The Pseudomonas aeruginosa type III

The Pseudomonas aeruginosa type III secretion system (T3SS) is a primary virulence factor important for phagocytic avoidance, disruption of host cell signaling, and host cell cytotoxicity. ExsA is the master regulator of T3SS transcription. The expression, synthesis, and activity of ExsA is tightly regulated by both intrinsic and extrinsic factors. Intrinsic regulation consists of the well-characterized ExsECDA partner-switching cascade, while extrinsic factors include global regulators that alter exsA transcription and/or translation. To identify novel extrinsic regulators of ExsA, we conducted a transposon mutagenesis screen in the absence of intrinsic control. Transposon disruptions within gene PA2840, which encodes a homolog of the Escherichia coli RNA-helicase DeaD, significantly reduced T3SS gene expression. Recent studies indicate that E. coli DeaD can promote translation by relieving inhibitory secondary structures within target mRNAs. We report here that PA2840, renamed DeaD, stimulates ExsA synthesis at the posttranscriptional level. Genetic experiments demonstrate that the activity of an exsA translational fusion is reduced in a deaD mutant. In addition, exsA expression in trans fails to restore T3SS gene expression in a deaD mutant. We hypothesized that DeaD relaxes mRNA secondary structure to promote exsA translation and found that altering the mRNA sequence of exsA or the native exsA Shine-Dalgarno sequence relieved the requirement for DeaD in vivo. Finally, we show that purified DeaD promotes ExsA synthesis using in vitro translation assays. Together, these data reveal a novel regulatory mechanism for P. aeruginosa DeaD and add to the complexity of global regulation of T3SS.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

ชนิด Pseudomonas aeruginosa ระบบหลั่ง III (T3SS) เป็นปัจจัยหลัก virulence สำคัญหลีกเลี่ยง phagocytic ทรัพยของสัญญาณเซลล์โฮสต์ โฮสต์เซลล์ cytotoxicity ExsA จะควบคุมหลักของราชบัณฑิตยสถาน T3SS แน่นนิพจน์ การสังเคราะห์ และการ ExsA จะถูกกำหนด โดยปัจจัยทั้ง intrinsic และสึกหรอ ระเบียบ intrinsic ประกอบด้วยเรียงซ้อนสลับคู่ ExsECDA ดี characterized ในขณะที่ปัจจัย extrinsic รวมหน่วยงานกำกับดูแลสากลที่เปลี่ยนแปลง exsA transcription หรือแปล เพื่อระบุเร็คกูเลเตอร์สึกหรอนวนิยายของ ExsA เราทำหน้าจอ mutagenesis transposon ของตัวควบคุม intrinsic หยุดชะงัก transposon ภายในยีน PA2840 ซึ่งจแมป homolog ของที่ Escherichia coli helicase อาร์เอ็นเอตาย มากลด T3SS ยีน การศึกษาล่าสุดบ่งชี้ว่า E. coli ตายสามารถส่งเสริมการแปล โดยการปลดปล่อยลิปกลอสไขโครงสร้างรองภายในเป้าหมาย mRNAs เรารายงานที่นี่ว่า PA2840 ตายเปลี่ยนชื่อ กระตุ้นการสังเคราะห์ ExsA ระดับ posttranscriptional การทดลองทางพันธุกรรมแสดงให้เห็นว่า กิจกรรมของการฟิวชั่น translational exsA ลงใน mutant ตาย นอกจากนี้ นิพจน์ exsA ธุรกรรมล้มเหลวคืน T3SS ยีนใน mutant ตาย เราตั้งสมมติฐานว่าที่ตายก็โครงสร้างรองของ mRNA การส่งเสริมการแปล exsA พบ mRNA ลำดับของ exsA ที่ดัดแปลง หรือลำดับดั้งเดิม exsA ขัด Dalgarno ปลดปล่อยความต้องการให้ตายใน vivo สุดท้าย เราแสดงว่า บริสุทธิ์ตายส่งเสริมใช้ assays แปลในการสังเคราะห์ ExsA กัน ข้อมูลเหล่านี้เปิดเผยกลไกการกำกับดูแลที่นวนิยายสำหรับ P. aeruginosa ตาย และเพิ่มความซับซ้อนของกฎระเบียบสากลของ T3SS

