าไมโครกรัมของกรดแกลลิค
ต่อไมโครกรัมของน้ำหนักแห้ง ( มก. / mg dw EAG ) โดยสอดแทรก
จากเส้นปรับเทียบกับช่วงของ 20e1000 มิลลิกรัม / มิลลิลิตรของกรดแกลลิค
( Y ¼ 0.0011x þ 0.0688 อาร์ทู¼ 0.9835 ) .
2.4.3 . ร้อยละของการลดใช้พลังงาน
ความตั้งใจของการลดใช้พลังงานร้อยละา
ตามวิธีการของ oyaizu ( 1986 ) กับ 0.125 มล.
ตัวอย่างที่ระดับความเข้มข้น 1 มก. / มล. 1.25 มล.
ฟอสเฟตบัฟเฟอร์ ( 200 มม. , pH 6.6 ) และ 1.25 กรัมโพแทสเซียมเฟอร์ริกไซนาไนด์ ( 1% )
เพิ่ม ส่วนผสม บ่มที่อุณหภูมิ 50 C เป็นเวลา 20 นาทีจากนั้น
1.25 มล. 10 % trichloracetic กรดถูกเพิ่มลงในส่วนผสม ซึ่ง
คือระดับที่ 650 กรัม 10 นาทีเป็นส่วนลงตัวของ 2.5 มล. ถ่าย
2.5 มล. น้ำกลั่นและ 0.5 มิลลิลิตร เฟอร์ริค คลอไรด์เพิ่มขึ้น และค่า
วัดที่ 700 nm กับ uvevis Spectrophotometer
( - 100 , เครื่อง , พาโลอัลโต แคลิฟอร์เนีย สหรัฐอเมริกา ) ผลลัพธ์ที่ได้รายงานเป็นร้อยละของ
ลดพลังงาน การดูดกลืนแสงของ
วิตามินซีความเข้มข้น 1 มก. / มล. ถือว่า 100%
สำหรับการอ้างอิง .
2.5 การเตรียมการและการวิเคราะห์ของฝรั่ง
ดาวน์โหลด . เตรียมมันฝรั่ง
ในการทดลองใช้ 10 กก. tuberosum
L . var . แอตแลนติกมันฝรั่งโซลานัม ได้จากตลาดท้องถิ่น มันฝรั่งถูก
ล้างและฆ่าเชื้อ เปลือยถูกหามออกด้วยเครื่องปอก
แรงเสียดทานและถูกลบออกจุดสีดำหรือสีเขียว มันฝรั่งหั่นเป็นชิ้นประมาณ 1.5
หนา 0.2 มม.ด้วยเครื่องตัดด้วยมือ
หลังจากตัวอย่าง ภายใต้การรักษาแช่สารสกัดสารต้านอนุมูลอิสระ
แล้วทอดและทันทีหลังจากที่สารต้านอนุมูลอิสระ
และค่าเปอร์ออกไซด์ข้อมูล งานวาง . ปริมาณรวมของการลดน้ำตาลและความเป็นกรดในมันฝรั่ง
ปริมาณรวมลดน้ำตาลได้ผ่านวิธี Colorimetric
เสนอโดย somogyi และ Norton
( 1952 )ช่วงลดน้ำตาลใน สารสกัด ตนชี้แจง
เป็นครั้งแรกที่ดำเนินการ นี้ถูกทำโดยการเพิ่ม 1.0 มิลลิลิตรของสารสกัด
1 g / L ) 0.9 ml ย่อยอะซิเตทตะกั่ว 1.5 M / L ของไขมันอิ่มตัว โซเดียม
สารละลายซัลเฟต 0.15 มิลลิลิตรของกรดแอซีติกและ 0.12 มล. สังกะสีอะซิเตท
และโพแทสเซียมเฟอร์โรไซยาเนท . ส่วนผสมนี้อยู่ที่ระดับ
5 นาทีและลดปริมาณน้ำตาลในน่าน
กำหนดโดยการแก้ไขจากรูปโค้งของ l-glucose
( 10e100 mg / ml ) ( Y ¼ 0.0082x þ 0.0649 อาร์ทู¼ 0.9979 ) พีเอชมิเตอร์วัดการใช้
ตามวิธี 943.02 ( โปรตีน , 1998 ) .
