This technique is based upon the po

This technique is based upon the polymorphic nature of restriction enzyme digestion sites within a defined genetic region. RFLP involves restriction digestion of the chromosomal DNA followed by southern blotting for detection of specific genetic loci. Whole chromosomal DNA is restriction digested, fragments are then separated on agarose-ge1 and transferred on to the nitrocellular / nylon membrane (Sambrook et al., 1989). The DNA fragments immobilized on the membrane are then hybridized with one or more labeled probes. Only the genomic DNA fragments, which will have specificity for the probe, will be detected, simplifying the restriction endonuclease analysis greatly. This differentiates the strains as the position and length of target sequences will vary in the fragments of different isolates. RFLP has been used to subtype Brucella sp. (Grimont et al., 1992), Legionella pneumophila (Tram et al., l990), Pseudomonas (Loutit et al., l99l), Mycobacterium tuberculosis (van Embden et al., 1993). Ribotyping is also a form of RFLP typing in which the probe’s target is in a multicopy operon i.e. the rrn operon.
Ribotyping is a particular form of RFLP- based typing in which probe’s target sequence is the multicopy rrn operon. rrn operons are highly conserved and most bacteria have multiple copies of these, permitting both inter- and intraspecies discrimination. Also intergenic spacer regions (the region present between 16S and 23S regions) are variable in length among different copies of the rrn operon and thus this property can also be exploited for typing. Use of multiple restriction enzymes provides additional discriminatory capacity to this technique. Strains differentiated by ribotyping are referred as ‘ribotypes’.
Jorden and Leaves (1997) observed that the traditional ribotyping was most discriminatory to detect variations between strains of H. influenzae. Ribotyping is used for typing and subtyping of several microbes like L. pneumophila (van Belkum et al., 1996), Yersinia ruckeri (Garcia et al., 1998), V. parahaemolyticus (Marshall et al., 1999) for epidemiological studies.
Ribotyping offers a good typing method and is highly useful for taxonomical and long term epidemiological studies. Ribotyping and other RFLP techniques generate interpretable banding patterns that are highly reproducible. However, this technique is time-consuming and requires considerable technical expertise. Recently an automated typing system, the Riboprinter (Qualicon. Welmington, DE, USA) has been designed for characterizing the bacteria to the strain level in 8 hours. However, ‘riboprinter’ has low discriminatory ability and low cost-effectivity as compared to the traditional ribotyping hindering its usage in most laboratories

