2.3. Extraction of DNA and PCR ampl

2.3. Extraction of DNA and PCR amplification of ITS rDNA

Isolates in this study were incubated on the fresh PDA in the darkness at 25 °C for 10 days, then the actively growing mycelium on PDA plate were scraped using a sterile pipette tips. The DNA were extracted using the E.Z.N.A.TM Fungal DNA Mini Kit (Omegabiotek, Norcross, USA) referring to the manufacturers’ instructions.

PCR amplification reaction of 50 μl was as follows: Taq PCR Master Mix 25 μl (Qiagen, Bejing), 2 μl (5 μM) each primer, 19 μl H2O and 2 μl genomic DNA. The PCR condition was 95 °C for 2 min, 34 cycles at 94 °C for 30 s, 60 °C for 40 s, 72 °C for 30 s, with a final extension at 72 °C for 10 min. The primers ITS1-OF-1, ITS1-OF-2 and ITS4-OF used in this study were referred to Taylor and McCormick (2008). The 5 μl PCR products were electrophoresed in 1% (w/v) agarose gels and stained with ethidium bromide. After visual inspection assisted by a UV light, 45 μl PCR products were purified and sequenced at the Bejing GENEWIZ Biological Engineering Technology & Services. The sequences obtained in this study were submitted to GenBank and the accession numbers of sequences were JN863900 and JN863903.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.3. สกัดดีเอ็นเอและ PCR ขยายของ rDNAแยกในการศึกษานี้ได้รับการกกบน PDA สดในความมืดที่ 25 ° C 10 วัน แล้วยังเติบโตได้บนแผ่น PDA ถูกขูดใช้เคล็ดลับการปิเปตที่ฆ่าเชื้อ ดีเอ็นเอที่สกัดโดยใช้ E.Z.N.A.TM เชื้อราดีเอ็นเอขนาดเล็กชุด (Omegabiotek เที่ยว สหรัฐอเมริกา) หมายถึงคำแนะนำของผู้ผลิตปฏิกิริยาขยาย PCR ของ 50 μl เป็น: Taq PCR หลักผสม 25 μl (Qiagen, Bejing), รองพื้น 2 μl (5 ไมครอน) แต่ละ 19 μl H2O และ 2 μl การดีเอ็นเอ สภาพ PCR ได้ 95 ° C เป็นเวลา 2 นาที 34 รอบที่ 94 ° C 30 s, 60 ° C สำหรับ 40 s, 72 ° C 30 s ขยาย 72 ° c สำหรับ 10 นาทีสุดท้าย ไพรเมอร์ ITS1 1, ITS1 2 และ ITS4-ใช้ในการศึกษานี้ถูกเรียกว่า Taylor และแมคคอร์มิค (2008) ผลิตภัณฑ์ PCR μl 5 electrophoresed ในเจ agarose 1% (w/v) และย้อม ด้วยโบรไมด์ ethidium หลังจากตรวจสอบรายชื่อแสงยูวี ผลิตภัณฑ์ PCR μl 45 ได้บริสุทธิ์ และเรียงลำดับที่ Bejing GENEWIZ ชีวภาพวิศวกรรมและบริการ ลำดับที่ได้รับในการศึกษานี้ส่งมาที่ GenBank และหมายเลขทะเบียนลำดับที่มี JN863900 และ JN863903

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.3 การสกัดดีเอ็นเอและดีเอ็นเอ ( rDNA ของของไอโซเลท ในการศึกษาครั้งนี้ทำการบน PDA สดในที่มืดที่อุณหภูมิ 25 ° C เป็นเวลา 10 วัน แล้วอย่างเติบโตเส้นใยบนอาหาร PDA แผ่นขูดใช้ปิเปต ทิปที่เป็นหมัน ดีเอ็นเอที่สกัดโดยใช้ e.z.n.a.tm เชื้อราดีเอ็นเอ Mini Kit ( omegabiotek นอร์ครอส , สหรัฐอเมริกา ) หมายถึง ผู้ผลิต ' คำสั่งปฏิกิริยา PCR ( 50 μผมดังนี้ ทัค PCR Master Mix 25 μ L ( เพิ่ม 2 , μปักกิ่ง ) , L ( 5 μ M ) แต่ละสีรองพื้น h2o และฉัน 19 μ 2 μ L จีโนมดีเอ็นเอ การตรวจสภาพ 95 องศา C เป็นเวลา 2 นาที , 34 รอบใน 94 ° C เป็นเวลา 30 , 60 องศา C 40 , 72 ° C เป็นเวลา 30 วินาที กับ 72 ° C ) สุดท้าย 10 นาทีด้วย its1-of-1 its1-of-2 its4-of , และใช้ในการศึกษา คือ เจ้าตัว ( เทย์เลอร์และ แมคคอร์มิค 2008 ) 5 μผม PCR ผลิตภัณฑ์ electrophoresed 1% ( w / v ) และเจล ( เปื้อนทิเดียมโบรไมด์ . หลังจากตรวจสอบภาพช่วยโดยแสงยูวี , 45 μผม PCR ผลิตภัณฑ์บริสุทธิ์และลำดับเบสที่ปักกิ่ง genewiz เทคโนโลยีวิศวกรรมชีวภาพและบริการ ลำดับโปรตีนนี้ถูกส่งไปยังหมายเลขของลำดับและพบนางและมี jn863900 jn863903 .