BackgroundDirect sputum smear micro

Background
Direct sputum smear microscopy is the cornerstone of
tuberculosis (TB) diagnosis worldwide [1]. Direct smear
microscopy is rapid, inexpensive [2-4], highly specific [5-
7], and capable of identifying the most infectious cases of
TB [7-9], but its sensitivity is limited, particularly in those
with human immunodeficiency virus (HIV) co-infection
[10-13]. Processing of sputum with subsequent concentration
by centrifugation or sedimentation may increase
the sensitivity of smear microscopy [14], and some investigators
have recommended sputum processing and concentration
as a global standard [15]. However, others have
called for more evidence before implementing such a policy
change, citing concerns such as increased cost for
materials and training, higher biosafety requirements, and
difficulty standardizing techniques across sites [16]. Of
equally great concern, sputum concentration carries a risk
of decreased sensitivity (e.g., through destruction of
bacilli during concentration) [17,18] and specificity (e.g.,
through contamination during additional transfer steps)
[19,20]. In addition, the difficulty in blinding readers as
to whether a specimen is concentrated presents an inherent
risk of bias in studies of sputum concentration. Few
studies have employed the clear design and reporting
requirements required to minimize this inherent risk [21]
or evaluated sputum concentration in populations with
high HIV prevalence [22-26].
We therefore performed a prospective, blinded evaluation
of direct and concentrated smear microscopy – performed
simultaneously on a single early-morning sputum specimen
– in a population of hospitalized, HIV-infected
patients with cough for 2 or more weeks in Kampala,
Uganda.
Methods
Study Population
Consecutive HIV-infected patients admitted to the medical
wards of Mulago Hospital (Kampala, Uganda)
between September 2007 and April 2008 for respiratory
illness with cough of at least 2 weeks' duration were eligible
for the study. We included patients who provided
informed consent and an early-morning sputum specimen
for TB diagnosis. We excluded patients who were
receiving anti-TB treatment or had clinical evidence of
congestive heart failure. The study protocol was approved
by the institutional review boards at Makerere University,
Mulago Hospital, the Uganda National Council for Sciences
and Technology, and the University of California,
San Francisco.
Patient Evaluation
All patients were tested for HIV infection with a sequential
testing algorithm incorporating three rapid enzyme
immunoassay kits. For TB diagnosis, patients provided a
randomly-timed sputum sample for direct smear microscopy
at the time of enrollment. In addition, patients provided
an early-morning sputum sample on the morning
following admission; this sample was sent for both direct
and concentrated smear microscopy (as described below).
Patients without any positive smear examinations were
offered bronchoscopy with bronchoalveolar lavage (BAL)
if the procedure was deemed safe and appropriate by the
chest medicine consultant. All sputum and BAL specimens
were sent for mycobacterial culture. Patients with
suspected TB (determined by the treating ward physician)
began treatment with isoniazid, rifampin, ethambutol,
and pyrazinamide. Patients were evaluated during an outpatient
visit or by telephone interview between two and
four months after hospital discharge to assess for clinical/
radiographic improvement.
Laboratory Methods
Sputum and BAL samples were analyzed at the Uganda
National Tuberculosis and Leprosy Programme Reference
Laboratory (NTRL). Both direct and concentrated smears
were prepared from the same specimen. Direct smears
were prepared and stained using the hot Ziehl-Neelsen
method (1% carbol-fuchsin dye) [27]. Specimens were
then decontaminated with a 1% N-acetyl-L-cysteine
(NALC)-2% sodium hydroxide (NaOH)-2% sodium citrate
solution and concentrated by centrifugation at 3000
× g for 10 minutes [28]. The concentrated specimen was
then used to prepare mycobacterial cultures by inoculation
onto two separate Lowenstein-Jensen slants and, for
the early-morning specimen only, a concentrated smear
stained using the hot Ziehl-Neelsen method [29]. Concentrated
smears were labeled with random identification
numbers immediately after preparation so that readers
could not determine if direct and concentrated smears
were from the same patient.
