Hadj-Ali et al., 2009) and carp hepatopancreas (Cao et al., 2000), and was higher than those of trypsins from grey triggerfish (Balistes capriscus) (Jellouli et al., 2009), S. officinalis (Balti et al., 2009), sardine (Sardina pilchardus) (Bougatef, Souissi, Fakhfakh, Ellouz-Triki, & Nasri, 2007), jacopever (Sebastes schlegelii) and elkhorn sculpin
(Alcichthys alcicornis) (Kishimura et al., 2007), brownstripe red snapper (Lutjanus vitta) (Khantaphant & Benjakul, 2010) and arabesque greenling (P. azonus) (Kanno et al., 2011). The purity of the enzyme was also evaluated by using native
PAGE. As reported in Fig. 2b, S. basilisca trypsin migrated as a single protein band, indicating the homogeneity of the enzyme and confirming that the purified trypsin had only one isoform. The proteolytic activity of this protein band was confirmed by zymogram activity staining. Casein-zymogram is a very sensitive and rapid assay method that detects nanograms of protein. As shown in Fig. 1b, a unique clear band of casein hydrolysis was observed in the gel, indicating the purity of the purified enzyme. The N-terminal amino acid sequence of the purified trypsin was determined by the automated Edman method after SDS–PAGE. The 12 N-terminal amino acids of the S. basilisca trypsin were determined
to be IVGGRECTEPSQ. This sequence showed uniformity, indicating that it was isolated in a purified form. The alignment
of the N-terminal amino acid sequence of S. basilisca trypsin with the sequences of other animal trypsins shows the conservation of the consensus IVGG sequence (Fig. 3). The N-terminal sequence of S. basilisca trypsin showed high homology with that from
Hadj-Ali et al., 2009) and carp hepatopancreas (Cao et al., 2000), and was higher than those of trypsins from grey triggerfish (Balistes capriscus) (Jellouli et al., 2009), S. officinalis (Balti et al., 2009), sardine (Sardina pilchardus) (Bougatef, Souissi, Fakhfakh, Ellouz-Triki, & Nasri, 2007), jacopever (Sebastes schlegelii) and elkhorn sculpin(Alcichthys alcicornis) (Kishimura et al., 2007), brownstripe red snapper (Lutjanus vitta) (Khantaphant & Benjakul, 2010) and arabesque greenling (P. azonus) (Kanno et al., 2011). The purity of the enzyme was also evaluated by using nativePAGE. As reported in Fig. 2b, S. basilisca trypsin migrated as a single protein band, indicating the homogeneity of the enzyme and confirming that the purified trypsin had only one isoform. The proteolytic activity of this protein band was confirmed by zymogram activity staining. Casein-zymogram is a very sensitive and rapid assay method that detects nanograms of protein. As shown in Fig. 1b, a unique clear band of casein hydrolysis was observed in the gel, indicating the purity of the purified enzyme. The N-terminal amino acid sequence of the purified trypsin was determined by the automated Edman method after SDS–PAGE. The 12 N-terminal amino acids of the S. basilisca trypsin were determinedto be IVGGRECTEPSQ. This sequence showed uniformity, indicating that it was isolated in a purified form. The alignmentof the N-terminal amino acid sequence of S. basilisca trypsin with the sequences of other animal trypsins shows the conservation of the consensus IVGG sequence (Fig. 3). The N-terminal sequence of S. basilisca trypsin showed high homology with that from
การแปล กรุณารอสักครู่..
