Actin cytoskeleton modulates calciu

Actin cytoskeleton modulates calcium signaling during maturation of starfish oocytes
Keiichiro Kyozuka
a
, Jong T. Chun
b
, Agostina Puppo
b
, Gianni Gragnaniello
b
, Ezio Garante
b
, Luigia Santella
b, ⁎
a
Research Center for Marine Biology, Asamushi, Tohoku University, 039-3501 Japan
b
Laboratory of Cell Signaling, Stazione Zoologica Anton Dohrn, Villa Comunale, Napoli, I-80121, Italy
a b s t r a c t a r t i c l e i n f o
Article history:
Received for publication 17 August 2007
Revised 23 May 2008
Accepted 27 May 2008
Available online 6 June 2008
Keywords:
Starfish
Oocyte
1-methyladenine
Actin
Cytoskeleton
InsP 3
Heparin
U73122
Cortical granule exocytosis
Meiosis
Before successful fertilization can occur, oocytes must undergo meiotic maturation. In starfish, this can be
achieved in vitro by applying 1-methyladenine (1-MA). The immediate response to 1-MA is the fast Ca
2+
release in the cell cortex. Here, we show that this Ca
2+
wave always initiates in the vegetal hemisphere and
propagates through the cortex, which is the space immediately under the plasma membrane. We have
observed that alteration of the cortical actin cytoskeleton by latrunculin-A and jasplakinolide can potently
affect the Ca
2+
waves triggered by 1-MA. This indicates that the cortical actin cytoskeleton modulates Ca
2+
release during meiotic maturation. The Ca
2+
wave was inhibited by the classical antagonists of the InsP 3 -
linked Ca
2+
signaling pathway, U73122 and heparin. To our surprise, however, these two inhibitors induced
remarkable actin hyper-polymerization in the cell cortex, suggesting that their inhibitory effect on Ca
2+
release may be attributed to the perturbation of the cortical actin cytoskeleton. In post-meiotic eggs, U73122
and jasplakinolide blocked the elevation of the vitelline layer by uncaged InsP 3 , despite the massive release of
Ca
2+
, implying that exocytosis of the cortical granules requires not only a Ca
2+
rise, but also regulation of the
cortical actin cytoskeleton. Our results suggest that the cortical actin cytoskeleton of starfish oocytes plays
critical roles both in generating Ca
2+
signals and in regulating cortical granule exocytosis.
© 2008 Elsevier Inc. All rights reserved.
Introduction
During oogenesis, both the growth and the differentiation of
starfish oocytes are arrested at first meiotic prophase (reviewed in
Meijer and Guerrier 1984). To become capable of fertilization, oocytes
of all animals must overcome the arrest and activate meiotic
maturation. The availability of large numbers of synchronized oocytes
makes the starfish an excellent experimental model system for
studying meiotic maturation. Previous studies have shown that
immature starfish oocytes exhibit polarized cell morphology. First,
the large nucleus (the germinal vesicle, or GV) is located close to the
plasma membrane of the animal hemisphere. The cytoskeletal
organization of the animal pole is quite different from that of the
other regions in that the F-actin layer is missing in the space between
the GV and the plasma membrane. Indeed, it is through this “corridor”
that the two polar bodies are extruded during the two reduction
divisions which are the visual display of oocyte maturation. Second,
the cortical region of the oocyte differs from the inner cytoplasm in
that actin filaments are ordered in a cluster just beneath the plasma
membrane forming a cortical cytoskeletal layer. In addition, the
cortical region is crowded with numerous membrane-bound vesicles
filled with stratified contents (Schroeder, 1985). Because of the
presence of actin-binding proteins that polymerize or depolymerize
actin filaments, the cortical actin cytoskeleton is in a dynamic
equilibrium.
The hormone that induces maturation of starfish oocytes is 1-
methyladenine (1-MA) (Kanatani et al., 1969). When oocytes are
exposed to 1-MA, a series of cytological changes occur. Scanning EM
and immunofluorescence microscopy have established that 1-MA
immediately stimulates the transient appearance of prominent
microvilli on the oocyte surface caused by the rapid assembly and
disassembly of the filamentous actin bundles in their inner cores
(Schroeder, 1981; Schroeder and Stricker, 1983; Otto and Schroeder,
1984). This is a fast response that occurs within 1 min after the
addition of 1-MA. An equally rapid change in response to 1-MA is
the quick release of intracellular Ca
2+
(Moreau et al., 1978; Santella
and Kyozuka 1994). Following these early events, 1-MA then induces
more extensive reorganization of cytoplasmic actin network and
drastic changes in the phosphorylation state of numerous proteins
(Labbé et al., 1989; Masui 2001; Prigent and Hunt, 2004). In parallel,
intracellular organelles such as the endoplasmic reticulum (ER)
undergo structural changes (Jaffe and Terasaki, 1994; Terasaki, 1994).
The final event of the maturation process is the breakdown of the
nuclear envelope of the GV. Owing to these cytoplasmic changes, the
Developmental Biology 320 (2008) 426–435
⁎ Corresponding author.
E-mail address: [e-mail] (L. Santella).
0012-1606/$ – see front matter © 2008 Elsevier Inc. All rights reserved.
doi:10.1016/j.ydbio.2008.05.549
Contents lists available at ScienceDirect
Developmental Biology
journal homepage: www.elsevier.com/developmentalbiology
post-meiotic eggs are ready for fertilization. The sperm-induced
intracellular Ca
2+
release can now occur more efficiently, and the
Ca
2+
-dependent exocytosis of cortical granules leads to the elevation
of the vitelline layer and its transformation into the fertilization
envelope, which aids in preventing polyspermy (Longo et al., 1995;
Santella et al., 1999).
Because both the Ca
2+
signals and the changes of cell surface actin
fibers are induced immediately after the initiation of the maturation
process, we were interested in studying the relationship between
these two events. We have recently observed that rearrangements of
the actin cytoskeleton by use of actin-depolymerizing agents, or actin-
binding proteins, can strongly modulate Ca
2+
signals during the
maturation and fertilization processes (Lim et al., 2002, 2003; Nusco et
al., 2006). In the present study, we have focused on the first event of
the Ca
2+
release that heralds the onset of meiotic maturation.
Previously, we had shown that this Ca
2+
signal starts at one point of
the oocyte surface (Santella et al., 2003). We have now localized the
initiation site of the Ca
2+
release to the oocyte's vegetal hemisphere.
Because the oocyte is uniformly exposed to 1-MA, it is remarkable that
the Ca
2+
signal invariably starts from only the vegetal pole. Interest-
ingly, we have noted that the path of the Ca
2+
wave propagation is
mainly through the cortical layer and not through the center of the
cytoplasmic mass. This observation, and the consideration of the
asymmetric molecular organization of oocytes, led us to ask whether
or not the cortical actin cytoskeleton plays an important role in
mobilizing intracellular Ca
2+
.
To address this question, we have investigated the spatiotem-
poral dynamics of the 1-MA-induced Ca
2+
signal by simultaneously
measuring the Ca
2+
response in six oocytes exposed to the hormone
for the same duration. To study how the Ca
2+
signaling pattern is
influenced by changes of the actin cytoskeleton, we used pharma-
cological agents that depolymerize or polymerize actin filaments,
e.g., latrunculin-A (LAT-A) and jasplakinolide (JAS), respectively.
These agents had strong inhibitory effects on the Ca
2+
signals
elicited by 1-MA, or by InsP 3 -uncaging, indicating that the Ca
2+
release process could be modulated by the cortical actin cytoske-
leton. To our surprise, we observed that even the classical inhibitors
of the InsP 3 -dependent Ca
2+
release pathway, U73122 and heparin,
also induced a remarkable increase of cortical actin filaments, while
they inhibited the 1-MA-linked Ca
2+
response. Hence, the actin
cytoskeleton is implicated in this inhibitory process. Finally, we have
demonstrated that the exocytosis of cortical granules requires not
only a massive release of Ca
2+
, but also the normal architecture of
the cortical cytoskeleton.
Materials and methods
Preparation of oocytes
Starfish (A. pectinifera) were captured in Mutzu Bay, Japan, during the breeding
season (September) and transported to the Stazione Zoologica in Naples, Italy. Animals
were maintained in circulating seawater at 16 °C. The gonads were dissected from the
central dorsal area near the arms and transferred to cold, filter-sterilized seawater
(FSW). Fully-grown immature oocytes were isolated as single cells by sieving through
gauze several times in cold FSW. Nearly all the oocytes released were arrested at meiotic
prophase I, as judged by the presence of the germinal vesicle. Free oocytes were isolated
by repeated rinsing and gentle hand centrifugation in cold FSW. For fertilization
experiments, immature oocytes were stimulated with 1 μM 1-MA in FSW for 1 h before
being exposed to spermatozoa suspended in FSW.
Microinjection, photoactivation of caged compounds and Ca
2+
imaging
Microinjection of oocytes was performed with an air-pressure Transjector
(Eppendorf). Typically, the amount of injected material was estimated at 1–2% of the
oocyte volume. Hence, the final concentration of the injected material inside the
oocytes should have been 50 to 100-fold lower than the concentration in the injection
pipette. The fluorescent calcium dye, Calcium Green 488, conjugated to 10 kDa dextran
was purchased from Molecular Probes (Eugene, Oregon) and used in 5 mg/ml pipette
concentration with the injection buffer (10 mM Hepes, pH 7.0, 100 mM potassium
aspartate). The same injection buffer was used for delivering heparin (Sigma-Aldrich)
and caged InsP 3 (Molecular Probes) by microinjection. Caged InsP 3 (5 μM pipette
concentration) was co-injected with the fluorescent Ca
2+
indicator into either immature
oocytes or matured eggs. To activate the cage