2.5.3 . การสกัด , การระบุและปริมาณของอะคริลาไมด์
การสกัดได้ ด้วยเทคนิคการนำเสนอด้วย
biedermann et al . ( 2002 ) สารสกัดที่ได้จาก 2.0 มิลลิลิตรของแต่ละ
ตัวอย่างถูกฉีดซ้ำ แก๊สโครมาโตกราฟ ( เครื่องหมายการค้า
Hewlett Packard , รูปแบบ 1800b LCD , ระบบ , ซานตาคลารา , แคลิฟอร์เนีย , สหรัฐอเมริกา ,
) พร้อมกับคอลัมน์ cp-wax 52cb ( ไร้ )
( 60 เมตร 0.25 มม. 0.25 มม. ) ใช้สำหรับการวิเคราะห์ เริ่มต้น
อุณหภูมิ 80 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5 นาที ไว้และต่อมาเพิ่มขึ้นเป็น 250 C ใช้ทางลาดความร้อน 30 C / นาที อุณหภูมินี้ไว้ 15 นาทีแล้ว
ฮีเลียมถูกใช้เป็นแก๊สตัวพาในการไหลของหัวฉีด 1 มิลลิลิตร / นาที ; อุณหภูมิ
250 C ด้วยการฉีดแยก น้อยกว่า และการกวาดล้างเวลา 1 นาที
มวลสเปกตรัมได้ผ่านไออิเล็กทรอนิกส์
โดยผลกระทบ ( EI ) ที่ 70 ปีที่ . ข้อมูลเพิ่มเติมได้ในโหมดซิม
, ตรวจสอบไอออนเป็น M / Z 71 และ 44 เมื่อกลิ่น
ได้รับ การกระทำโดย
เปรียบเทียบมวลจะมีค่า HP กับฐานข้อมูล
chemstation NIST 05 มวลการค้นหาโปรแกรม 2.0d รุ่น .
พวกเขาถูกเมื่อเทียบกับมาตรฐานของอะคริลาไมด์วิเคราะห์
ภายใต้เงื่อนไขเดียวกันสำหรับปริมาณ เป็นรูปโค้ง
กับช่วงของ 0.010e50 mg / ml ( Y ¼ 38465x þ 2751.4 อาร์ทู¼ 0.9977 )
ถูกพัฒนาขึ้น
การแปล กรุณารอสักครู่..
ภาษาอื่น ๆ
การสนับสนุนเครื่องมือแปลภาษา: กรีก, กันนาดา, กาลิเชียน, คลิงออน, คอร์สิกา, คาซัค, คาตาลัน, คินยารวันดา, คีร์กิซ, คุชราต, จอร์เจีย, จีน, จีนดั้งเดิม, ชวา, ชิเชวา, ซามัว, ซีบัวโน, ซุนดา, ซูลู, ญี่ปุ่น, ดัตช์, ตรวจหาภาษา, ตุรกี, ทมิฬ, ทาจิก, ทาทาร์, นอร์เวย์, บอสเนีย, บัลแกเรีย, บาสก์, ปัญจาป, ฝรั่งเศส, พาชตู, ฟริเชียน, ฟินแลนด์, ฟิลิปปินส์, ภาษาอินโดนีเซี, มองโกเลีย, มัลทีส, มาซีโดเนีย, มาราฐี, มาลากาซี, มาลายาลัม, มาเลย์, ม้ง, ยิดดิช, ยูเครน, รัสเซีย, ละติน, ลักเซมเบิร์ก, ลัตเวีย, ลาว, ลิทัวเนีย, สวาฮิลี, สวีเดน, สิงหล, สินธี, สเปน, สโลวัก, สโลวีเนีย, อังกฤษ, อัมฮาริก, อาร์เซอร์ไบจัน, อาร์เมเนีย, อาหรับ, อิกโบ, อิตาลี, อุยกูร์, อุสเบกิสถาน, อูรดู, ฮังการี, ฮัวซา, ฮาวาย, ฮินดี, ฮีบรู, เกลิกสกอต, เกาหลี, เขมร, เคิร์ด, เช็ก, เซอร์เบียน, เซโซโท, เดนมาร์ก, เตลูกู, เติร์กเมน, เนปาล, เบงกอล, เบลารุส, เปอร์เซีย, เมารี, เมียนมา (พม่า), เยอรมัน, เวลส์, เวียดนาม, เอสเปอแรนโต, เอสโทเนีย, เฮติครีโอล, แอฟริกา, แอลเบเนีย, โคซา, โครเอเชีย, โชนา, โซมาลี, โปรตุเกส, โปแลนด์, โยรูบา, โรมาเนีย, โอเดีย (โอริยา), ไทย, ไอซ์แลนด์, ไอร์แลนด์, การแปลภาษา.
- Uhmmm maybe you should talk about it to
- เพราะฉันยังไม่เคยชินกับการทักทายแบบนี้
- โทรศัพท์เธอพัง
- punctuation
- อาจจะไม่ตรงกับที่คุณต้องการ
- QUALIFICATIONS- Bachelor of Science majo
- และอาหารสำหรับแมว
- เครื่องตวงของเหลว
- student life
- Fourteen
- i miss you too and so much now
- งบกำไรขาดทุน
- และไปทำบุญ
- ขอทาง
- หลีก
- ดอกบัว
- a kitchen, a bathroom and a separate toi
- Hotel-Dieu in Paris, a hospital operated
- ตอนนี้ลูกสาวแม่เล่นอยู่
- Every thing is good for me
- Postal Code
- Frank Lloyd Wright is a diligent person
- specification
- theory
