Confluent monolayers of MDCK cells

Confluent monolayers of MDCK cells (6-well plate format, 106 cells/well) were infected with WT or fluorescent-expressing IBVs for 1 h at room temperature, overlaid with agar and incubated at 33 : c. Three days post-infection, cells were fixed overnight with 4% paraformaldehyde (PFA), and the overlays were removed. For visualization of mCherry, PBS was added and plates were imaged with a Kodak image station (4000MM Pro molecular imaging sys¬tem; Carestream Health, Inc., NY) (Nogales et al„ 2014a) and Kodak molecular imaging software (v5.0.1.30). Plates were then perme- abilized (0.5% Triton X-l 00 in PBS for 15 min at room temperature) and prepared for immunostaining as previously described (Nogales et al„ 2014a) using the anti IBVNP MAb B017 and vector kits (Vec- tastain ABC kit and DAB HRP Substrate Kit: Vector), according to manufacturer’s specifications.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

Monolayers confluent เซลล์ MDCK (รูปแบบแผ่นดี 6, 106 เซลล์/ดี) ถูกติด WT หรือ IBVs แสดงฟลูออเรสเซนต์สำหรับ 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้อง วางทับ ด้วยอาหาร และได้รับการกกที่ 33: c สามวันหลังติดเชื้อ เซลล์ที่คงค้างคืนกับ paraformaldehyde 4% (PFA), และการซ้อนทับถูกเอาออก สำหรับการแสดงของ mCherry, PBS เพิ่ม และแผ่นถูกถ่ายภาพกับสถานีภาพ Kodak (4000MM Pro โมเลกุลภาพ sys¬tem สุขภาพ Carestream, Inc., NY) (Nogales et al " 2014a) และโกดักโมเลกุลภาพซอฟต์แวร์ (v5.0.1.30) แผ่นได้แล้ว perme-abilized (0.5% X ของไทรทัน-l 00 ใน PBS 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง) และเตรียมไว้สำหรับ immunostaining ที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Nogales et al " 2014a) ใช้ป้องกัน B017 มาบ IBVNP และเวกเตอร์ชุด (ชุด ABC ส่วน tastain และบคอ HRP พื้นชุด: เวกเตอร์), ตามข้อกำหนดของผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

monolayers ไหลมารวมกันของเซลล์ MDCK (6 ดีรูปแบบแผ่น 106 เซลล์ / ดี) มีการติดเชื้อหรือ IBVs WT-เรืองแสงการแสดงเป็นเวลา 1 ชั่วโมงที่อุณหภูมิห้องบุด้วยวุ้นและบ่มที่ 33: C สามวันหลังการติดเชื้อเซลล์ได้รับการแก้ไขค้างคืนกับ 4% paraformaldehyde (PFA) และภาพซ้อนทับถูกถอดออก สำหรับการแสดงของ mCherry พีบีเอสถูกบันทึกและแผ่นถูกถ่ายภาพกับสถานีภาพ Kodak (4000MM Pro sys¬temถ่ายภาพระดับโมเลกุล; Carestream สุขภาพ, Inc NY) (Nogales et al, "2014a) และซอฟต์แวร์การถ่ายภาพ Kodak โมเลกุล (v5.0.1 0.30) แผ่นถูกแล้ว perme- abilized (0.5% Triton Xl 00 ในพีบีเอสเป็นเวลา 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง) และเตรียมพร้อมสำหรับการ immunostaining ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ (Nogales et al, "2014a) โดยใช้ต่อต้าน IBVNP แอนติบอดี B017 และเวกเตอร์ชุด (Vec- tastain ชุดเอบีซี และป้าย HRP พื้นผิว Kit: เวกเตอร์) ตามข้อกำหนดของผู้ผลิต

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

กระจู๋กระจี๋ monolayers ของ mdck เซลล์ ( รูปแบบ , แผ่น 6-well 106 เซลล์ / ดี ) ติดเชื้อ WT หรือเรืองแสงแสดง ibvs เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ที่อุณหภูมิห้อง หุ้มด้วยวุ้น และบ่มที่อุณหภูมิ 33 : C . 3 วันหลังการติดเชื้อ เซลล์ได้คงค้างคืนด้วย 4% พาราฟอร์มาลดิไฮด์ ( พีเอฟเอ ) และทับออก สำหรับการแสดงผลของ mcherry พีบีเอส ได้เพิ่ม และ จานมีภาพลักษณ์สถานีภาพโกดัก ( 4000mm Pro โมเลกุลภาพ SYS ¬ TEM ; carestream สุขภาพ ( NY ) ( โนกาเลส et al „ 2014a ) และซอฟต์แวร์ภาพ Kodak โมเลกุล ( v5.0.1.30 ) แผ่นแล้ว perme - abilized ( 0.5% Triton x-l 00 ใน PBS 15 นาทีที่อุณหภูมิห้อง ) และเตรียม immunostaining ตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ ( โนกาเลส et al „ 2014a ) ใช้ป้องกัน ibvnp มาบ b017 และเวกเตอร์ชุดโลกร้อน - tastain ABC และชุด : ชุดฐานรอง HRP ป้ายเวกเตอร์ ) ตามข้อกำหนดของผู้ผลิต .