Western blotting was performed as d

Western blotting was performed as described previously [21]. Proteins prepared in
Laemmli buffer were separated by SDS-PAGE, then transferred to PVDF membranes
(Bio-Rad Laboratories, USA) and blocked in 3% BSA. Membranes were probed with the
following primary antibodies. Total- and phospho-cJUN, glyceraldehyde 3-phosphate
dehydrogenase (GAPDH), total- and phospho-eukaryotic initiation factor 2α (eIF2α),
total- and phospho-AMP-activated protein kinase (AMPK), sirtuin 1 (Sirt1), total- and
phospho-acetyl-CoA carboxylase (ACC) and glucose-regulated protein 78 kDa (GRP78)
antibodies were purchased from Cell Signaling (USA). Total- and phospho-inositolrequiring
kinase 1 (IRE1) antibodies were obtained from Abcam (UK). C/EBP
homologous protein (CHOP) antibody was purchased from Santa Cruz (USA). Western
blot membranes were incubated with secondary antibodies from Santa Cruz (USA) that
were conjugated to horseradish peroxidase (HRP) and developed using enhanced
chemiluminescence HRP substrate from Perkin Elmer (USA). Images of the membranes
were taken with the ChemiDoc system and densitometry analysis was performed using
Image Lab software (Bio-Rad Laboratories, USA).

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เวสเทิร์น blotting วิธีดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [21] โปรตีนในLaemmli บัฟเฟอร์ถูกคั่น ด้วย SDS-หน้า จาก นั้นโอนย้ายไปเยื่อ PVDF(เชื้อ สหรัฐอเมริกา) และถูกบล็อคใน 3% บีเอสเอ เยื่อหุ้มถูกพิสูจน์ด้วยการต่อแอนติบอดีหลัก รวม - และ phospho-cJUN, glyceraldehyde 3-ฟอสเฟตพร่อง (GAPDH), รวม - และ phospho-eukaryotic เริ่มต้นปัจจัย 2α (eIF2α),รวม และ phospho-แอมป์ใช้โปรตีนไคเนสรี (AMPK), sirtuin 1 (Sirt1), รวม - และcarboxylase phospho-acetyl-CoA (ACC) และควบคุมกลูโคสโปรตีน 78 kDa (GRP78)แอนตี้ถูกซื้อจากเซลล์ส่งสัญญาณ (สหรัฐอเมริกา) รวม และ phospho-inositolrequiringไคเนสรี 1 (IRE1) แอนติบอดีที่ได้รับจาก Abcam (UK) C/EBPเซทจะมีโปรตีน (ชบ) แอนติบอดีถูกซื้อจากซานตาครูซ (สหรัฐอเมริกา) ตะวันตกน้าเยื่อได้รับการกกกับแอนติบอดีรองจากซานตาครูซ (สหรัฐอเมริกา) ที่ถูกผันฮอสดิช (HRP) และใช้พัฒนาปรับปรุงchemiluminescence HRP พื้นจากเพอร์เอลเมอ (สหรัฐอเมริกา) ภาพของเยื่อหุ้มถ่าย ด้วย ChemiDoc ที่ทำการวิเคราะห์ระบบและชมีความหนาแน่นโดยใช้ภาพห้องปฏิบัติการซอฟต์แวร์ (เชื้อ สหรัฐอเมริกา)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ซับตะวันตกได้ดำเนินการตามที่อธิบายไว้ก่อนหน้านี้ [21] โปรตีนเตรียมใน
Laemmli บัฟเฟอร์ถูกแยกออกโดยวิธี SDS-PAGE แล้วโอนไปยังเยื่อ PVDF
(Bio-Rad ห้องปฏิบัติการ, สหรัฐอเมริกา) และบล็อกใน 3% บีเอสเอ เยื่อถูกตรวจสอบกับ
แอนติบอดีหลักดังต่อไปนี้ Total- และ phospho-cJUN, glyceraldehyde 3 ฟอสเฟต
dehydrogenase (GAPDH) total- และ phospho-eukaryotic ปัจจัยเริ่มต้น2α (eIF2α)
total- และ phospho แอมป์ที่ทำงานโดยใช้โปรตีนไคเนส (AMPK) sirtuin 1 (SIRT1) ทั้งหมด - และ
phospho-acetyl-CoA คาร์บอกซิ (ACC) และระดับน้ำตาลในเลือดควบคุมโปรตีน 78 กิโลดาลตัน (GRP78)
แอนติบอดีที่ซื้อมาจากมือถือส่งสัญญาณ (USA) Total- และ phospho-inositolrequiring
ไคเนส 1 (IRE1) แอนติบอดีที่ได้รับจาก Abcam (สหราชอาณาจักร) C / EBP
โปรตีนคล้ายคลึงกัน (CHOP) แอนติบอดีซื้อมาจากซานตาครูซ (USA) เวสเทิร์
เยื่อ blot ถูกบ่มกับแอนติบอดีรองจากซานตาครูซ (USA) ที่
ถูกผันไปมะรุม peroxidase (HRP) และการพัฒนาโดยใช้การปรับปรุง
พื้นผิว chemiluminescence HRP จาก Perkin Elmer (USA) ภาพของเยื่อ
ถูกถ่ายด้วยระบบการวิเคราะห์และ ChemiDoc densitometry ถูกดำเนินการโดยใช้
ซอฟต์แวร์แล็บ (Bio-Rad ห้องปฏิบัติการ, สหรัฐอเมริกา)