With regard to the extraction solvent, and given that PAH
metabolites present high solubility in acetonitrile, this solvent
was chosen. Because enzymatic hydrolysis in the following step
is active in aqueous media, the extraction organic solvent must
be evaporated to dryness. However, the temperature applied
during the evaporation step may limit the recoveries of
hydroxylated metabolites. Different temperatures were tested
(35, 37, 40, and 42 °C) and, in agreement with other studies,17
the highest temperatures degrade these compounds and,
Hydrolysis Optimization. Because hydroxy metabolites
are biotransformed to phase II metabolites by conjugation with
glutathione, glucuronide, or sulfate, an enzymatic reaction with
β-glucuronidase is crucial to liberate them and obtain free
metabolites. As the enzymatic hydrolysis is a chemical reaction
catalyzed by an enzyme that uses water to break molecules, the
use of an aqueous buffer solution is essential. It will also keep
the pH constant at the optimum value for enzyme activity.
Therefore, several experimental conditions, such as pH (4.5,
5.0, and 5.5), buffer concentration (0.05, 0.1, and 0.5 M),
enzyme volume, incubation time (40, 45, 50, and 60 min), and
temperature (37, 40, and 42 °C) were optimized. In agreement
with other authors,17,35 it was found that 4 mL of a 0.1 M
sodium acetate buffer, at pH 5, at 37 °C for 45 min, gave the
best results.
กับตัวทำละลายสกัด และละที่
metabolites ปัจจุบันสูงละลาย acetonitrile ตัวทำละลายนี้
เลือก เนื่องจากเอนไซม์ในระบบไฮโตรไลซ์ในต่อไปนี้ขั้น
เป็นตัวทำละลายอินทรีย์สกัดต้องใช้งานในสื่ออควี
จะหายไปกับความแห้งกร้าน อย่างไรก็ตาม อุณหภูมิที่ใช้
ระหว่างการระเหย ขั้นตอนอาจจำกัด recoveries ของ
hydroxylated metabolites ได้ ทดสอบอุณหภูมิแตกต่างกัน
(35, 37, 40 และ 42 ° C) และ ยังคง ศึกษาอื่น 17
อุณหภูมิสูงย่อยสลายสารเหล่านี้ และ,
ไฮโตรไลซ์ปรับให้เหมาะสม เนื่องจาก hydroxy metabolites
จะ biotransformed ให้ metabolites II ระยะโดยการ conjugation ด้วย
กลูตาไธโอน glucuronide หรือซัลเฟต ปฏิกิริยาที่เอนไซม์ในระบบด้วย
β-glucuronidase คือการปลดปล่อยพวกเขา และได้รับฟรี
metabolites เป็นไฮโตรไลซ์เอนไซม์ในระบบ ปฏิกิริยาเคมี
กระบวน โดยเอนไซม์ที่ใช้น้ำในการทำลายโมเลกุล การ
ใช้โซลูชันอควีบัฟเฟอร์จำเป็น นอกจากนี้มันยังจะทำให้
ค่าคงค่า pH ค่าเหมาะสมสำหรับกิจกรรมของเอนไซม์
เหตุ หลายเงื่อนไขทดลอง เช่นค่า pH (4.5,
5.0 และ 5.5), บัฟเฟอร์ความเข้มข้น (0.05, 0.1 และ 0.5 M),
ปริมาณเอนไซม์ คณะทันตแพทยศาสตร์เวลา (40, 45, 50 และ 60 นาที), และ
อุณหภูมิเหมาะ (37, 40 และ 42 ° C) ตกลง
กับคน 17, 35 มันพบว่า mL 4 เมตร 0.1
โซเดียมบัฟเฟอร์ acetate ที่ pH 5 ที่ 37 ° C สำหรับ 45 นาที ให้การ
ผลลัพธ์ที่ดีที่สุด
การแปล กรุณารอสักครู่..