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

เทคนิคนี้เป็นไปตามธรรมชาติ polymorphic ของไซต์ย่อยอาหารเอนไซม์จำกัดภายในภูมิภาคพันธุกรรมกำหนด RFLP เกี่ยวข้องกับข้อจำกัดในการย่อยอาหารของ DNA ของโครโมโซมที่ตามใต้ blotting วิธีตรวจ loci เฉพาะทางพันธุกรรม ดีเอ็นเอทั้งหมดของโครโมโซมคือ ข้อจำกัดเจ่า มีแล้วแยกจากกันใน agarose ge1 และโอนย้ายไป nitrocellular / ไนลอนเมมเบรน (Sambrook et al., 1989) ชิ้นส่วนดีเอ็นเอที่ตรึงบนเมมเบรนมีแล้วเป็นกับอย่าง น้อยหนึ่งคลิปปากตะเข้ป้าย เฉพาะ genomic DNA ชิ้นส่วน ซึ่งจะมี specificity ในการโพรบ จะพบ ให้วิเคราะห์ endonuclease จำกัดมากขึ้น นี้แตกต่างสายพันธุ์ที่เป็นตำแหน่ง และความยาวของลำดับเป้าหมายจะแตกต่างกันในการกระจายตัวของการแตกแยก มีการใช้ RFLP จะ Brucella sp. (Grimont et al., 1992), Legionella pneumophila (ราง et al., l990), ชนิดย่อยลี (Loutit et al., l99l) มัยโคแบคทีเรียวัณโรค (van Embden et al., 1993) Ribotyping เป็นแบบฟอร์มของ RFLP พิมพ์ซึ่งเป้าหมายของโพรบอยู่ใน multicopy operon เช่น rrn operonRibotyping เป็นรูปแบบเฉพาะของ RFLP-ใช้พิมพ์ของโพรบที่เป้าหมายลำดับเป็น operon multicopy rrn rrn operons ที่อยู่สูง และแบคทีเรียส่วนใหญ่มีหลายสำเนาเหล่านี้ เอื้ออำนวยทั้งอินเตอร์- และการเลือกปฏิบัติที่ intraspecies นอกจากนี้ยังเป็นตัวเว้นวรรค intergenic ภูมิภาค (ภูมิภาคอยู่ระหว่าง 16S และ 23S) เป็นตัวแปรความยาวระหว่างสำเนาอื่นของ rrn operon และดัง นี้สามารถยังนำไปสำหรับการพิมพ์ กำลังการผลิตประมงทะเลเพิ่มเติมกับเทคนิคนี้ใช้เอนไซม์จำกัดหลายทาง สายพันธุ์ที่แตกต่างกัน ribotyping จะเรียกว่าเป็น 'ribotypes'Jorden และใบไม้ (1997) พบว่า ribotyping ดั้งเดิมโจ่งแจ้งมากที่สุดเพื่อตรวจสอบความแตกต่างระหว่างสายพันธุ์ของ H. influenzae Ribotyping ใช้สำหรับการพิมพ์ และลูกผสมสามจุลินทรีย์ต่าง ๆ เช่น L. pneumophila (van Belkum et al., 1996), Yersinia ruckeri (การ์เซียและ al., 1998), V. parahaemolyticus (มาร์แชลล์ et al., 1999) ศึกษาความRibotyping มีวิธีการพิมพ์ที่ดี และเป็นประโยชน์อย่างยิ่งสำหรับการศึกษาความ taxonomical และ ระยะยาว Ribotyping และเทคนิค RFLP สร้างรูป banding interpretable ที่จำลองสูง อย่างไรก็ตาม เทคนิคนี้จะใช้เวลานาน และต้องการความเชี่ยวชาญทางเทคนิคมาก เมื่อเร็ว ๆ นี้พิมพ์ระบบอัตโนมัติ Riboprinter (Qualicon Welmington, DE สหรัฐอเมริกา) ได้รับการออกแบบสำหรับกำหนดลักษณะของแบคทีเรียต้องใช้ระดับใน 8 ชั่วโมง อย่างไรก็ตาม 'riboprinter' มีความสามารถต่ำที่โจ่งแจ้งและ cost-effectivity ต่ำเมื่อเทียบกับ ribotyping ดั้งเดิมที่ขัดขวางการใช้ในห้องปฏิบัติการส่วนใหญ่