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ตามปกติในระหว่างพ่อแม่ของ starfish แช่สารละลายแคลเซียม modulates cytoskeleton แอกตินเคอิจิโร Kyozukaมี, Jong ต.ชุนบี, Agostina Puppoบี, Gianni Gragnanielloบี, Ezio Garanteบี, Luigia Santellab, ⁎มีศูนย์วิจัยชีววิทยาทางทะเล Asamushi มหาวิทยาลัยโทโฮคุ 039-3501 ญี่ปุ่นบีห้องปฏิบัติการของเซลล์ตามปกติ แอ Dohrn วิลล่า Comunale, Stazione Zoologica นโปลี ฉัน-80121 อิตาลีแบบ b s t r t c r t ฉัน c l e ฉัน n f oบทความประวัติ:รับตีพิมพ์วันที่ 17 2007 สิงหาคมแก้ไข 23 2551 พฤษภาคมยอมรับ 27 2551 พฤษภาคมมีออนไลน์ 6 2551 มิถุนายนคำสำคัญ:StarfishOocyte1-methyladenineแอกตินCytoskeletonInsP 3เฮพารินU73122Exocytosis เม็ดเนื้อแน่นไมโอซิสก่อนประสบความสำเร็จในการปฏิสนธิเกิดขึ้น แช่สารละลายต้องรับพ่อแม่ meiotic ใน starfish สามารถทำการเพาะเลี้ยง โดยใช้ 1-methyladenine (1-MA) การตอบสนองต่อทันที 1 MA เป็น Ca อย่างรวดเร็ว2 +ปล่อยในคอร์เทกซ์เซลล์ นี่ แสดงที่ Ca นี้2 +คลื่นเริ่มเสมอในซีกโลกเกิด และแพร่กระจายผ่านคอร์เทกซ์ ซึ่งเป็นเนื้อที่ภายใต้เยื่อพลาสมาทันที เรามีตรวจสอบการแก้ไขของ cytoskeleton แอกตินเนื้อแน่น โดย latrunculin A และ jasplakinolide สามารถ potentlyส่งผลกระทบต่อ Ca2 +คลื่นที่ถูกทริกเกอร์ โดย 1 MA บ่งชี้ว่า cytoskeleton แอกตินเนื้อแน่น modulates Ca2 +ปล่อยในระหว่างพ่อแม่ meiotic Ca2 +คลื่นถูกห้าม โดยตัวคลาสสิก 3 InsP-Ca ที่เชื่อมโยง2 +ตามปกติทางเดิน U73122 และเฮพาริน จะแปลกใจของเรา อย่างไรก็ตาม inhibitors สองเหล่านี้ทำให้เกิดไฮเปอร์แอกตินโดดเด่น-polymerization ในคอร์เทกซ์เซลล์ แนะนำที่ผลของลิปกลอสไข Ca2 +ออกอาจเกิดจาก perturbation ของ cytoskeleton แอกตินเนื้อแน่น ในไข่หลัง meiotic, U73122ความสูงของชั้น vitelline InsP 3 uncaged แม้จะเปิดตัวใหญ่ของทรัพยากร jasplakinolideCa2 +หน้าที่ที่ exocytosis เม็ดเนื้อแน่นต้องไม่เพียง Ca2 +เพิ่มขึ้น แต่ข้อบังคับของการcytoskeleton แอกตินเนื้อแน่น ผลของเราแนะนำว่า เล่น cytoskeleton แอกตินเนื้อแน่นของแช่สารละลาย starfishสำคัญบทบาททั้งในการสร้าง Ca2 +สัญญาณ และควบคุมในการ exocytosis เม็ดเนื้อแน่น© 2008 Elsevier อิงค์ สงวนลิขสิทธิ์ทั้งหมดแนะนำในระหว่างการสร้างไข่ การเจริญเติบโตและสร้างความแตกต่างของแช่สารละลาย starfish ถูกจับกุมที่ prophase meiotic first (ทบทวนMeijer และ Guerrier 1984) เป็นความสามารถในการปฏิสนธิ การแช่สารละลายของสัตว์ทั้งหมดต้องเอาชนะการจับกุม และเรียกใช้งาน meioticพ่อแม่ พร้อมใช้งานของซิงโครไนส์แช่สารละลายจำนวนมากทำให้ starfish เป็นระบบแบบจำลองทดลองดีเรียนพ่อแม่ meiotic การศึกษาก่อนหน้านี้ได้แสดงที่แช่สารละลาย immature starfish แสดงสัณฐานวิทยาเซลล์โพลาไรซ์ ครั้งแรกนิวเคลียสขนาดใหญ่ (germinal เวสิเคิล หรือจีวี) อยู่ใกล้พลาสมาเมมเบรนของซีกโลกสัตว์ ที่ cytoskeletalองค์กรของขั้วสัตว์จะแตกต่างจากการภูมิภาคอื่น ๆ ในที่ชั้น F-แอกตินหายไปในช่องว่างระหว่างจีวีและเมมเบรนพลาสม่า แน่นอน ก็ผ่านทางนี้ "ภายใน"ที่ขั้วโลกศพสองเป็น extruded ระหว่างการลดสองส่วนที่แสดงภาพของพ่อแม่ oocyte วินาทีขอบเขตเนื้อแน่นของ oocyte แตกต่างจากไซโทพลาซึมภายในมีสั่ง filaments แอกตินในคลัสเตอร์ใต้พลาสม่าเมมเบรนขึ้นรูปชั้น cytoskeletal เนื้อแน่น แห่งบริเวณที่เนื้อแน่นไม่มีอสุจิผูกกับเมมเบรนมากมายfilled กับ stratified เนื้อหา (Schroeder, 1985) เนื่องจากการของโปรตีนแอกตินผูกที่ polymerize หรือ depolymerizeแอกติน filaments, cytoskeleton แอกตินเนื้อแน่นเป็นแบบไดนามิกสมดุลการเป็นฮอร์โมนที่ก่อให้เกิดการสุกแก่ของแช่สารละลาย starfish 1-methyladenine (1-MA) (Kanatani et al., 1969) เมื่อมีการแช่สารละลายตาก 1 MA, cytological เปลี่ยนแปลงเกิดขึ้น การสแกนเอ็มและ immunofluorescence microscopy ได้ก่อตั้งขึ้นที่ 1 MAกระตุ้นลักษณะชั่วคราวของเด่นทันทีmicrovilli บนผิว oocyte ที่เกิดจากการชุมนุมอย่างรวดเร็ว และถอดของรวมกลุ่มแอกติน filamentous ในแกนภายในของพวกเขา(Schroeder, 1981 Schroeder และ Stricker, 1983 ออทโทและ Schroeder1984) เป็นการตอบสนองที่รวดเร็วที่เกิดขึ้นภายใน 1 นาทีหลังจากเพิ่ม 1 MA มีการเปลี่ยนแปลงอย่างรวดเร็วเท่า ๆ กันใน 1 MAปล่อยด่วนของ intracellular Ca2 +(Moreau et al., 1978 Santellaก Kyozuka 1994) ต่อเหตุการณ์เหล่านี้ก่อน 1 MA แล้วแท้จริงลูกจ้างอย่างละเอียดมากขึ้นของเครือข่าย cytoplasmic แอกติน และเปลี่ยนแปลงที่รุนแรงในรัฐ phosphorylation ของโปรตีนจำนวนมาก(Labbé et al., 1989 Masui 2001 Prigent และ ล่า 2004) พร้อมกันorganelles intracellular เช่นลัม endoplasmic (ER)รับการเปลี่ยนแปลงโครงสร้าง (Jaffe และ Terasaki, 1994 Terasaki, 1994)เหตุการณ์ final แก่การเป็นของซองจดหมายนิวเคลียร์ของจีวีการ เพราะการเปลี่ยนแปลงเหล่านี้ cytoplasmic การชีววิทยาการเจริญ 320 (2008) 426-435ผู้ที่เกี่ยวข้อง⁎ที่อยู่อีเมล์: [e-mail] (L. Santella)0012-1606 / $ – ดูหน้าเรื่อง © 2008 Elsevier อิงค์ สงวนลิขสิทธิ์ทั้งหมดdoi:10.1016/j.ydbio.2008.05.549เนื้อหารายการ ScienceDirectชีววิทยาการเจริญหน้าแรกของสมุดรายวัน: www.elsevier.com/developmentalbiologyหลัง meiotic ไข่พร้อมปฏิสนธิได้ ตัวอสุจิเกิดintracellular Ca2 +รุ่นนี้สามารถเกิดขึ้นได้มากกว่า efficiently และCa2 +-exocytosis อิสระของเม็ดเนื้อแน่นที่นำไปสู่ความสูงชั้น vitelline และของการแปลงในการปฏิสนธิซองจดหมาย ซึ่งช่วยในการป้องกัน polyspermy (Longo et al., 1995Santella et al., 1999)เนื่องจากทั้ง Ca2 +สัญญาณและการเปลี่ยนแปลงของเซลล์ผิวแอกตินfibers จะเกิดทันทีหลังจากเริ่มต้นของการที่พ่อแม่กระบวนการ เรามีความสนใจในการศึกษาความสัมพันธ์ระหว่างเหตุการณ์ที่สองเหล่านี้ เราเพิ่งได้สังเกตที่ rearrangements ของcytoskeleton แอกตินโดยใช้ของแอกติน depolymerizing ตัวแทน หรือแอกตินผูกโปรตีน สามารถขอ modulate Ca2 +สัญญาณในระหว่างกระบวนการแก่และการปฏิสนธิ (Lim และ al., 2002, 2003 Nusco ร้อยเอ็ดal., 2006) ในการศึกษาปัจจุบัน เรารู้เหตุการณ์ first ของCa2 +รุ่นที่ของพ่อแม่ meiotic heraldsก่อนหน้านี้ เราได้แสดงที่ Ca นี้2 +สัญญาณเริ่มต้น ณจุดหนึ่งผิว oocyte (Santella et al., 2003) เรามีภาษาท้องถิ่นขณะเริ่มต้นเว็บไซต์ของ Ca2 +ปล่อยไปซีกโลกเกิดของ oocyteOocyte สม่ำเสมอเมื่อเทียบเคียงสัมผัสกับ 1 MA จึงโดดเด่นที่Ca2 +สัญญาณเริ่มต้นจากเพียงขั้ว vegetal คงเส้นคงวา สนใจ-ingly เราได้สังเกตที่เส้นทางของ Ca2 +การแพร่กระจายคลื่นเป็นส่วนใหญ่ ผ่านชั้นเนื้อแน่น และไม่ผ่านการมวล cytoplasmic สังเกตนี้ และการพิจารณาการแช่สารละลาย asymmetric โมเลกุลจัดนำเราถามว่าหรือ cytoskeleton แอกตินเนื้อแน่นไม่มีบทบาทสำคัญในฟเวอร์ intracellular Ca2 +.ไปคำถามนี้ เราได้ตรวจสอบ spatiotem-poral dynamics ของ Ca 1-MA-เกิด2 +สัญญาณโดยพร้อมกันวัด Ca2 +ตอบสนองในการแช่สารละลายหกสัมผัสกับฮอร์โมนในช่วงเวลาเดียวกัน เพื่อศึกษาว่า Ca2 +รูปแบบสัญญาณเป็นinfluenced จากการเปลี่ยนแปลงของ cytoskeleton แอกติน ที่เราใช้ pharma-ตัวแทน cological ที่ depolymerize หรือ polymerize แอกติน filamentsเช่น latrunculin- (ลาดพร้าว-A) และ jasplakinolide (โรงแรม), ตามลำดับตัวแทนเหล่านี้มีผลลิปกลอสไขแข็ง Ca2 +สัญญาณelicited โดย 1 MA หรือ InsP 3 - uncaging ระบุที่ Ca2 +กระบวนการปล่อยไม่สันทัด โดย cytoske แอกตินเนื้อแน่น-leton จะแปลกใจของเรา เราสังเกตที่ inhibitors คลาสสิกของ InsP Ca 3 - ขึ้น2 +ปล่อยทางเดิน U73122 และเฮพา รินนอกจากนี้ยัง เกิดจากการเพิ่มขึ้นที่โดดเด่นของแอกตินเนื้อแน่น filaments ในขณะที่พวกเขาห้าม Ca 1-MA-เชื่อมโยง2 +ตอบสนอง ดังนั้น การแอกตินcytoskeleton เกี่ยวข้องในกระบวนการนี้ลิปกลอสไข สุดท้าย เรามีแสดงว่า การ exocytosis ของเม็ดเนื้อแน่นต้องไม่เฉพาะรุ่นใหญ่ของ Ca2 +แต่ยังปกติสถาปัตยกรรมcytoskeleton เนื้อแน่นวัสดุและวิธีการเตรียมแช่สารละลายStarfish (A. pectinifera) ถูกจับในอ่าว Mutzu ญี่ปุ่น ในระหว่างการผสมพันธุ์ฤดูกาล (เดือนกันยายน) และขนส่งไป Stazione Zoologica เนเปิลส์ อิตาลี สัตว์ถูกเก็บรักษาไว้ในการหมุนเวียนน้ำทะเลที่ 16 องศาเซลเซียส ต่อมบ่งเพศถูก dissected จากการเมือง dorsal ใกล้แขน และโอนย้ายไปทะเลเย็น filter sterilized(FSW) แช่สารละลาย immature fully-grown ได้แยกเป็นเซลล์เดี่ยว โดย sieving ผ่านผ้าพันแผลหลายครั้งใน FSW เย็น แช่สารละลายเกือบทั้งหมดที่นำออกใช้แล้วถูกจับกุมที่ meioticprophase I เป็นของเวสิเคิล germinal ตัดสิน แช่สารละลายฟรีถูกแยกโดยซ้ำ centrifugation มือสะอาด และอ่อนโยนใน FSW เย็น สำหรับในปัจจุบันการทดลอง การแช่สารละลาย immature ได้ถูกกระตุ้น ด้วย 1 μM 1-MA ใน FSW สำหรับ h 1 ก่อนการสัมผัสกับ spermatozoa ถูกระงับใน FSWMicroinjection, photoactivation สาร caged และ Ca2 +ภาพทำ microinjection แช่สารละลายกับ Transjector มีความกดอากาศ(Eppendorf) โดยปกติ จำนวนวัสดุฉีดได้ประมาณ 1-2% ของการoocyte ปริมาตร ดังนั้น ความเข้มข้น final ฉีดวัสดุภายในแช่สารละลายควรมี 50 เพื่อ 100-fold ต่ำกว่าความเข้มข้นในการฉีดเปตต์ สีย้อม fluorescent แคลเซียม แคลเซียมกรี 488 กลวงเพื่อเดกซ์แทรน kDa 10ซื้อจากโมเลกุล Probes (Eugene ออริกอน) และใช้ในเปตต์ 5 mg/mlเข้มข้น ด้วยบัฟเฟอร์ฉีด (10 mM Hepes, pH 7.0 โพแทสเซียม 100 มม.aspartate) ใช้สำหรับส่งเฮพาริน (ซิก-Aldrich) บัฟเฟอร์ฉีดเหมือนกันและ caged InsP 3 (Probes โมเลกุล) โดย microinjection 3 InsP caged (เปตต์ 5 μMความเข้มข้น) ถูกฉีดร่วมกับ fluorescent Ca2 +ตัวบ่งชี้ในการ immatureแช่สารละลายหรือไข่ matured การเรียกใช้กรง