NTRL staff, who were also blinded to all clinical information,
read all smears within 48 hours of preparation using
a standard light microscope (magnification 1000×). They
reported the presence or absence of acid-fast bacilli (AFB)
using the WHO/IUATLD scale, with a positive result corresponding
to ≥ 1 AFB per 100 high-power fields (HPFs)
[29]. They also read cultures weekly, designating as negative
any slant with no growth after eight weeks of incubation.
Positive cultures (defined as ≥ 1 colony forming
units) were confirmed with Ziehl-Neelsen staining. Study
staff promptly communicated all laboratory results to
ward physicians responsible for treatment decisions.
Since 2005, the Uganda NTRL has participated in a semiannual
external quality assurance program for smear
microscopy administered by the World Health Organization
and has passed all quality assurance assessments.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

พื้นหลังMicroscopy การเลอะเปื้อน sputum โดยตรงเป็นหลักสำคัญของวัณโรค (TB) วินิจฉัยทั่วโลก [1] เลอะเปื้อนโดยตรงmicroscopy คือรวดเร็ว ราคาไม่แพง [2-4], การ [5-7], และสามารถระบุกรณีติดเชื้อมากที่สุดTB [7-9], แต่ความไวของถูกจำกัด โดยเฉพาะอย่างยิ่งในผู้การติดเชื้อร่วมของมนุษย์เอชไอวีไวรัส (เอชไอวี)[10-13] การประมวลผล sputum กับความเข้มข้นต่อมาโดย centrifugation หรือตกตะกอนอาจเพิ่มความไวของการเลอะเปื้อน microscopy [14], และสืบสวนบางแนะนำประมวลผล sputum และเข้มข้นเป็นมาตรฐานสากลการ [15] อย่างไรก็ตาม ผู้อื่นได้เรียกหลักฐานเพิ่มเติมก่อนที่จะดำเนินนโยบายดังกล่าวเปลี่ยนแปลง อ้างความกังวลเช่นเพิ่มต้นทุนสำหรับวัสดุและการฝึกอบรม ความต้องการ biosafety สูงกว่า และความยากลำบากในการ standardizing เทคนิคทั่วอเมริกา [16] ของเท่า ๆ กัน กังวลมาก เข้มข้น sputum ดำเนินการความเสี่ยงของความไวลดลง (เช่น โดยทำลายbacilli ระหว่างความเข้มข้น) [17,18] และ specificity (เช่นผ่านการปนเปื้อนระหว่างขั้นตอนการโอนย้ายเพิ่มเติม)[19,20] นอกจากนี้ ความยากลำบากในการอ่านเป็น blindingเพื่อเป็นตัวอย่างว่าจะเข้มข้นแสดงตัวโดยธรรมชาติความเสี่ยงของความโน้มเอียงในการศึกษาความเข้มข้น sputum ไม่กี่ศึกษาได้จ้างล้างออกแบบและรายงานความต้องการจำเป็นเพื่อลดความเสี่ยงโดยธรรมชาตินี้ [21]หรือ sputum