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

เทคนิคนี้จะขึ้นอยู่กับลักษณะของเว็บไซต์ polymorphic การย่อยอาหารเอนไซม์ จำกัด ในภูมิภาคทางพันธุกรรมที่กำหนดไว้ RFLP เกี่ยวข้องกับการย่อยอาหารข้อ จำกัด ของดีเอ็นเอของโครโมโซมตามด้วยซับภาคใต้ในการตรวจหาตำแหน่งทางพันธุกรรมที่เฉพาะเจาะจง ดีเอ็นเอโครโมโซมทั้งข้อ จำกัด ย่อยเศษจะถูกแยกออกจากนั้นใน agarose-ge1 และโอนไปยัง nitrocellular / ไนลอนเมมเบรน (Sambrook et al., 1989) ชิ้นส่วนดีเอ็นเอตรึงบนเมมเบรนที่มีการไฮบริดแล้วกับหนึ่งหรือมากกว่ายานสำรวจที่มีข้อความ เฉพาะดีเอ็นเอจีโนมซึ่งจะมีความจำเพาะสำหรับการสอบสวนจะได้รับการตรวจพบการลดความซับซ้อนของการวิเคราะห์ข้อ จำกัด endonuclease อย่างมาก ซึ่งแตกต่างสายพันธุ์ที่เป็นตำแหน่งและความยาวของลำดับเป้าหมายจะแตกต่างกันในชิ้นส่วนของสายพันธุ์ที่แตกต่างกัน RFLP ได้รับการใช้ในการชนิดย่อย Brucella SP (Grimont et al., 1992) Legionella pneumophila (รถราง et al., l990) Pseudomonas (Loutit et al., l99l) เชื้อวัณโรค (รถตู้ Embden et al., 1993) ribotyping ยังเป็นรูปแบบของการพิมพ์ RFLP ซึ่งเป้าหมายของการสอบสวนอยู่ใน operon multicopy เช่น operon rrn ที่.
ribotyping เป็นรูปแบบเฉพาะของ RFLP- พิมพ์ตามที่เป้าหมายลำดับของการสอบสวนเป็น operon multicopy rrn operons rrn ป่าสงวนสูงและแบคทีเรียส่วนใหญ่มีหลายสำเนาเหล่านี้อนุญาตให้ทั้งระหว่างและ intraspecies การเลือกปฏิบัติ นอกจากนี้ภูมิภาค spacer intergenic (ปัจจุบันภูมิภาคระหว่าง 16S และ 23S ภูมิภาค) เป็นตัวแปรในความยาวหมู่สำเนาแตกต่างกันของ operon rrn และทำให้สถานที่ให้บริการนี้ยังสามารถใช้ประโยชน์สำหรับการพิมพ์ การใช้เอนไซม์ข้อ จำกัด หลายความจุให้เลือกปฏิบัติเพิ่มเติมเพื่อเทคนิคนี้ สายพันธุ์แตกต่างจาก ribotyping จะเรียกว่าเป็น 'ribotypes.
Jorden และใบ (1997) ตั้งข้อสังเกตว่าเป็น ribotyping ดั้งเดิมเลือกปฏิบัติมากที่สุดในการตรวจสอบรูปแบบระหว่างสายพันธุ์เอช influenzae ribotyping ถูกนำมาใช้สำหรับการพิมพ์และ subtyping ของจุลินทรีย์หลายประการเช่น L. pneumophila (รถตู้ Belkum et al., 1996), Yersinia ruckeri (การ์เซีย et al., 1998), V. parahaemolyticus (มาร์แชลล์ et al., 1999) สำหรับการศึกษาทางระบาดวิทยา
ribotyping มีวิธีการพิมพ์ที่ดีและเป็นประโยชน์อย่างมากสำหรับอนุกรมวิธานและระยะยาวศึกษาทางระบาดวิทยา ribotyping และเทคนิค RFLP อื่น ๆ ที่สร้างรูปแบบแถบ interpretable ที่ทำซ้ำสูง แต่เทคนิคนี้ใช้เวลานานและต้องใช้ความเชี่ยวชาญทางเทคนิคมาก เมื่อเร็ว ๆ นี้ระบบการพิมพ์แบบอัตโนมัติที่ Riboprinter (Qualicon. Welmington, DE, USA) ได้รับการออกแบบมาสำหรับการพัฒนาการแบคทีเรียในระดับความเครียดใน 8 ชั่วโมง อย่างไรก็ตาม 'riboprinter' มีความสามารถในการเลือกปฏิบัติในระดับต่ำและค่าใช้จ่ายที่ต่ำ effectivity เมื่อเทียบกับแบบดั้งเดิม ribotyping ขัดขวางการใช้งานในห้องปฏิบัติการมากที่สุด