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

โครงร่างของเซลล์โปรตีน modulates สัญญาณแคลเซียมในช่วงการเจริญเติบโตของสายดาวดวลจุดโทษไข่
Keiichiro Kyozuka จงตันชุนข, Agostina Puppo ข, Gianni Gragnaniello ข, Ezio GARANTE ข, Luigia Santella ข⁎ศูนย์วิจัยชีววิทยาทางทะเล, Asamushi มหาวิทยาลัย Tohoku 039 -3501 ญี่ปุ่นขห้องปฏิบัติการสัญญาณมือถือแอนตันStazione Zoologica Dohrn วิลล่า Comunale, นาโปลี, I-80121 อิตาลีbstractarticleinfo ประวัติศาสตร์บทความที่ได้รับการตีพิมพ์ 17 สิงหาคม 2007 ปรับปรุง 23 พฤษภาคม 2008 ได้รับการยอมรับ 27 พฤษภาคม 2008 มีจำหน่ายออนไลน์ 6 มิถุนายน 2008 คำสำคัญ: ไฟดาวดวลจุดโทษไข่1 methyladenine โปรตีนโครงร่างของเซลล์Insp 3 เฮU73122 เปลือกนอกเม็ด exocytosis ไมโอซิสก่อนที่จะประสบความสำเร็จในการปฏิสนธิสามารถเกิดขึ้นได้ต้องได้รับการพัฒนาของไข่เจริญเติบโต meiotic ในการดวลจุดโทษไฟดาวนี้สามารถประสบความสำเร็จในหลอดทดลองโดยการใช้ 1 methyladenine (1-MA) การตอบสนองทันที 1-MA เป็นอย่างรวดเร็ว Ca 2+ เป็นอิสระในเยื่อหุ้มเซลล์ ที่นี่เราแสดงให้เห็นว่านี้ Ca 2+ คลื่นมักจะเริ่มต้นในซีกโลกพืชและแพร่กระจายผ่านเยื่อหุ้มสมองซึ่งเป็นพื้นที่ได้ทันทีภายใต้เยื่อหุ้มพลาสม่า เราได้ตั้งข้อสังเกตว่าการเปลี่ยนแปลงของโปรตีนโครงร่างของเซลล์เยื่อหุ้มสมองโดย latrunculin-A และ jasplakinolide potently สามารถส่งผลกระทบต่อCa 2+ คลื่นที่เกิดจาก 1-MA นี้บ่งชี้ว่าโปรตีนโครงร่างของเซลล์เยื่อหุ้มสมอง modulates Ca 2+ การเปิดตัวในช่วงการเจริญเติบโต meiotic แคลิฟอร์เนีย2 + คลื่นถูกยับยั้งโดยคู่อริคลาสสิกของ Insp ที่ 3 - เชื่อมโยง Ca 2 + สัญญาณทางเดิน, U73122 และเฮ ที่แปลกใจของเรา แต่ทั้งสองสารยับยั้งการเหนี่ยวนำให้เกิดโปรตีนมากเกินไปพอลิเมอที่โดดเด่นในเยื่อหุ้มเซลล์บอกว่าผลยับยั้งของพวกเขาในCa 2+ ปล่อยอาจนำมาประกอบกับการก่อกวนของโครงร่างของเซลล์โปรตีนเปลือกนอก ในไข่หลัง meiotic, U73122 และ jasplakinolide ปิดกั้นความสูงของชั้น vitelline โดย Uncaged Insp 3 แม้จะมีการเปิดตัวขนาดใหญ่ของCa 2+ หมายความว่า exocytosis ของเม็ดเยื่อหุ้มสมองต้องไม่เพียง แต่เป็น Ca 2+ เพิ่มขึ้น แต่ยังกฎระเบียบของโครงร่างของเซลล์โปรตีนเยื่อหุ้มสมอง ผลของเราแสดงให้เห็นว่าโครงร่างของเซลล์โปรตีนเปลือกนอกของไข่ดวลจุดโทษไฟดาวเล่นบทบาทสำคัญทั้งในการสร้าง Ca 2 + สัญญาณและในการควบคุม exocytosis เม็ดเยื่อหุ้มสมอง. © 2008 เอลส์อิงค์สงวนลิขสิทธิ์. บทนำในช่วง oogenesis ทั้งการเจริญเติบโตและความแตกต่างของดาวไฟดวลจุดโทษไข่ถูกจับที่สายแรก meiotic แวะ (สอบทานในเมย์เยอร์และGuerrier 1984) ที่จะกลายเป็นความสามารถในการปฏิสนธิเซลล์ไข่ของสัตว์ทุกชนิดจะต้องเอาชนะการจับกุมและเปิดใช้งาน meiotic การเจริญเติบโต ความพร้อมของจำนวนมากของไข่ตรงกันทำให้ดวลจุดโทษไฟดาวระบบรูปแบบการทดลองที่ยอดเยี่ยมสำหรับการศึกษาการเจริญเติบโตmeiotic การศึกษาก่อนหน้านี้ได้แสดงให้เห็นว่าไฟดาวที่ยังไม่บรรลุนิติภาวะดวลจุดโทษไข่แสดงลักษณะทางสัณฐานวิทยาเซลล์โพลาไรซ์ ครั้งแรกนิวเคลียสขนาดใหญ่ (คนตุ่มเชื้อโรคหรือ GV) ตั้งอยู่ใกล้กับเยื่อหุ้มสัตว์ซีกโลก cytoskeletal องค์กรของเสาสัตว์ค่อนข้างแตกต่างจากที่ภูมิภาคอื่น ๆ ในการที่ชั้น F-โปรตีนขาดหายไปในช่องว่างระหว่างใช้งานGV และเมมเบรนพลาสม่า แท้จริงมันเป็นผ่านทางนี้ "ทางเดิน" ว่าร่างทั้งสองขั้วนี้จะยื่นในช่วงสองลดหน่วยงานซึ่งเป็นการแสดงผลภาพของการเจริญเติบโตไข่ ประการที่สองภูมิภาคของเซลล์เยื่อหุ้มสมองแตกต่างจากพลาสซึมชั้นในที่วายสายโปรตีนที่มีการสั่งซื้อในกลุ่มเพียงใต้พลาสมาเมมเบรนกลายเป็นเยื่อหุ้มสมองชั้นcytoskeletal นอกจากนี้ภูมิภาคเยื่อหุ้มสมองจะอัดแน่นไปด้วยถุงผูกพันเยื่อหลายสายlled กับสาย Strati เนื้อหาเอ็ด (ชโรเดอ 1985) เพราะการปรากฏตัวของโปรตีนโปรตีนที่มีผลผูกพันที่เกิดการหรือ depolymerize สายโปรตีนวายที่โครงร่างของเซลล์โปรตีนเยื่อหุ้มสมองอยู่ในแบบไดนามิกสมดุล. ฮอร์โมนที่ก่อให้เกิดการเจริญเติบโตของเซลล์ไข่ดวลจุดโทษไฟดาวคือ 1- methyladenine (1-MA) (Kanatani et al., 1969 ) เมื่อไข่ได้รับการสัมผัสกับ 1-MA ชุดของการเปลี่ยนแปลงของเซลล์เกิดขึ้น สแกน EM และกล้องจุลทรรศน์ uorescence ภูมิคุ้มกันชั้นมีการจัดตั้งที่ 1-MA ทันทีช่วยกระตุ้นลักษณะชั่วคราวของที่โดดเด่นmicrovilli บนพื้นผิวเซลล์ที่เกิดจากการชุมนุมอย่างรวดเร็วและถอดชิ้นส่วนของสายlamentous การรวมกลุ่มโปรตีนในแกนภายในของพวกเขา(ชโรเดอ 1981; ชโรเดอและ Stricker, 1983; อ็อตโตและชโรเดอ1984) นี่คือการตอบสนองอย่างรวดเร็วที่เกิดขึ้นภายใน 1 นาทีหลังจากที่การเพิ่มขึ้นของ1-MA การเปลี่ยนแปลงอย่างรวดเร็วอย่างเท่าเทียมกันในการตอบสนองต่อ 1-MA คือการเปิดตัวที่รวดเร็วของเซลล์ Ca 2+ (Moreau et al, 1978;. Santella และ Kyozuka 1994) หลังจากเหตุการณ์เหล่านี้ในช่วงต้น 1-MA แล้วก่อให้เกิดการปฏิรูปอย่างกว้างขวางมากขึ้นของเครือข่ายโปรตีนนิวเคลียสและการเปลี่ยนแปลงที่รุนแรงในรัฐphosphorylation ของโปรตีนจำนวนมาก(Labbé et al, 1989;. Masui 2001; Prigent และล่า, 2004) ในแบบคู่ขนานอวัยวะภายในเซลล์เช่น endoplasmic reticulum (ER) ได้รับการเปลี่ยนแปลงโครงสร้าง (Jaffe และ Terasaki 1994; Terasaki, 1994). ไฟเหตุการณ์ NAL ของกระบวนการการเจริญเติบโตเป็นรายละเอียดของซองจดหมายนิวเคลียร์ของGV เนื่องจากการเปลี่ยนแปลงของนิวเคลียสเหล่านี้ชีววิทยาพัฒนาการ 320 (2008) 426-435 ⁎ผู้เขียนที่สอดคล้องกัน. อีเมล์:. [e-mail] (แอล Santella) 0012-1606 / $ - เห็นว่าด้านหน้า© 2008 เอลส์อิงค์ สงวนลิขสิทธิ์. ดอย: 10.1016 / j.ydbio.2008.05.549 รายการเนื้อหาที่มีอยู่ใน ScienceDirect ชีววิทยาพัฒนาการวารสารหน้าแรก: www.elsevier.com/developmentalbiology ไข่หลัง meiotic มีความพร้อมสำหรับการปฏิสนธิ สเปิร์มที่เกิดภายในเซลล์ Ca 2+ การเปิดตัวในขณะนี้สามารถเกิดขึ้นได้ไฟ EF มากขึ้นอย่างมีประสิทธิภาพและCa 2+ -dependent exocytosis ของเม็ดเยื่อหุ้มสมองนำไปสู่ระดับความสูงของชั้นvitelline และการเปลี่ยนแปลงไปสู่การปฏิสนธิซองจดหมายที่ช่วยในการป้องกันการpolyspermy (ลองโกเอต อัล, 1995;... Santella, et al, 1999) เพราะทั้ง Ca 2 + สัญญาณและการเปลี่ยนแปลงของเซลล์ผิวโปรตีนBers ไฟจะถูกเหนี่ยวนำให้เกิดทันทีหลังจากการเริ่มต้นของการเจริญเติบโตที่กระบวนการที่เรามีความสนใจในการศึกษาความสัมพันธ์ระหว่างทั้งสองเหตุการณ์. เราได้สังเกตเห็นเร็ว ๆ นี้ว่า rearrangements ของโครงร่างโปรตีนโดยใช้สารโปรตีน-depolymerizing หรือ actin- ผูกพันโปรตีนอย่างยิ่งที่สามารถปรับ Ca 2 + สัญญาณในช่วงการเจริญเติบโตและกระบวนการปฏิสนธิ (Lim et al, 2002, 2003. Nusco et al, ., 2006) ในการศึกษาปัจจุบันเราได้มุ่งเน้นไปที่สายเหตุการณ์แรกของแคลิฟอร์เนีย2 + ปล่อยใบปลิวที่เริ่มมีอาการของการเจริญเติบโต meiotic ได้. ก่อนหน้านี้เราได้แสดงให้เห็นว่านี่ Ca 2 + สัญญาณเริ่มต้นที่จุดหนึ่งของพื้นผิวเซลล์ (ที่ Santella et al, , 2003) เราได้มีการแปลตอนนี้เว็บไซต์ของการเริ่มต้นของ Ca 2 + ปลดปล่อยสู่ซีกโลกของพืชไข่. เพราะไข่สัมผัสกันถึง 