With regard to the extraction solvent, and given that PAH
metabolites present high solubility in acetonitrile, this solvent
was chosen. Because enzymatic hydrolysis in the following step
is active in aqueous media, the extraction organic solvent must
be evaporated to dryness. However, the temperature applied
during the evaporation step may limit the recoveries of
hydroxylated metabolites. Different temperatures were tested
(35, 37, 40, and 42 °C) and, in agreement with other studies,17
the highest temperatures degrade these compounds and,
Hydrolysis Optimization. Because hydroxy metabolites
are biotransformed to phase II metabolites by conjugation with
glutathione, glucuronide, or sulfate, an enzymatic reaction with
β-glucuronidase is crucial to liberate them and obtain free
metabolites. As the enzymatic hydrolysis is a chemical reaction
catalyzed by an enzyme that uses water to break molecules, the
use of an aqueous buffer solution is essential. It will also keep
the pH constant at the optimum value for enzyme activity.
Therefore, several experimental conditions, such as pH (4.5,
5.0, and 5.5), buffer concentration (0.05, 0.1, and 0.5 M),
enzyme volume, incubation time (40, 45, 50, and 60 min), and
temperature (37, 40, and 42 °C) were optimized. In agreement
with other authors,17,35 it was found that 4 mL of a 0.1 M
sodium acetate buffer, at pH 5, at 37 °C for 45 min, gave the
best results.
การแปล กรุณารอสักครู่..
เกี่ยวกับตัวทำละลายการสกัด และระบุว่าปัจจุบันสูงในการละลายสาร PAH
ไนตัวทำละลายนี้ถูกเลือก เพราะเอนไซม์ในขั้นตอนต่อไปนี้
อยู่ในสารละลายสื่อ , การสกัดตัวทำละลายอินทรีย์ต้อง
จะระเหยแห้ง . อย่างไรก็ตาม อุณหภูมิในการระเหยขั้นประยุกต์
อาจ จำกัด เมื่อ hydroxylated สาร .อุณหภูมิที่แตกต่างกันทดสอบ
( 35 , 37 , 40 , 42 ° C ) และ สอดคล้องกับการศึกษาอื่น ๆ 17
อุณหภูมิสูงสุด เนื่องจากสารเหล่านี้และ
การเพิ่มประสิทธิภาพ เพราะสารไฮดรอกซี
เป็น biotransformed เพื่อระยะที่ 2 โดยการรวมกันกับสาร
กลูตาไธโอน glucuronide หรือซัลเฟต , ปฏิกิริยาเอนไซม์บีตา - ที่มีอวัยวะสำคัญด้วย
เพื่อปลดปล่อยพวกเขาและได้รับฟรีสาร . เป็นเอนไซม์เอนไซม์คือ ปฏิกิริยาเร่งเคมี
โดยเอนไซม์ที่ใช้ทำลายโมเลกุลของน้ำ ,
ใช้โซลูชั่นสารละลายบัฟเฟอร์เป็นสิ่งสำคัญ มันจะเก็บ
คงที่ที่ค่า pH ที่เหมาะสมสำหรับกิจกรรมของเอนไซม์
ดังนั้นเงื่อนไขหลายทดลอง เช่น ค่า pH 4.5 ,
5.0 , 5.5 ) , บัฟเฟอร์ความเข้มข้น ( 0.05 , 0.1 และ 0.5 M )
ปริมาณเอนไซม์เวลาในการบ่ม ( 40 , 45 , 50 และ 60 นาที ) และ
อุณหภูมิ ( 37 , 40 และ 42 ° C ) ที่ดีที่สุด ในข้อตกลง
มีผู้เขียนอื่น ๆ 17,35 พบว่า 4 ml ของ 0.1 M
โซเดียมอะซิเตตบัฟเฟอร์ พีเอช 5 ที่ 37 ° C เป็นเวลา 45 นาทีให้
ผลที่ดีที่สุด
การแปล กรุณารอสักครู่..