Indirect immunofluorescence analysi

Indirect immunofluorescence analysis (IFA). Four percent paraformaldehyde
fixed inguinal and popliteal lymph node and skin frozen sections were pretreated
with 0.1% saponin (wt/vol) in PBS, blocked with blocking buffer (PBS, 2% fetal
bovine serum, 10% porcine serum), and then incubated overnight at 4°C with the
primary antibodies mouse MAb anti-porcine CD3 (Southern Biotech), antiporcine-
CD8 (Southern Biotech), rat MAb anti-porcine CD2 (Antigenix America,
Huntington Station, NY), mouse anti-porcine CD1 (Southern Biotech), and
mouse anti-human CD207/Langerin (Denritics, Dardilly, France). Alexa Fluor
488, Alexa Fluor 594, and Alexa Fluor 647 (Molecular Probes/Invitrogen, Carlsbad,
CA)-conjugated secondary antibodies were used for detection. Nuclei were
visualized by DAPI (4,6-diamidino-2-phenylindole) staining included in Pro-
Long Gold Antifade mounting medium (Invitrogen). Sections were examined in
a Nikon 90i fluorescence microscope, and the images were taken with a
DSQi1Mc digital camera and NIS-Elements Software, version 3.0 (Nikon,
Melville, NY)

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

วิเคราะห์ทางอ้อม immunofluorescence (IFA) Paraformaldehyde สี่เปอร์เซ็นต์pretreated ถาวร popliteal และ inguinal น้ำเหลืองโหนและแช่แข็งส่วนผิวมี 0.1% saponin (wt/vol) ใน PBS บล็อกกับบล็อกบัฟเฟอร์ (PBS, 2% และทารกในครรภ์วัวซีรั่ม ซีรั่มช่วง 10%), และ incubated แล้ว ค้างคืนที่ 4 ° C มีการแอนตี้หลักเมาส์มาบช่วงต่อต้าน CD3 (ใต้เทคโนโลยีชีวภาพ), antiporcine-CD8 (ใต้เทคโนโลยีชีวภาพ), ราษฎร์มาบช่วงต่อต้าน CD2 (Antigenix อเมริกาฮันติงตันสถานี NY), เมาส์ CD1 ช่วงต่อต้าน (ใต้เทคโนโลยีชีวภาพ), และเมาส์ต่อต้านบุคคล CD207/Langerin (Denritics, Dardilly ฝรั่งเศส) Alexa Fluor488, Alexa Fluor 594 และ Alexa Fluor 647 (Invitrogen โมเลกุลคลิปปากตะเข้ คาร์ลสCA) -ใช้สำหรับการตรวจหาแอนตี้รองกลวง แอลฟาได้visualized ด้วย DAPI (4, 6 - diamidino-2-phenylindole) ย้อมสีรวมอยู่ใน Pro -ยาว Antifade ทองติดปานกลาง (Invitrogen) ส่วนตรวจสอบในกล้องจุลทรรศน์ Nikon 90i fluorescence และภาพถ่ายในขณะกล้องดิจิตอล DSQi1Mc และนิสองค์ประกอบของซอฟต์แวร์ รุ่น 3.0 (NikonMelville, NY)

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

อิมมูโนวิเคราะห์ทางอ้อม (IFA) paraformaldehyde
สี่ร้อยละคงที่ต่อมน้ำเหลืองที่ขาหนีบและpopliteal
และผิวหนังส่วนที่แช่แข็งที่ถูกปรับสภาพกับ0.1% ซาโปนิน (น้ำหนัก / ปริมาตร) ในพีบีเอสที่ถูกปิดกั้นด้วยการปิดกั้นกันชน (พีบีเอส, 2%
ของทารกในครรภ์ซีรั่มวัว10% ซีรั่มหมู) แล้วบ่มในชั่วข้ามคืน ที่ 4 ° C
กับแอนติบอดีหลักเมาส์แอนติบอดีต่อต้านสุกรCD3 (ภาคใต้ไบโอเทค) antiporcine-
CD8 (ภาคใต้ไบโอเทค) หนูแอนติบอดีต่อต้านสุกร CD2 (Antigenix อเมริกา,
ฮันติงตันสถานีนิวยอร์ก) เมาส์ต่อต้านสุกร CD1 (ภาคใต้ ไบโอเทค)
และเมาส์ต่อต้านมนุษย์CD207 / Langerin (Denritics, ดาร์ดิลลี, ฝรั่งเศส) Alexa Fluor
488, Alexa Fluor 594 และ Alexa Fluor 647 (วัดระดับโมเลกุล / Invitrogen, Carlsbad,
CA) -conjugated แอนติบอดีรองถูกนำมาใช้สำหรับการตรวจสอบ นิวเคลียสถูกมองเห็นโดย DAPI (4? 6? -diamidino-2-phenylindole) การย้อมสีรวมอยู่ในโปรยาวGold Antifade กลางติดตั้ง (Invitrogen) ส่วนการตรวจสอบในกล้อง Nikon 90i กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงและภาพที่ถูกถ่ายด้วยกล้องดิจิตอลDSQi1Mc NIS และองค์ประกอบซอฟต์แวร์รุ่น 3.0 (Nikon, เมลวิลล์, นิวยอร์ก)

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

การวิเคราะห์วิธีทางอ้อม ( IFA ) พาราฟอร์มาลดิไฮด์สี่เปอร์เซ็นต์คงที่และต่อมน้ำเหลืองบริเวณขาหนีบข้อพับ

และผิวหนังบางส่วนถูกแช่แข็งที่ผ่านกับ 0.1% ซาโปนิน ( น้ำหนัก / ปริมาตร ) ในพีบีเอสบล็อกกับบล็อกบัฟเฟอร์ ( PBS , 2% ของทารกในครรภ์
วัวเลือด 10% จาก เซรั่ม ) แล้วบ่มค้างคืนที่ 4 ° C
หลักแอนติบอดีเมาส์มาบทันทีต่อต้านสุกร ( Biotech ภาคใต้ antiporcine --
)ซีดี 8 ( Biotech ภาคใต้ ) , หนูมาบ CD2 ต่อต้านสุกร ( antigenix อเมริกา
ฮันติงตันสถานีนิวยอร์ก ) , เมาส์ต่อต้านจาก CD1 ( Biotech ภาคใต้ ) , และเมาส์ต่อต้านมนุษย์ cd207
/ langerin ( denritics ดาร์ดิลี , ฝรั่งเศส ) Alexa Fluor
488 , Alexa Fluor 594 และ Alexa Fluor 647 ( โมเลกุล ) / Invitrogen Carlsbad , CA , - conjugated มัธยมศึกษา )
) ใช้สำหรับการตรวจสอบ นิวเคลียสเป็น
มองเห็นโดย dapi  ( 4 ,6  - diamidino-2-phenylindole ) โดยไม่รวมอยู่ในโปร -
ยาวทอง antifade ติดตั้งขนาดกลาง ( Invitrogen ) ส่วนนี้มีวัตถุประสงค์ในการ 90i กล้องจุลทรรศน์ Nikon , และภาพที่ถูกถ่ายด้วย
dsqi1mc กล้องดิจิตอลและเป็นองค์ประกอบซอฟต์แวร์ รุ่น 3.0 ( Nikon ,
Melville , NY )