1-MA มันเป็นที่น่าสังเกตว่าแคลิฟอร์เนีย2 + สัญญาณอย่างสม่ำเสมอเพียงเริ่มต้นจากเสาพืช ดอกเบี้ยingly เราได้ตั้งข้อสังเกตว่าเส้นทางของแคลิฟอร์เนีย2 + การบริหารจัดการคลื่นเป็นส่วนใหญ่ผ่านชั้นเยื่อหุ้มสมองและไม่ผ่านทางศูนย์ของมวลนิวเคลียส นี้การสังเกตและการพิจารณาขององค์กรที่ไม่สมมาตรของโมเลกุลเซลล์ไข่, นำเราไปถามว่าหรือไม่ได้เป็นโครงร่างของเซลล์เยื่อหุ้มสมองโปรตีนมีบทบาทสำคัญในการระดมเซลล์Ca 2+. ที่อยู่คำถามนี้เราได้ตรวจสอบ spatiotem- การเปลี่ยนแปลงของ poral 1-MA ที่เกิด Ca 2 + สัญญาณพร้อมกันโดยวัด Ca 2+ การตอบสนองในหกไข่สัมผัสกับฮอร์โมนในช่วงระยะเวลาเดียวกัน เพื่อศึกษาวิธีการที่ Ca 2 + รูปแบบการส่งสัญญาณเป็นในชั้น uenced จากการเปลี่ยนแปลงของโครงร่างของเซลล์โปรตีนที่เราใช้ pharma- ตัวแทน cological ที่ depolymerize หรือเกิดการสายโปรตีนวายเช่นlatrunculin-A (LAT-A) และ jasplakinolide (JAS) ตามลำดับ. เหล่านี้ ตัวแทนมีผลยับยั้งการที่แข็งแกร่งใน Ca 2 + สัญญาณที่เกิดจาก 1-MA หรือโดย Insp 3 -uncaging แสดงให้เห็นว่า Ca 2+ กระบวนการปล่อยอาจจะมีการปรับโดยโปรตีนเยื่อหุ้มสมอง cytoske- leton ที่แปลกใจของเราเราตั้งข้อสังเกตว่าแม้สารยับยั้งคลาสสิกของ Insp 3 -dependent Ca 2+ เดินปล่อย U73122 และเฮเหนี่ยวนำให้เกิดการเพิ่มขึ้นนอกจากนี้ยังโดดเด่นของสายโปรตีนเยื่อหุ้มสมองวายในขณะที่พวกเขายับยั้ง1-MA-เชื่อมโยง Ca 2+ การตอบสนอง . ดังนั้นโปรตีนโครงร่างของเซลล์เป็นที่เกี่ยวข้องในกระบวนการยับยั้งนี้ สุดท้ายเราได้แสดงให้เห็นว่า exocytosis ของเม็ดเยื่อหุ้มสมองต้องไม่ได้เป็นเพียงการเปิดตัวขนาดใหญ่ของCa 2 + แต่ยังสถาปัตยกรรมปกติของโครงร่างเยื่อหุ้มสมอง. วัสดุและวิธีการเตรียมความพร้อมของเซลล์ไข่ดาวไฟดวลจุดโทษ(ก pectinifera) ได้รับการบันทึกใน Mutzu เบย์ ประเทศญี่ปุ่นในช่วงผสมพันธุ์ฤดูกาล(กันยายน) และเคลื่อนย้ายไปยัง Stazione Zoologica ในเนเปิลส์ประเทศอิตาลี สัตว์ที่ถูกเก็บรักษาไว้ในการไหลเวียนของน้ำทะเลที่ 16 ° C พวงใข่เขาถูกชำแหละจากพื้นที่ภาคกลางที่อยู่ใกล้หลังแขนและโอนไปยังเย็นไฟกรองฆ่าเชื้อน้ำทะเล(FSW) ครบปลูกเซลล์ไข่อ่อนที่แยกเป็นเซลล์เดียวโดย sieving ผ่านตาข่ายหลายครั้งในFSW เย็น เกือบทั้งหมดไข่ที่ปล่อยออกมาถูกจับที่ meiotic แวะผมเป็นตัดสินโดยการปรากฏตัวของเชื้อโรคตุ่ม ไข่ฟรีที่แยกได้จากการล้างซ้ำและการหมุนเหวี่ยงมืออ่อนโยนใน FSW เย็น สำหรับการปฏิสนธิการทดลองเซลล์ไข่อ่อนที่ถูกกระตุ้นด้วย 1 ไมครอน 1-MA ใน FSW เป็นเวลา 1 ชั่วโมงก่อนที่จะถูกสัมผัสกับสเปิร์มที่ลอยอยู่ในFSW. Microinjection, photoactivation ของสารขังอยู่ในกรงและ Ca 2+ ถ่ายภาพMicroinjection ของไข่ที่ได้ดำเนินการกับ Transjector ความดันอากาศ(Eppendorf) โดยปกติแล้วปริมาณของวัสดุฉีดอยู่ที่ประมาณ 1-2% ของปริมาณไข่ ดังนั้นความเข้มข้น NAL ไฟของวัสดุฉีดภายในเซลล์ไข่ควรจะได้รับ50-100 เท่าต่ำกว่าความเข้มข้นในการฉีดที่ปิเปต ชั้น uorescent ย้อมแคลเซียมแคลเซียมสีเขียว 488 ผันไป dextran 10 กิโลดาลตันซื้อมาจากวัดระดับโมเลกุล(ออริกอน) และใช้ใน 5 มิลลิกรัม / ปิเปตมล. เข้มข้นกับบัฟเฟอร์ฉีด (10 มิลลิ HEPES พีเอช 7.0, 100 มิลลิโพแทสเซียมaspartate) . บัฟเฟอร์ฉีดเดียวกันถูกนำมาใช้สำหรับการส่งมอบยา heparin (Sigma-Aldrich) และ Insp ขัง 3 (วัดระดับโมเลกุล) โดย microinjection กรง Insp 3 (5 ไมครอนปิเปตเข้มข้น) ได้ร่วมฉีดด้วยชั้น uorescent Ca 2+ ตัวบ่งชี้ลงไปทั้งที่ยังไม่บรรลุนิติภาวะไข่หรือไข่สุก เพื่อเปิดใช้งานกรง