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

ชนิดเชื้อ Pseudomonas aeruginosa ระบบการหลั่ง iii (T3SS) เป็นปัจจัยหลักที่สำคัญความรุนแรงเพื่อหลีกเลี่ยง phagocytic, การหยุดชะงักของการส่งสัญญาณเซลล์โฮสต์และโฮสต์พิษเซลล์ ExsA เป็นหน่วยงานกำกับดูแลหลักของการถอดความ T3SS การแสดงออกการสังเคราะห์และการทำงานของ ExsA ถูกควบคุมอย่างแน่นหนาโดยปัจจัยทั้งภายในและภายนอก การควบคุมภายในประกอบด้วยความโดดเด่น ExsECDA น้ำตกพันธมิตรเปลี่ยนในขณะที่ปัจจัยภายนอกรวมถึงหน่วยงานกำกับดูแลระดับโลกที่เปลี่ยนแปลงถอดความ exsA และ / หรือการแปล เพื่อระบุหน่วยงานกำกับดูแลภายนอกนวนิยาย ExsA เราดำเนินการหน้าจอฉับ transposon ในกรณีที่ไม่มีการควบคุมที่แท้จริง การหยุดชะงัก transposon ภายใน PA2840 ยีนซึ่งเข้ารหัส homolog ของอีโค RNA-helicase ตายลดลงอย่างมากการแสดงออกของยีน T3SS การศึกษาล่าสุดแสดงให้เห็นว่าเชื้อ E. coli ตายสามารถส่งเสริมการแปลโดยการบรรเทาโครงสร้างรองยับยั้งภายใน mRNAs เป้าหมาย เรารายงานที่นี่ที่ PA2840 เปลี่ยนชื่อที่ตายแล้วช่วยกระตุ้นการสังเคราะห์ ExsA ในระดับ posttranscriptional การทดลองทางพันธุกรรมแสดงให้เห็นว่าการทำงานของฟิวชั่นแปล exsA จะลดลงในการกลายพันธุ์ที่ตายแล้ว นอกจากนี้การแสดงออก exsA ในทรานส์ไม่สามารถเรียกคืนการแสดงออกของยีน T3SS ในมนุษย์กลายพันธุ์ที่ตายแล้ว เราตั้งสมมติฐานว่าตายผ่อนคลายโครงสร้าง mRNA รองเพื่อส่งเสริมการแปล exsA และพบว่าการเปลี่ยนแปลงของลำดับ mRNA exsA หรือพื้นเมือง exsA Shine-Dalgarno sequence โล่งใจต้องการให้ตายในร่างกาย สุดท้ายเราแสดงให้เห็นว่าคนตายบริสุทธิ์ส่งเสริมการสังเคราะห์ ExsA ใช้ในหลอดทดลองการวิเคราะห์การแปล ร่วมกันข้อมูลเหล่านี้เผยให้เห็นกลไกการควบคุมใหม่สำหรับพี aeruginosa ที่ตายแล้วและเพิ่มความซับซ้อนของการควบคุมระดับโลกของ T3SS

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

ส่วน PS2 Type III ( T3SS ) เป็นหลักสำคัญสำหรับโรคสิ่งแปลกปลอมการหลีกเลี่ยง , การหยุดชะงักของโฮสต์สัญญาณมือถือ และความเป็นพิษต่อเซลล์โฮสต์ exsa เป็นอาจารย์คุม t3ss transcription การแสดงออก การสังเคราะห์ และกิจกรรมของ exsa จะแน่นควบคุม ทั้งจากปัจจัยภายในและภายนอก .ระเบียบภายในประกอบด้วยดีลักษณะ exsecda คู่สลับน้ำตก ในขณะที่ปัจจัยภายนอก ได้แก่ โลกที่เปลี่ยน exsa ควบคุมการถอดรหัสและ / หรือแปล เพื่อระบุความควบคุมของนวนิยาย exsa เราทำการ ? ? ? ? ? ของหน้าจอในการขาดการควบคุมที่แท้จริง ? ? ? ? ? pa2840 หยุดชะงักในยีน ,ที่เข้ารหัสเป็น homolog ของ Escherichia coli อาร์เอ็นเอโมเลกุลตายลดการแสดงออกของยีน t3ss อย่างมีนัยสำคัญ การศึกษาล่าสุดบ่งชี้ว่า E . coli ที่ตายสามารถส่งเสริมการแปลโดยการโครงสร้างทุติยภูมิออกฤทธิ์ภายในรหัสของเป้าหมาย เรารายงานมาว่า pa2840 , เปลี่ยนชื่อตาย ช่วยกระตุ้นการสังเคราะห์ exsa ในระดับ posttranscriptional .การทดลองทางพันธุกรรมแสดงให้เห็นว่ากิจกรรมของ exsa แปลฟิวชั่นลดลงตายที่กลายพันธุ์ นอกจากนี้ exsa การแสดงออกในทรานส์ล้มเหลวในการเรียกคืน t3ss ตายยีนกลายพันธุ์เราตั้งสมมุติฐานว่าตายแล้วคลายตัวของโครงสร้างเพื่อส่งเสริมการแปล exsa และพบว่า การเปลี่ยนแปลงของลำดับ exsa หรือพื้นเมือง exsa ท้าแดลการ์โน่ลำดับโล่งใจความต้องการตายในสิ่งมีชีวิต สุดท้ายเราแสดงให้เห็นว่าบริสุทธิ์ตายส่งเสริมการสังเคราะห์ exsa ใช้ในการแปลหรือหลอด กัน ข้อมูลเหล่านี้เปิดเผยกลไกกฎระเบียบใหม่สำหรับหน้าเชื้อตายและเพิ่มความซับซ้อนของการควบคุมระดับโลกของ t3ss .