Gordonia polyisoprenivorans strain

Gordonia polyisoprenivorans strain VH2, a potent rubber-degrading actinomycete, harbors two latex clearing proteins (Lcp) which are known to be essential for the microbial degradation of rubber. However, biochemical information on the exact role of this protein in the degradation of polyisoprene was lacking, yet. In this study, the gene of Lcp1VH2 was heterologously expressed in strains of Escherichia coli, the corresponding protein was purified and its role in rubber degradation was examined by measurement of oxygen consumption as well as by chromatographic and spectroscopic methods. It turned out that active Lcp1VH2 is a monomer and responsible for the oxidative cleavage of poly(cis-1,4-isoprene) in synthetic as well as in natural rubber by the addition of oxygen (O2) to the cis-double bonds. The resulting oligomers possess repetitive isoprene units with aldehyde (CHO-CH2—-) and ketone (—-CH2-CO-CH3) functional groups at the termini. Two fractions with average isoprene contents of 18 and 10, respectively, were isolated, thus indicating an endocleavage mechanism. The activity of Lcp1VH2 was determined by applying a polarographic assay. Alkenes, acyclic terpenes or other rubber-like polymers such as poly(cis-1,4-butadiene) or poly(trans-1,4-isoprene) are not oxidatively cleaved by Lcp1VH2. The pH and temperature optima of the enzyme are at 7 and 30°C, respectively. Furthermore, it was demonstrated that active Lcp1VH2 is a Cu(II)-containing oxygenase that exhibits a conserved domain of unknown function which cannot be detected in any other hitherto characterized enzyme. The results presented here indicate that this domain might represent a new protein family of oxygenases.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ต้องใช้ polyisoprenivorans Gordonia VH2 การมีศักยภาพลดยาง actinomycete แผ่นดินใหญ่สองหักยางโปรตีน (Lcp) ซึ่งต้องมีสิ่งจำเป็นสำหรับการย่อยสลายจุลินทรีย์ของยาง อย่างไรก็ตาม ข้อมูลชีวเคมีแน่นอนบทบาทนี้โปรตีนย่อยสลายของ polyisoprene มีขาด ยัง ในการศึกษานี้ ยีนของ Lcp1VH2 heterologously ได้แสดงในสายพันธุ์ของ Escherichia coli ที่บริสุทธิ์โปรตีนที่เกี่ยวข้อง และบทบาทของมันในการลดประสิทธิภาพของยางถูกตรวจสอบ โดยการวัดปริมาณการใช้ออกซิเจน เป็น chromatographic และด้านวิธีการ จะเปิดออกว่า Lcp1VH2 ใช้น้ำยา และชอบปริ oxidative ของ poly(cis-1,4-isoprene) ในหนังสังเคราะห์เช่นขณะที่อยู่ในยางธรรมชาติโดยการเพิ่มออกซิเจน (O2) กับพันธบัตรล่วงหน้าคู่ Oligomers ผลลัพธ์มีหน่วย isoprene ซ้ำกับแอลดีไฮด์ (ช่อ-CH2 – -) และจุด (— - CH2 - CO-CH3) กลุ่ม functional ที่เทอร์มินิ ส่วนที่สอง มีเนื้อหาเฉลี่ย isoprene 18 และ 10 ตามลำดับ ได้แยก จึง แสดงกลไกการ endocleavage กิจกรรมของ Lcp1VH2 ที่ถูกกำหนด โดยใช้ทดสอบ polarographic Alkenes, acyclic terpenes หรือโพลิเมอร์เช่นยางอื่น ๆ เช่น poly(cis-1,4-butadiene) หรือ poly(trans-1,4-isoprene) จะไม่ oxidatively แหวก โดย Lcp1VH2 พติอุณหภูมิและค่า pH ของเอนไซม์ 7 และ 30 ° C ตามลำดับ นอกจากนี้ มันถูกแสดงว่า Lcp1VH2 ที่ใช้งานอยู่ประกอบด้วย Cu II oxygenase ซึ่งจัดแสดงนำโดเมนของฟังก์ชันที่ไม่รู้จักซึ่งไม่พบในอีกลักษณะเอนไซม์มาจนบัด ผลลัพธ์ที่แสดงที่นี่บ่งชี้ว่า โดเมนนี้อาจแสดงถึงครอบครัวโปรตีนใหม่ของ oxygenases