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

modulates actin ขาดตอนการส่งสัญญาณแคลเซียมในระหว่างการสุกของไข่ดาว จึงอาจเป็น kyozuka


เคอิจิโร่ จองที ชุน
B
, agostina ปั๊ปโป่ะ
B
, Gianni gragnaniello
B
, Ezio ซึ่งจะทําให้
B
, ลุยเจีย santella
B
A
⁎ศูนย์วิจัยชีววิทยาทะเล asamushi Tohoku , มหาวิทยาลัย 039-3501 ญี่ปุ่น
B
ปฏิบัติการส่งสัญญาณมือถือ แล้ว zoologica แอน dohrn Villa Comunale , เนเปิลส์ i-80121
, , อิตาลีB S T R A C T A R T i C L E n f o

ได้รับตีพิมพ์บทความประวัติ : 17 สิงหาคม 2550
แก้ไข 23 พฤษภาคม 2551 27 พฤษภาคม 2008

ยอมรับออนไลน์ 6 มิถุนายน 2551
คำสำคัญ :


1-methyladenine ไข่ดาวจึงอาจขาดตอน
3

actin INSP


เปลือกเม็ดยา u73122 nucleotide

ก่อนการปฏิสนธิเหม่งประสบความสำเร็จสามารถเกิดขึ้นได้ จะต้องได้รับการเพาะเลี้ยงเซลล์ . ในการดวลจุดโทษจึงสามารถ
ดาราได้ในหลอดทดลอง โดยการใช้ 1-methyladenine ( 1-ma ) การตอบสนองทันทีเพื่อ 1-ma เป็นเร็ว CA
2
ปล่อยในเซลล์สมองส่วนนอก ที่นี่เราแสดงให้เห็นว่านี้ CA
2
คลื่นมักจะเริ่มต้นในซีกโลก พืชและ
แพร่กระจายผ่านเปลือกนอก ซึ่งมีพื้นที่ทันทีในพลาสมาเมมเบรน เรามี
สังเกตได้ว่า การเปลี่ยนแปลงของเปลือก actin โดย latrunculin-a ขาดตอนและสามารถเริ่ม jasplakinolide
มีผลต่อ CA
2
คลื่นกระตุ้น โดย 1-ma . นี้บ่งชี้ว่าสมอง actin ขาดตอน modulates CA
2
ปล่อยในช่วงเซลล์บ่ม CA
2
คลื่นถูกยับยั้งโดยประเภทคลาสสิกของ INSP 3
2
-
เชื่อมโยง CA ส่งสัญญาณทาง u73122 heparin , และ . ให้เราประหลาดใจอย่างไรก็ตาม ทั้งสองเกิด actin polymerization ยับยั้ง
ที่ไฮเปอร์ในเซลล์เยื่อหุ้มสมอง , ชี้ให้เห็นว่าพวกเขาสามารถมีผลต่อ CA
2
ปล่อยอาจจะประกอบกับความยุ่งเหยิงของขาดตอน actin เปลือก . โพสต์ในเซลล์ไข่ , และ u73122
jasplakinolide กั้นระดับความสูงของชั้นวิเทลไลน์ โดย uncaged INSP 3 แม้จะมีรุ่นขนาดใหญ่ของ CA
2

,จะว่า nucleotide ของเม็ดคอร์ต้องไม่เพียง แต่ CA
2
ลุกขึ้น แต่ด้วยระเบียบของ
ขาดตอน actin เปลือก . ผลของเราแสดงให้เห็นว่าเปลือก actin ขาดตอนของดาวจึง SH ไข่เล่น
วิกฤตบทบาททั้งในการสร้าง CA
2
สัญญาณและควบคุมเปลือกเม็ด nucleotide .
© 2008 Elsevier Inc . All Rights Reserved .

