2.2. Cloning of Slc7a11 cDNAIn orde

2.2. Cloning of Slc7a11 cDNA
In order to clone the alpaca Slc7a11, 4 μg of total RNA from the skin was used to synthesize the first cDNA using PrimeScript II RTase reverse transcriptase (TakaRa, Japan) following the manufacturers' instructions. Using comparison among the published Slc7a11 cDNA sequences, two pairs of degenerate primers were designed for cloning alpaca Slc7a11 ( Table 1). The 25 μL PCR reaction included 12.5 μL 2 × Es Taq MasterMix (CWBIO, China), 1.0 μL of both forward and reverse primers, 2 μL diluted (10 times) cDNA and 8.5 μL water. The following cycling parameters were used for PCR: 95 °C held for 2 min, followed by 35 cycles of 95 °C for 30 s, 57 °C for 30 s and 72 °C for 1 min. The PCR products were analyzed by 1% agarose gel electrophoresis in the presence of ethidium bromide. The PCR products were gel-purified and cloned into the pUC-T vector (CWBIO, China), transformed into DH5α competent cells (CWBIO, China), extracted and sequenced.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

2.2 การโคลนของ Slc7a11 cDNAการโคลนอัลปากา Slc7a11, μg 4 ของอาร์เอ็นเอรวมจากผิวใช้สังเคราะห์ cDNA แรกใช้ PrimeScript II RTase กลับ transcriptase (TakaRa ญี่ปุ่น) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ใช้เปรียบเทียบระหว่างลำดับ cDNA Slc7a11 เผยแพร่ สองคู่ไพรเมอร์ degenerate ถูกออกแบบสำหรับโคลนอัลปากา Slc7a11 (ตารางที่ 1) ปฏิกิริยา PCR 25 μL รวม 12.5 μL 2 ซื้อ Es Taq MasterMix (CWBIO จีน), μL 1.0 ของไพรเมอร์ทั้งไปข้างหน้า และย้อนกลับ cDNA μL ผสม (10 ครั้ง) 2 และ 8.5 μL น้ำ ใช้พารามิเตอร์ต่อไปนี้ขี่จักรยานสำหรับ PCR: 95 ° C จัดขึ้น 2 นาที ตาม ด้วยรอบ 35 ของ 95 ° C สำหรับ 30 s, 57 ° C สำหรับ 30 s และ 72 องศาเซลเซียสใน 1 นาที ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกวิเคราะห์ โดย electrophoresis เจล 1% agarose ในต่อหน้าของโบรไมด์ ethidium ผลิตภัณฑ์ PCR ถูกเจบริสุทธิ์ และโคลนลงในเวกเตอร์ pUC T (CWBIO จีน), ที่เปลี่ยนเป็นเซลล์เชี่ยวชาญ DH5α (CWBIO จีน), แยก และเรียงลำดับ

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

2.2 การโคลนยีน Slc7a11
เพื่อโคลน Alpaca Slc7a11 4 ไมโครกรัมของอาร์เอ็นเอทั้งหมดจากผิวถูกใช้ในการสังเคราะห์ cDNA ครั้งแรกที่ใช้ PrimeScript II RTase reverse transcriptase (Takara, ญี่ปุ่น) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ใช้เปรียบเทียบระหว่างการตีพิมพ์ลำดับยีน Slc7a11 สองคู่ของไพรเลวได้รับการออกแบบสำหรับการโคลน Alpaca Slc7a11 (ตารางที่ 1) 25 ไมโครลิตรปฏิกิริยา PCR รวม 12.5 ไมโครลิตร 2 × Es Taq Mastermix (CWBIO, จีน), 1.0 ไมโครลิตรของทั้งสองไปข้างหน้าและย้อนกลับไพร 2 ไมโครลิตรเจือจาง (10 ครั้ง) cDNA และน้ำไมโครลิตร 8.5 พารามิเตอร์การขี่จักรยานต่อไปนี้ถูกนำมาใช้สำหรับ PCR: 95 ° C ถือเป็นเวลา 2 นาทีตามด้วย 35 รอบ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 30 วินาที, 57 ° C เป็นเวลา 30 วินาทีและ 72 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 1 นาที ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์ได้รับการวิเคราะห์โดย 1% agarose เจลอิเล็กในการปรากฏตัวของโบรไมด์ ethidium ผลิตภัณฑ์พีซีอาร์มีเจลบริสุทธิ์และโคลนเข้าสู่เวกเตอร์ PUC-T (CWBIO, จีน), เปลี่ยนเป็นเซลล์DH5αพนักงานเจ้าหน้าที่ (CWBIO, จีน), สกัดและติดใจ

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

2.2 . การโคลนยีน slc7a11
เพื่อลอกแบบอัลปาก้า slc7a11 4 μกรัมของอาร์เอ็นเอรวมจากผิวหนังที่ถูกใช้เพื่อสังเคราะห์ cDNA primescript แรกใช้ 2 rtase reverse transcriptase ( Takara , ญี่ปุ่น ) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต . การเปรียบเทียบวิธีเผยแพร่ slc7a11 degenerate primers ลำดับ สองคู่ที่ถูกออกแบบมาสำหรับการโคลนสัตว์ slc7a11 ( ตารางที่ 1 )25 μ L เพื่อตรวจหารวม 12.5 μ L 2 × ES ได้ดี mastermix ( cwbio , จีน ) , 1.0 μ L ทั้งสองไปข้างหน้าและย้อนกลับไพรเมอร์ 2 μฉันเจือจาง ( 10 ครั้ง ) μ cDNA และ 8.5 ลิตรน้ำ ต่อไปนี้จักรยานค่าใช้ PCR : 95 องศา C จัดขึ้นเป็นเวลา 2 นาที ตามด้วย 35 รอบ 95 องศา C 30 , 57 องศา C เป็นเวลา 30 วินาทีและ 72 ° C เป็นเวลา 1 นาทีผลิตภัณฑ์ PCR โดยใช้ 1% เจลอิเล็กโตรโฟรีซิสในการปรากฏตัวของทิเดียมโบรไมด์ . ที่เพิ่มปริมาณเจลบริสุทธิ์และโคลนเข้าไปใน puc-t เวกเตอร์ ( cwbio , จีน ) , แปลงαเชี่ยวชาญพบว่ามีเซลล์ ( cwbio , จีน ) , สกัดนี้