ค่าความเข้มข้นในกลุ่มประชากรที่มี[22-26] ชุกเชื้อเอชไอวีสูงขึ้นเราดำเนินการประเมินผู้สนใจ มองไม่เห็นเข้มข้น และตรงป้ายสี microscopy – ดำเนินการในการสิ่งส่งตรวจ sputum-เช้าเดียวกัน-ประชากรที่พัก การติด เชื้อเอชไอวีผู้ป่วยที่ มีไออย่าง น้อย 2 สัปดาห์ในคัมปาลายูกันดาวิธีการประชากรศึกษาแพทย์ที่รับผู้ป่วยติดเชื้อเอชไอวีต่อเนื่องเขตการปกครองของโรงพยาบาล Mulago (คัมปาลา ยูกันดา)ระหว่างเดือนกันยายนปี 2007 และ 2008 เมษายนสำหรับหายใจเจ็บป่วย ด้วยไอระยะเวลาอย่างน้อย 2 สัปดาห์มีสิทธิ์สำหรับการศึกษา เรารวมผู้ป่วยที่ให้แจ้งความยินยอมและการสิ่งส่งตรวจ sputum ช่วงเช้าสำหรับตับอักเสบ เราไม่รวมผู้ป่วยที่ได้รับการรักษาป้องกัน TB หรือมีหลักฐานทางคลินิกcongestive หัวใจล้มเหลว โพรโทคอลการศึกษาได้รับอนุมัติโดยที่สถาบันตรวจสอบบอร์ดมหาวิทยาลัย Makerereโรงพยาบาล Mulago ยูกันดาแห่งชาติคณะวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยี และมหาวิทยาลัยแคลิฟอร์เนียSan Franciscoประเมินผู้ป่วยผู้ป่วยทั้งหมดทดสอบสำหรับเชื้อเอชไอวีด้วยเป็นลำดับทดสอบอัลกอริทึมเพจเอนไซม์สามอย่างรวดเร็วชนิดติดตั้งอิสระ immunoassay สำหรับตับอักเสบ ให้ผู้ป่วยมีตัวอย่างแบบสุ่มเวลา sputum สำหรับ microscopy เลอะเปื้อนโดยตรงเวลาลงทะเบียน นอกจากนี้ ผู้ป่วยให้ตัวอย่างการ sputum ช่วงเช้าในตอนเช้าเข้าชมต่อไปนี้ ส่งตัวอย่างนี้สำหรับทั้งสองโดยตรงและเข้มข้นการเลอะเปื้อน microscopy (ตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง)ผู้ป่วยโดยไม่ต้องสอบใด ๆ บวกการเลอะเปื้อนได้บริการเจาะกับ bronchoalveolar lavage (ดุล)ถ้าขั้นตอนถือว่าปลอดภัย และเหมาะสมโดยการหน้าอกที่ปรึกษาด้านยา Sputum และดุลไว้เป็นตัวอย่างทั้งหมดมีส่งในวัฒนธรรม mycobacterial ผู้ป่วยที่มีสงสัย TB (ตามแพทย์วอร์ด treating)เริ่มรักษา ด้วย isoniazid, rifampin, ethambutolและ pyrazinamide มีประเมินผู้ป่วยระหว่างการรักษาเยี่ยมชม หรือโทรศัพท์สัมภาษณ์ระหว่างสอง และสี่เดือนหลังจากโรงพยาบาลถ่ายเพื่อประเมินในคลินิก /พัฒนาเจริญเต็มขั้นวิธีการปฏิบัติมีวิเคราะห์ตัวอย่าง sputum และดุลที่ยูกันดาวัณโรคแห่งชาติและอ้างอิงโปรแกรม Leprosyห้องปฏิบัติการ (NTRL) Smears ทั้งโดยตรง และเข้มข้นที่เตรียมจากตัวอย่างเดียวกัน Smears โดยตรงถูกเตรียม และสีใช้ร้อน Ziehl Neelsenวิธี (1% carbol fuchsin ย้อม) [27] ไว้เป็นตัวอย่างได้แล้ว decontaminated % 1 N-acetyl-L-cysteine(NALC) -2% โซเดียมไฮดรอกไซด์ (NaOH) -2% โซเดียมซิเตรตโซลูชัน