ฮัจญ์อาลี et al., 2009) และตับปลาคาร์พ (Cao et al., 2000) และสูงกว่า trypsins จากกวางสีเทา (Balistes capriscus) (Jellouli et al., 2009), เอส officinalis (Balti et al., 2009) ปลาซาร์ดีน (Sardina pilchardus) (Bougatef, Souissi, Fakhfakh, Ellouz-Triki และนาสรี่, 2007) jacopever (Sebastes schlegelii) และคอร์น Sculpin
(Alcichthys alcicornis) (Kishimura et al., 2007) brownstripe ปลากะพงแดง (Lutjanus vitta) (Khantaphant และเบญจกุล, 2010) และอาหรับ greenling (พี azonus) (Kanno et al., 2011) ความบริสุทธิ์ของเอนไซม์ที่ได้รับการประเมินโดยใช้พื้นเมือง
หน้า ตามที่ได้รายงานในรูป 2b, trypsin เอส basilisca อพยพเป็นวงดนตรีที่มีโปรตีนเดียวแสดงให้เห็นความเป็นเนื้อเดียวกันของเอนไซม์และยืนยันว่า trypsin บริสุทธิ์มีเพียงหนึ่งไอโซฟอร์ม กิจกรรมของวงดนตรีโปรตีนโปรตีนนี้ได้รับการยืนยันโดยการย้อมสีกิจกรรม zymogram เคซีน zymogram เป็นวิธีการทดสอบที่มีความสำคัญมากและอย่างรวดเร็วที่ตรวจพบนาโนกรัมของโปรตีน ดังแสดงในรูป 1 ขวงดนตรีที่ชัดเจนเป็นเอกลักษณ์ของการย่อยเคซีนพบว่าในเจลแสดงให้เห็นความบริสุทธิ์ของเอนไซม์ กรดอะมิโน n- ขั้วลำดับของ trypsin บริสุทธิ์ถูกกำหนดโดยวิธีการ Edman อัตโนมัติหลังจาก SDS-PAGE 12 n- ขั้วของกรดอะมิโน trypsin basilisca เอสได้รับการพิจารณา
ให้เป็น IVGGRECTEPSQ ลำดับนี้แสดงให้เห็นความสม่ำเสมอแสดงให้เห็นว่ามันถูกแยกออกในรูปแบบที่บริสุทธิ์ การจัดตำแหน่ง
ของ N ขั้วลำดับกรดอะมิโนของ trypsin basilisca เอสที่มีลำดับของ trypsins สัตว์อื่น ๆ ที่แสดงให้เห็นถึงการอนุรักษ์ลำดับ IVGG ฉันทามติ (รูปที่. 3) ลำดับ n- ขั้วของ trypsin เอส basilisca แสดงให้เห็นคล้ายคลึงกันสูงที่มีที่มาจาก
การแปล กรุณารอสักครู่..
hadj Ali et al . , 2009 ) และปลาคาร์พตับ ( เคา et al . , 2000 ) และสูงกว่า trypsins จากวัวสีเทา ( balistes capriscus ) ( jellouli et al . , 2009 ) , S . officinalis ( Balti et al . , 2009 ) , ปลา ( ปลาซาร์ดีน ) ( bougatef souissi , , fakhfakh ellouz ทริคี , &กุญชร , 2550 ) , jacopever ( sebastes schlegelii ) และเลย์เ คอร์น Sculpin
( alcichthys alcicornis ) ( kishimura et al . ,2007 ) , ความพอใจในการทำงาน ( ปลากะพงแดง วิทธา ) ( khantaphant &กูล , 2010 ) และอาสาสมัคร greenling ( หน้า azonus ) ( คันโนะ et al . , 2011 ) ความบริสุทธิ์ของเอนไซม์ถูกประเมินโดยใช้พื้นเมือง
หน้า ตามที่รายงานในรูปที่ 2B , S . basilisca ซินโยกย้ายเป็นแถบโปรตีนเดี่ยว แสดงความเป็นเอกพันธ์ของเอนไซม์บริสุทธิ์เอนไซม์ และยืนยันว่ามีเพียงหนึ่งไอโซฟอร์ม .กิจกรรมของโปรตีนโปรตีนนี้วงดนตรีที่ได้รับการยืนยันโดยทดลอง activity staining โดยทดลองคือ อ่อนไหวง่าย และวิธีวิเคราะห์อย่างรวดเร็วที่ตรวจจับนาโนกรัมของโปรตีน ดังแสดงในรูปที่ 1 บี วงดนตรีที่ชัดเจนเป็นเอกลักษณ์ของเคซีน ไฮโดรเจล พบว่าแสดงความบริสุทธิ์ของเอนไซม์ .ที่ถูกลำดับกรดอะมิโนของเอนไซม์บริสุทธิ์ที่ถูกกำหนดโดยอัตโนมัติหลังจาก edman วิธี SDS - หน้า 12 กรดอะมิโนกรดอะมิโนของเอนไซม์เอส basilisca ตัดสินใจ
เป็น ivggrectepsq . ลำดับนี้มีความสม่ำเสมอ ระบุว่าเป็นสายพันธุ์บริสุทธิ์ในแบบฟอร์ม การเรียงตัวของกรดอะมิโน
ลำดับกรดอะมิโนของ sbasilisca ซินกับลำดับของ trypsins สัตว์อื่นแสดงการอนุรักษ์ฉันทามติ ivgg ลำดับ ( รูปที่ 3 ) ลำดับกรดอะมิโนของเอนไซม์พบว่า S . basilisca ซึ่งสูงจาก
การแปล กรุณารอสักครู่..