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

Gordonia สายพันธุ์ polyisoprenivorans VH2, actinomycete ยางย่อยสลายที่มีศักยภาพการคุ้มกันอย่างแน่นหนาสองโปรตีนล้างน้ำยางข้น (LCP) ซึ่งเป็นที่รู้จักกันจะเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการย่อยสลายของจุลินทรีย์ยาง อย่างไรก็ตามข้อมูลทางชีวเคมีในบทบาทที่แน่นอนของโปรตีนในการย่อยสลายของ polyisoprene นี้ขาด แต่ ในการศึกษานี้ยีนของ Lcp1VH2 ได้แสดงออก heterologously ในสายพันธุ์ของเชื้อ Escherichia coli, โปรตีนที่สอดคล้องบริสุทธิ์และบทบาทในการย่อยสลายยางได้รับการตรวจสอบโดยการวัดการใช้ออกซิเจนเช่นเดียวกับวิธีโครมาและสเปกโทรสโก มันกลับกลายเป็นว่า Lcp1VH2 ใช้งานเป็นโมโนเมอร์และผู้รับผิดชอบต่อความแตกแยกออกซิเดชันของโพลี (CIS-1,4-isoprene) ในสังเคราะห์เช่นเดียวกับในยางธรรมชาติโดยการเติมออกซิเจน (O2) ในการออกพันธบัตร CIS คู่ oligomers ผลมีหน่วย isoprene ซ้ำกับลดีไฮด์ (CHO-CH2--) และคีโตน (--CH2-CO-CH3) การทำงานเป็นกลุ่มที่ปลายทาง สองเศษส่วนที่มีเนื้อหา isoprene เฉลี่ยของ 18 และ 10 ตามลำดับที่แยกได้จึงแสดงให้เห็นกลไก endocleavage กิจกรรมของ Lcp1VH2 ถูกกำหนดโดยใช้การทดสอบโพลาโรกราฟิก แอลคีน, terpenes วัฏจักรหรือโพลีเมอยางเหมือนอื่น ๆ เช่นโพลี (CIS-1,4-Butadiene) หรือโพลี (ทรานส์ 1,4-isoprene) จะไม่ตัดออกซิเจนโดย Lcp1VH2 พีเอชและอุณหภูมิที่ดีที่สุดของเอนไซม์อยู่ที่ 7 และ 30 องศาเซลเซียสตามลำดับ นอกจากนี้มันก็แสดงให้เห็นว่า Lcp1VH2 ที่ใช้งานอยู่ Cu (II) -containing oxygenase ที่แสดงโดเมนอนุรักษ์ของฟังก์ชั่นที่ไม่รู้จักที่ไม่สามารถตรวจพบในบัดนี้อื่น ๆ ที่มีลักษณะการทำงานของเอนไซม์ ผลการนำเสนอที่นี่แสดงให้เห็นว่าโดเมนนี้อาจเป็นตัวแทนของครอบครัวโปรตีนใหม่ของ oxygenases

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

gordonia polyisoprenivorans เมื่อย vh2 ส่วนต้ายางทำให้น้ำยางล้างโปรตีนแอคติโนมัยซีท , ท่าเรือสอง ( LCP ) ซึ่งเป็นที่รู้จักกันเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการย่อยสลายของยาง อย่างไรก็ตาม ข้อมูลทางชีวเคมีในบทบาทที่แน่นอนของโปรตีนนี้ในการสลายตัวของพอลิไอโซพรีนขาดเลย ในการศึกษานี้ยีนของ lcp1vh2 คือ heterologously แสดงออกในเชื้อ Escherichia coli โปรตีนที่บริสุทธิ์และบทบาทในการย่อยสลายยางถูกตรวจสอบโดยการวัดปริมาณการใช้ออกซิเจนเช่นเดียวกับโครมและวิธีทางสเปกโทรสโกปี มันเปิดออกที่ปราดเปรียว lcp1vh2 เป็นมอนอเมอร์ และรับผิดชอบต่อปฏิกิริยาการ cis-1 พอลิ ,4-isoprene ) สังเคราะห์เช่นเดียวกับยางพารา โดยการเพิ่มออกซิเจน ( O2 ) CIS คู่พันธบัตร ส่งผลให้หน่วยมีหน่วยไอโซพรีน ( cho-ch2 ซ้ำกับอัลดีไฮด์คีโตน ( -- -- ) และ ch2-co-ch3 ) หมู่ฟังก์ชันที่ แทร์มินี่ . สองเศษส่วน โดยเฉลี่ยนเนื้อหาของ 18 และ 10 ตามลำดับ แยกได้ จึงแสดง endocleavage กลไกกิจกรรมของ lcp1vh2 ถูกกำหนดโดยการใช้วิธีของโพลาโรกราฟฟี่ . แอลคีนเทอร์ปีนส์ หว่า , หรืออื่น ๆเช่น ยาง เช่น พอลิเมอร์พอลิ cis-1,4-butadiene ) หรือโพลี ( trans-1,4-isoprene ) ไม่ oxidatively ตัดทอนโดย lcp1vh2 . pH และอุณหภูมิของเอนไซม์ Optima ที่ 7 และ 30 ° C ตามลำดับ นอกจากนี้มันแสดงให้เห็นว่างาน lcp1vh2 เป็น Cu ( II ) ที่มี oxygenase ที่จัดแสดงเพื่อโดเมนของฟังก์ชันที่ไม่รู้จัก ซึ่งไม่สามารถตรวจพบได้ในใด ๆอื่น ๆ นี้ลักษณะ เอนไซม์ ผลการทดลองนี้บ่งชี้ว่า โดเมนนี้อาจเป็นตัวแทนของครอบครัวของโปรตีนใหม่ของ oxygenases .