และเข้มข้น โดย centrifugation ที่ 3000g × 10 นาที [28] มีตัวอย่างเข้มข้นใช้เตรียมวัฒนธรรม mycobacterial โดย inoculationบนสองแยก Lowenstein เจน slants และ สำหรับสิ่งส่งตรวจในช่วงเช้าเท่านั้น เข้มข้นการเลอะเปื้อนสีใช้วิธี Ziehl Neelsen ร้อน [29] เข้มข้นsmears ถูกติดป้ายสุ่มรหัสหมายเลขทันทีหลังจากเตรียมเพื่อที่ผู้อ่านไม่สามารถกำหนดถ้าตรง และเข้มข้น smearsได้จากผู้ป่วยเดียวกันNTRL เจ้าหน้าที่ก็ยังมองไม่เห็นข้อมูลทั้งหมดทางคลินิกอ่าน smears ทั้งหมดภายใน 48 ชั่วโมงของการเตรียมใช้มาตรฐานแสงกล้องจุลทรรศน์ (ขยาย 1000 ×) พวกเขารายงานสถานะการขาดงานของ acid-fast bacilli (AFB)ใช้คน / IUATLD สเกล กับผลบวกที่สอดคล้องการ AFB ≥ 1 ต่อฟิลด์กำลังแรงสูง 100 (HPFs)[29] พวกเขายังอ่านวัฒนธรรมทุกสัปดาห์ การกำหนดเป็นค่าลบมีเอียง ด้วยไม่เจริญเติบโตหลังจากสัปดาห์ที่ 8 ของคณะทันตแพทยศาสตร์วัฒนธรรมบวก (กำหนดเป็น≥ 1 โคโลนีที่ขึ้นรูปหน่วย) ได้ยืนยันกับ Ziehl Neelsen ย้อมสี ศึกษาพนักงานสื่อสารผลลัพธ์ทั้งหมดของห้องปฏิบัติการทันทีแพทย์ผู้ป่วยที่รับผิดชอบการตัดสินใจรักษา2548, NTRL ยูกันดาได้เข้าร่วมในการรายครึ่งปีโปรแกรมการประกันคุณภาพภายนอกสำหรับการเลอะเปื้อนmicroscopy ดูแล โดยองค์การอนามัยโลกและผ่านการประเมินการประกันคุณภาพทั้งหมด

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

พื้นหลังเสมหะโดยตรงกล้องจุลทรรศน์ smear เป็นรากฐานที่สำคัญของวัณโรค(TB) การวินิจฉัยทั่วโลก [1] ป้ายตรงกล้องจุลทรรศน์เป็นไปอย่างรวดเร็วราคาไม่แพง [2-4] เจาะจงมาก [5 7] และความสามารถในการระบุกรณีการติดเชื้อมากที่สุดของวัณโรค[7-9] แต่ความไวของมันจะถูก จำกัด โดยเฉพาะอย่างยิ่งในผู้ที่มีเชื้อไวรัสเอดส์(เอชไอวี) ติดเชื้อร่วม[10-13] การประมวลผลของเสมหะที่มีความเข้มข้นที่ตามมาจากการหมุนเหวี่ยงตกตะกอนหรืออาจเพิ่มความไวของกล้องจุลทรรศน์ป้าย[14] และนักวิจัยบางคนได้แนะนำการประมวลผลเสมหะและความเข้มข้นเป็นมาตรฐานทั่วโลก [15] แต่คนอื่น ๆ ได้เรียกร้องให้มีหลักฐานเพิ่มเติมก่อนที่จะดำเนินการตามนโยบายดังกล่าวเปลี่ยนแปลงอ้างความกังวลดังกล่าวเป็นค่าใช้จ่ายที่เพิ่มขึ้นสำหรับวัสดุและการฝึกอบรมความต้องการความปลอดภัยทางชีวภาพที่สูงขึ้นและความยากลำบากมาตรฐานเทคนิคในเว็บไซต์[16] จากความกังวลที่ดีอย่างเท่าเทียมกันความเข้มข้นเสมหะพกความเสี่ยงของความไวลดลง(เช่นผ่านการทำลายของแบคทีเรียในช่วงความเข้มข้น) [17,18] และความจำเพาะ (เช่นผ่านการปนเปื้อนในระหว่างขั้นตอนการโอนเงินเพิ่มเติม) [19,20] นอกจากนี้ยังมีความยากลำบากในผู้อ่านซึ่งทำให้ไม่เห็นเป็นไปได้ว่าชิ้นงานที่มีความเข้มข้นนำเสนอโดยธรรมชาติที่มีความเสี่ยงของการมีอคติในการศึกษาของความเข้มข้นของเสมหะ ไม่กี่ศึกษามีการจ้างงานการออกแบบที่ชัดเจนและการรายงานความต้องการที่จำเป็นในการลดความเสี่ยงนี้โดยธรรมชาติ[21] หรือความเข้มข้นของเสมหะประเมินในประชากรที่มีความสูงความชุกการติดเชื้อ HIV [22-26]. ดังนั้นเราจึงดำเนินการที่คาดหวังการประเมินผลตาบอดของกล้องจุลทรรศน์ smear โดยตรงและมีความเข้มข้น - ดำเนินการพร้อมกันในตัวอย่างเสมหะในเช้าวันเดียว- ในประชากรของโรงพยาบาลติดเชื้อ HIV ผู้ป่วยที่มีอาการไอเป็นเวลา 2 สัปดาห์หรือมากกว่าในกัมปาลา. ยูกันดาวิธีการศึกษาประชากรติดต่อกันเป็นผู้ป่วยที่ติดเชื้อHIV เข้ารับการรักษาทางการแพทย์ในความคุ้มครองของMulago โรงพยาบาล ( กัมปาลายูกันดา) ระหว่างเดือนกันยายนปี 2007 และเมษายน 2008 สำหรับระบบทางเดินหายใจการเจ็บป่วยที่มีอาการไอของระยะเวลาอย่างน้อย2 สัปดาห์ที่ผ่านมามีคุณสมบัติเหมาะสมสำหรับการศึกษา เรารวมถึงผู้ป่วยที่ให้ความยินยอมและตัวอย่างเสมหะตอนเช้าตรู่สำหรับการวินิจฉัยวัณโรค เราได้รับการยกเว้นผู้ป่วยที่ได้รับการรักษาป้องกันวัณโรคหรือมีหลักฐานทางคลินิกของโรคหัวใจล้มเหลว โปรโตคอลการศึกษาได้รับการอนุมัติจากคณะกรรมการทบทวนสถาบันมหาวิทยาลัย Makerere โรงพยาบาล Mulago, ยูกันดาสภาแห่งชาติเพื่อวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยีและมหาวิทยาลัยแคลิฟอร์เนียซานฟรานซิส. ประเมินผู้ป่วยผู้ป่วยทุกรายได้รับการตรวจการติดเชื้อเอชไอวีที่มีลำดับขั้นตอนวิธีการทดสอบการใช้มาตรการเอนไซม์ที่สามอย่างรวดเร็วimmunoassay ชุด สำหรับการวินิจฉัยวัณโรคผู้ป่วยให้ตัวอย่างเสมหะสุ่มหมดเวลาสำหรับกล้องจุลทรรศน์ smear โดยตรงในช่วงเวลาของการลงทะเบียน นอกจากนี้ผู้ป่วยให้ตัวอย่างเสมหะตอนเช้าตรู่ในเช้าวันต่อไปนี้เข้ารับการรักษา; ตัวอย่างนี้ถูกส่งไปทั้งทางตรงกล้องจุลทรรศน์ smear และเข้มข้น (ตามที่อธิบายไว้ด้านล่าง). ผู้ป่วยได้โดยไม่ต้องสอบ smear บวกใด ๆ ที่ถูกนำเสนอด้วยbronchoscopy ล้างหลอดลม (BAL) ถ้าขั้นตอนก็จะถือว่ามีความปลอดภัยและมีความเหมาะสมโดยที่ปรึกษาด้านการแพทย์หน้าอก ทั้งหมดเสมหะและตัวอย่าง BAL ถูกส่งวัฒนธรรมเชื้อ ผู้ป่วยที่มีวัณโรคสงสัยว่า (กำหนดโดยแพทย์รักษาผู้ป่วย) เริ่มการรักษาด้วย isoniazid, rifampin, ethambutol, และ pyrazinamide