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

เทคนิคนี้จะขึ้นอยู่กับลักษณะของเอนไซม์ย่อยอาหารที่มีเว็บไซต์ภายในกำหนดทางพันธุกรรม ) : ข้อ จำกัด ที่เกี่ยวข้องกับการย่อยอาหารของโครโมโซม ดีเอ็นเอ รองลงมา คือ ภาคใต้ การตรวจหาความผิดปกติของโปรตีน . โครโมโซมดีเอ็นเอทั้งหมดคือการเข้าใจเศษแล้วแยกบน agarose-ge1 และโอนไปยังเยื่อ nitrocellular / ไนล่อน ( sambrook et al . , 1989 ) มีชิ้นส่วนดีเอ็นเอที่ถูกตรึงบนเยื่อแผ่นแล้ว ) กับหนึ่งหรือมากกว่าข้อความเครื่องมือตรวจสอบ แต่จีโนมดีเอ็นเอ ซึ่งมีความจำเพาะด้วย จะต้องตรวจ ลการตัดด้วยเอนไซม์ตัดจำเพาะการวิเคราะห์อย่างมากนี้เป็นสายพันธุ์ที่เป็นตำแหน่งและความยาวของยีนเป้าหมายจะแตกต่างกันในชิ้นส่วนที่แตกต่างกันของเชื้อ : มีการใช้ทั้งบรูเซลลา sp . ( grimont et al . , 1992 ) , ลีจิโอเนลลา pneumophila ( รถราง et al . , l990 ) , Pseudomonas ( loutit et al . , l99l ) , เชื้อวัณโรค ( รถตู้ embden et al . , 1993 )ribotyping ยังเป็นรูปแบบของ RFLP ในการพิมพ์ ซึ่งเป้าหมายของโพรบใน multicopy โอเปอรอน เช่น rrn โอเปอรอน .
ribotyping เป็นรูปแบบเฉพาะของ RFLP ตามพิมพ์ที่หัวของเป้าหมายลำดับเป็นโอเปอรอน rrn multicopy . rrn operons มีการอนุรักษ์และแบคทีเรียมากที่สุดมีหลายเหล่านี้ การอนุญาตให้ทั้ง อินเตอร์ และ intraspecies การแบ่งแยกยังภูมิภาค spacer ส่า ( ปัจจุบันภูมิภาคและระหว่างภูมิภาค ( ยุค 23 ) ตัวแปรความยาวของชุดที่แตกต่างกันของ rrn โอเปอรอน ซึ่งคุณสมบัตินี้ยังสามารถใช้สำหรับพิมพ์ ใช้เอนไซม์จำกัดหลายให้ความจุความ เพิ่มเติม เทคนิคนี้ สายพันธุ์ที่แตกต่างกัน ribotyping จะเรียกว่าเป็น ribotypes
' 'จอร์เดิ้นและใบ ( 2540 ) พบว่า ribotyping แบบเลือกปฏิบัติมากที่สุดเพื่อตรวจหาการเปลี่ยนแปลงระหว่างสายพันธุ์ของ H . ่ . ribotyping ใช้สำหรับการพิมพ์และ subtyping ของจุลินทรีย์ต่าง ๆ เช่น แอล pneumophila ( รถตู้ belkum et al . , 1996 ) ruckeri เยอซิเนีย ( การ์เซีย et al . , 1998 ) , V . parahaemolyticus ( Marshall et al . , 1999 ) สำหรับการศึกษาระบาดวิทยา .
ribotyping มีบุคลิกดี และเป็นประโยชน์อย่างมากสำหรับ taxonomical แบบระยะยาว และศึกษาทางระบาดวิทยา . ribotyping เทคนิค RFLP และอื่น ๆสร้าง interpretable แถบลวดลายที่มีสูง ) . อย่างไรก็ตาม เทคนิคนี้จะใช้เวลานาน และต้องใช้ความเชี่ยวชาญทางเทคนิคมาก เมื่อเร็ว ๆนี้โดยอัตโนมัติพิมพ์ระบบ riboprinter ( qualicon . welmington , de ,ประเทศสหรัฐอเมริกา ) ที่ได้รับการออกแบบมาสำหรับลักษณะแบคทีเรียสายพันธุ์ระดับใน 8 ชั่วโมง อย่างไรก็ตาม ' ' มีความ riboprinter ต่ำความสามารถและ effectivity ต้นทุนต่ำเมื่อเทียบกับแบบดั้งเดิม ribotyping ขัดขวางการใช้ห้องปฏิบัติการ
ในมากที่สุด