ในเมืองกรุงแนะนำ ,ทั้งการเจริญเติบโตและความแตกต่างของ
ดาวจึงถูกจับจึงตัดสินใจเดินทางไปที่อังกฤษ เซลล์เซลล์โปรเฟส ( ทบทวน
Meijer และ ขนาด 1984 ) กลายเป็นความสามารถในการปฏิสนธิ ไข่
สัตว์ทั้งหมดต้องเอาชนะจับกุมและเปิดใช้งานเซลล์
บ่ม ความพร้อมของตัวเลขขนาดใหญ่ของตรงกันไข่
ทำให้ดาวจึงอาจทดลองระบบ
ยอดเยี่ยมแบบการศึกษาเซลล์บ่ม การศึกษาก่อนหน้านี้ได้แสดงให้เห็นว่า
เด็กดาวจึง SH ไข่แสดงขั้วรูปร่างของเซลล์ . แรก
นิวเคลียสขนาดใหญ่ ( vesicle เชื้อโรค , หรือ GV ) ตั้งอยู่ใกล้กับ
เยื่อหุ้มเซลล์ของสัตว์ซีกโลก องค์กรไซโตร กเลตัล
ของสัตว์ขั้วโลก ค่อนข้างแตกต่างจากที่ของ
ภูมิภาคอื่น ๆ ที่ f-actin ชั้นหายไปในช่องว่างระหว่าง
GV และพลาสมาเมมเบรน แน่นอน มันผ่าน " ทางเดิน "
2 ขั้วที่ร่างกายจะอัดระหว่างสองลด
หน่วยงานซึ่งมีการแสดงผลของอัตราการพัฒนาโตเต็มที่ . 2
ภูมิภาคเปลือกของไข่ที่แตกต่างจากไซโทพลาซึมภายใน
ที่ ๆมี actin จึงสั่งในกลุ่มภายใต้พลาสมาเมมเบรนไซโตร กเลตัล
รูปเปลือกชั้นใน นอกจากนี้ บริเวณสมองที่อัดแน่นด้วยมากมาย

มีเล็กจึงฆ่ากับ strati จึงเอ็ดเนื้อหา ( ชโรเดอร์ , 1985 ) เพราะการแสดงตนของโปรตีนในกล้ามเนื้อมัด
โปรตีนโพลีเมอร์ไรซ์หรือดีพอลิเมอไรซ์
actin จึงได้ที , ขาดตอน actin เปลือกเป็นแบบไดนามิก
สมดุล ฮอร์โมนที่เร่งการเจริญเติบโตของ
ดาวจึง SH ไข่ 1 -
methyladenine ( 1-ma ) ( kanatani et al . , 1969 ) เมื่อไข่ถูก
ตาก 1-ma , ชุดของการเปลี่ยนแปลงที่สามารถเกิดขึ้นได้ มมูโนflและสแกนเอ็ม
uorescence กล้องจุลทรรศน์ได้ก่อตั้งขึ้นที่ 1-ma
ทันทีกระตุ้นชั่วคราวปรากฏเด่น
พบบนพื้นผิวที่เกิดจากการประกอบและไข่
อย่างรวดเร็วถอดชิ้นส่วนของจึง lamentous actin รวมกลุ่มในแกนภายในของพวกเขา
( ชโรเดอร์ , 1981 ; ชโรเดอร์ และสตริกเคอร์ , 1983 ; ตโต และผู้อำนวยการ
, 1984 ) นี้เป็นอย่างรวดเร็วการตอบสนองที่เกิดขึ้นภายใน 1 นาทีหลังจาก
เพิ่ม 1-ma . การเปลี่ยนแปลงที่รวดเร็วอย่างเท่าเทียมกันในการตอบสนอง 1-ma คือ
ปล่อยอย่างรวดเร็วของ intracellular Ca
2
( โมโร et al . , 1978 ; และ santella
kyozuka 1994 ) ต่อไปนี้เหตุการณ์ก่อนนี้แล้วก่อให้เกิดการ 1-ma
กว้างขวางมากขึ้นของเครือข่าย actin และการเปลี่ยนแปลงที่รุนแรงในนี้

( โปรตีนฟอสโฟริเลชันของรัฐต่าง labb é et al . , 1989 ; มัตสุอิ 2001 prigent และล่า , 2004 ) ในแบบคู่ขนาน
ออร์แกเนลล์ภายในเซลล์เช่น endoplasmic reticulum ( ER )
เปลี่ยนแปลง ( เจฟฟี่ และ terasaki , 1994 ;
terasaki , 1994 )จึง นาล เหตุการณ์ของกระบวนการบ่ม คือ การสลายของนิวเคลียสของ GV
. เนื่องจากการเปลี่ยนแปลงนี้เหล่านี้
ชีววิทยา 320 ( 2008 ) 426 – 435
⁎ที่สอดคล้องกันของผู้เขียน อีเมล : [e-mail]
( L . santella )
0012-1606 / $ ) เห็นหน้าเรื่อง© 2008 บริษัท Inc สงวนสิทธิ์ทั้งหมด .
ดอย : 10.1016 / j.ydbio . 2008.05.549 เนื้อหารายการพร้อมบริการ

วารสารชีววิทยา
การพัฒนาโฮมเพจ : www.elsevier . com / developmentalbiology
โพสต์ เซลล์ไข่ที่พร้อมผสมพันธุ์ . สเปิร์มและเซลล์ CA
2

ปล่อยสามารถเกิดขึ้นมากกว่า EF จึง ciently และ CA
2
-
nucleotide ขึ้นอยู่กับเม็ดคอร์นำไปสู่ความสูง
ของวิเทลไลน์ชั้นและการเปลี่ยนแปลงไปสู่ การปฏิสนธิ
ซองจดหมายซึ่งช่วยในการป้องกัน polyspermy ( Longo et al . , 1995 ;
santella et al . , 1999 ) .
เพราะทั้ง CA
2
สัญญาณและการเปลี่ยนแปลงของเซลล์ผิวจึงจะเกิด actin
bers ทันทีหลังจากการเริ่มต้นของกระบวนการบ่ม
เราสนใจศึกษาความสัมพันธ์ระหว่าง
สองคนนี้ เหตุการณ์ เราเพิ่งสังเกตว่า rearrangements ของ