ผู้ป่วยที่ได้รับการประเมินผู้ป่วยนอกในระหว่างการเยี่ยมชมหรือโดยการสัมภาษณ์ทางโทรศัพท์ระหว่างสองและสี่เดือนหลังจากออกจากโรงพยาบาลเพื่อประเมินสำหรับคลินิก/ ปรับปรุงรังสี. ห้องปฏิบัติการวิธีเสมหะและ BAL ตัวอย่างวิเคราะห์ที่ยูกันดาแห่งชาติวัณโรคและโรคเรื้อนโครงการอ้างอิงทางห้องปฏิบัติการ(NTRL) ทั้งทางตรงและรอยเปื้อนเข้มข้นที่เตรียมจากชิ้นงานเดียวกัน รอยเปื้อนตรงได้รับการเตรียมความพร้อมและการใช้สีร้อน Ziehl-Neelsen วิธี (1% ย้อม carbol-ฟุช) [27] ตัวอย่างถูกdecontaminated แล้วกับ 1% N-acetyl-L-cysteine ​​(NALC) -2% โซดาไฟ (NaOH) -2% โซเดียมซิเตรทวิธีการแก้ปัญหาและความเข้มข้นโดยการหมุนเหวี่ยงที่3000 ×กรัมเป็นเวลา 10 นาที [28] ตัวอย่างที่มีความเข้มข้นที่ถูกนำมาใช้เพื่อเตรียมความพร้อมวัฒนธรรมเชื้อโดยการฉีดวัคซีนไปยังสองแยกslants Lowenstein-เซ่นและสำหรับตัวอย่างตอนเช้าตรู่เท่านั้นเปื้อนเข้มข้นสีโดยใช้วิธีร้อนZiehl-Neelsen [29] เข้มข้นรอยเปื้อนมีป้ายที่มีการระบุสุ่มตัวเลขทันทีหลังจากที่การเตรียมความพร้อมเพื่อให้ผู้อ่านไม่สามารถตรวจสอบว่ารอยเปื้อนโดยตรงและมีความเข้มข้นมาจากผู้ป่วยรายเดิม. พนักงาน NTRL ที่ถูกตาบอดยังข้อมูลทางคลินิกทั้งหมดอ่านรอยเปื้อนทั้งหมดภายใน48 ชั่วโมงของการเตรียมการใช้กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงมาตรฐาน (1000 ×ขยาย) พวกเขารายงานการมีหรือไม่มีของแบคทีเรียกรดอย่างรวดเร็ว (AFB) โดยใช้ WHO / IUATLD ขนาดที่มีผลบวกที่สอดคล้องกันที่จะ≥ 1 AFB ต่อ 100 สาขากำลังสูง (HPFS) [29] พวกเขายังอ่านวัฒนธรรมประจำสัปดาห์กำหนดเป็นเชิงลบเอียงใด ๆ ที่มีการเจริญเติบโตหลังจากแปดสัปดาห์ของการบ่ม. วัฒนธรรมในเชิงบวก (หมายถึง≥ 1 อาณานิคมสร้างหน่วย) ได้รับการยืนยันด้วยการย้อมสี Ziehl-Neelsen การศึกษาพนักงานสื่อสารทันทีทุกผลการตรวจทางห้องปฏิบัติการที่จะปัดความรับผิดชอบในการแพทย์การตัดสินใจการรักษา. ตั้งแต่ปี 2005 ยูกันดา NTRL ได้มีส่วนร่วมในครึ่งปีโปรแกรมการประกันคุณภาพภายนอกสำหรับป้ายกล้องจุลทรรศน์บริหารงานโดยองค์การอนามัยโลกและได้ผ่านการประเมินผลการประกันคุณภาพทั้งหมด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

พื้นหลัง
เสมหะโดยตรงภายในกล้องจุลทรรศน์เป็นหลักสำคัญของ
วัณโรค ( TB ) การวินิจฉัยทั่วโลก [ 1 ] กล้องจุลทรรศน์ละเลง
โดยตรงเป็นอย่างรวดเร็ว , ไม่แพง [ 2-4 ] ขอเฉพาะ [ 5 -
7 ] , และความสามารถในการระบุกรณีติดเชื้อวัณโรคมากที่สุด
[ 4-5 ] แต่ความไว จำกัด โดยเฉพาะอย่างยิ่งในผู้
กับไวรัสภูมิคุ้มกันบกพร่องของมนุษย์ ( HIV ) Co การติดเชื้อ
[ 10 ]