4. DiscussionThere is increasing aw

4. Discussion
There is increasing awareness of the significance of NTS as a major public health concern in the developing world [1], [32] and [33]. While responsible for gastroenteritis in high-income countries, NTS is a common cause of fatal invasive disease in Africa. Currently no vaccines are available against this disease and glycoconjugation is a promising approach for vaccine development [34].

The conjugation chemistry used to synthesize a glycoconjugate vaccine can impact on its immunogenicity [15]. Here S. Typhimurium OAg-CRM197 conjugates obtained by random derivatization along the sugar chain were compared with conjugates obtained by one-site linkage at the terminus of the core region. For the random approach, a milder oxidation by TEMPO was compared to oxidation with NaIO4 which opens the sugar units with corresponding likely greater impact on OAg epitopes and conformation. Regarding the selective approach, two different lengths of the spacer present between the sugar and the protein were compared.

From a process perspective, all conjugation methods resulted in no residual free protein, which is the most expensive component of the vaccine. The carrier protein did not need to be derivatized for both type of chemistries, but the production of random conjugates required one step less compared with the selective ones. Moreover, random approaches resulted in higher OAg conjugation yields (about twice as much as with selective approach) with advantages in terms of total vaccine costs. However, use of selective chemistry can add benefits in terms of production consistency [35], [36] and [37].

Selective and random conjugates induced a similar anti-OAg IgG response and no differences were found between selective conjugates synthesized with different linker lengths. Anti-OAg IgM were detected only in mice immunized with TEMPO conjugates after three doses.

Random conjugates induced antibodies with greater bactericidal activity per anti-OAg IgG ELISA unit compared with selective conjugates, confirming that the modification along the sugar chain did not negatively affect conjugate immunogenicity, even though it could impact on OAg epitope integrity and conformation. However, there was an inverse correlation between degree of derivatization and bactericidal activity of the antibodies induced among the random conjugates. FACS analysis confirmed that the higher degree of random derivatization did not negatively impact on the ability of the corresponding conjugates to induce antibodies able to recognize the two invasive S. Typhimurium strains tested.

The difference in the bactericidal activity could be related to the different OAg to protein ratio of the various conjugates (lower for random ones), or to the different structures of the conjugates themselves: a sun-structure for the selective conjugates with no points of direct linkage between the OAg polysaccharide and the protein, versus a cross-linked heterogeneous structure of the random conjugates. This second configuration may lead to more CRM197-OAg glycopeptides after processing in the B-cells. According to a recent study, T cell populations can recognize carbohydrate epitopes on glycopeptides derived from antigen-presenting cell processing of Group B Streptococcus conjugate vaccines and high-density presentation of carbohydrate epitopes could have an important role in determining the success of a conjugate vaccine [38]. Different chemistries could also impact on the presentation of the sugar and carrier epitopes to the immune system. Furthermore, the presence of the linker in the selective but not in the random conjugates could be an additional factor affecting antibody functional activity [28] and [39].

In the context of NTS OAg-based glycoconjugate vaccines, there are only a few studies that have investigated to date the influence of conjugation chemistry on immunogenicity, and contrasting findings have been obtained [19], [20] and [28]. This emphasizes the complexity of the immune response to glycoconjugates which is influenced by different strongly-interconnected conjugation parameters [15].

This study highlights the importance of conjugation chemistry in the design of S. Typhimurium OAg-based glycoconjugate vaccines. A better knowledge of the fine structure of such candidate vaccines, together with the design and testing of other well-defined conjugate vaccines, would contribute to further understanding of the relationship between conjugate structure and immunogenicity.

ผลลัพธ์ (ไทย) 1:

4. สนทนามีความตระหนักเพิ่มขึ้นของค่านัยสำคัญสุดเป็นปัญหาสำคัญในประเทศกำลังพัฒนา [1], [32] และ [33] ในขณะที่รับผิดชอบสำหรับโรคกระเพาะอักเสบในประเทศร่ำรวย สุดเป็นสาเหตุของโรคร้ายรุกรานแอฟริกา ขณะนี้ไม่รู้มีต่อโรคนี้ และ glycoconjugation เป็นวิธีการกำหนดการพัฒนาวัคซีน [34]เคมี conjugation ใช้สังเคราะห์วัคซีน glycoconjugate สามารถส่งผลกระทบในการ immunogenicity [15] ที่นี่ conjugates S. Typhimurium OAg-CRM197 รับ โดย derivatization สุ่มตามโซ่น้ำตาลถูกเปรียบเทียบกับ conjugates ได้ โดยการเชื่อมโยงเว็บไซต์หนึ่งที่นัสภาคหลัก สำหรับวิธีการสุ่ม ออกซิเดชันพะแนง โดยจังหวะจัดเทียบกับออกซิเดชัน ด้วย NaIO4 ที่เปิดหน่วยน้ำตาล มีผลกระทบมากขึ้นมีแนวโน้มเกี่ยวข้อง OAg epitopes และ conformation เกี่ยวกับวิธีการใช้ ได้เปรียบเทียบความยาวแตกต่างกันสองของเป็นตัวเว้นวรรคอยู่ระหว่างน้ำตาลและโปรตีนจากมุมมองกระบวนการ วิธี conjugation ทั้งหมดทำให้ไม่เหลือฟรีโปรตีน ซึ่งเป็นส่วนประกอบแพงที่สุดของวัคซีน โปรตีนขนส่งได้ไม่จำเป็นต้องมี derivatized ทั้งสองชนิด chemistries แต่การผลิตสุ่ม conjugates จำเป็นขั้นตอนหนึ่งที่น้อยเมื่อเทียบกับคนงาน นอกจากนี้ วิธีสุ่มเกิดในสูง OAg conjugation อัตราผลตอบแทน (เกี่ยวกับสองเท่ากว่าเป็นวิธีที่ใช้) ด้วยข้อได้เปรียบในด้านต้นทุนวัคซีนรวม อย่างไรก็ตาม การใช้งานเคมีสามารถเพิ่มประโยชน์ในแง่ของการผลิตสอดคล้อง [35], [36] [37] และConjugates งาน และสุ่มเกิดการตอบสนอง IgG ต่อต้าน-OAg คล้าย และแตกต่างไม่พบระหว่างใช้ conjugates สังเคราะห์ มีความยาวตัวเชื่อมโยงข้อมูลต่าง ๆ พบการระบาดของโรคต่อต้าน-OAg ในหนูที่ immunized กับจังหวะ conjugates หลังปริมาณสามเท่าConjugates สุ่มเกิดแอนตี้กับกิจกรรม bactericidal มากกว่าต่อต้าน-OAg IgG ELISA หน่วยเปรียบเทียบกับงาน conjugates ยืนยันว่า การปรับเปลี่ยนไปตามโซ่น้ำตาลได้ไม่ผล conjugate immunogenicity แม้ว่ามันอาจส่งผลกระทบต่อ OAg epitope สมบูรณ์และ conformation อย่างไรก็ตาม มีความสัมพันธ์ที่ผกผันระหว่างระดับของ derivatization และกิจกรรม bactericidal ของแอนตี้เกิดระหว่าง conjugates สุ่ม FACS วิเคราะห์ยืนยันว่า ระดับสูงของ derivatization สุ่มได้ไม่ส่งผลกระทบความสามารถในการ conjugates ที่สอดคล้องกันเพื่อก่อให้เกิดการแอนตี้ได้ 2 รุกราน S. Typhimurium สายพันธุ์ทดสอบความแตกต่างในกิจกรรม bactericidal สามารถเกี่ยวข้องกับ OAg ต่าง ๆ อัตราส่วนโปรตีนของ conjugates ต่าง ๆ (ล่างสำหรับสุ่ม), หรือโครงสร้างแตกต่างกันของ conjugates เอง: โครงสร้างดวงอาทิตย์สำหรับ conjugates ใช้ไม่มีจุดเชื่อมโยงโดยตรงระหว่าง OAg polysaccharide และโปรตีน และโครงสร้างแตกต่างกันการ cross-linked ของ conjugates แบบสุ่มได้ การกำหนดค่าที่สองนี้อาจนำไปสู่ glycopeptides CRM197 OAg เพิ่มเติมหลังจากดำเนินการในเซลล์ B ตามการศึกษาล่าสุด T เซลล์ประชากรสามารถจำแนกคาร์โบไฮเดรต epitopes ใน glycopeptides มานำเสนอการตรวจหาเซลล์ที่ประมวลผลของกลุ่ม B อุณหภูมิ conjugate รู้ และนำเสนอ high-density epitopes คาร์โบไฮเดรตได้มีบทบาทสำคัญในการกำหนดความสำเร็จของวัคซีน conjugate [38] Chemistries อื่นอาจยังส่งผลกระทบในงานนำเสนอของ epitopes น้ำตาลและผู้ขนส่งกับระบบภูมิคุ้มกัน นอกจากนี้ สถานะของตัวเชื่อมโยงข้อมูล ในการเลือก แต่ไม่ใช่ ใน conjugates สุ่มอาจจะเป็นปัจจัยเพิ่มเติมที่ส่งผลกระทบต่อแอนติบอดีทำกิจกรรม [28] และ [39]ในบริบทของการรู้ตาม OAg สุด glycoconjugate มีเพียงกี่ศึกษาได้ตรวจสอบถึงอิทธิพลของเคมี conjugation ใน immunogenicity และผลการวิจัยที่แตกต่างกันได้ถูกรับ [19], [20] และ [28] นี้เน้นความซับซ้อนของการตอบสนองภูมิคุ้มกันกับ glycoconjugates ซึ่งได้รับอิทธิพลจากพารามิเตอร์อื่นเข้าใจอย่างยิ่ง conjugation [15]การศึกษานี้เน้นความสำคัญของเคมี conjugation ในการออกแบบของ glycoconjugate S. Typhimurium OAg ตามรู้ ความรู้ดีปรับโครงสร้างของค่าวัคซีนดังกล่าวผู้สมัคร พร้อมกับการออกแบบและการทดสอบอื่น ๆ รู้ conjugate โดย จะนำไปสู่ความเข้าใจต่อความสัมพันธ์ระหว่างโครงสร้าง conjugate immunogenicity

ผลลัพธ์ (ไทย) 2:

4. การอภิปราย
มีการเพิ่มความตระหนักในความสำคัญของ NTS เป็นกังวลสำคัญสุขภาพของประชาชนในประเทศกำลังพัฒนา [1] [32] และ [33] ในขณะที่ความรับผิดชอบในการอับเสบในประเทศที่มีรายได้สูง NTS เป็นสาเหตุของการเกิดโรคร้ายแรงที่แพร่กระจายในทวีปแอฟริกา ปัจจุบันวัคซีนไม่พร้อมกับโรคนี้และ glycoconjugation เป็นวิธีการที่มีแนวโน้มในการพัฒนาวัคซีน [34]. เคมีผันที่ใช้ในการสังเคราะห์วัคซีน glycoconjugate สามารถส่งผลกระทบต่อการกระตุ้นภูมิคุ้มกันของ [15] นี่ conjugates S. Typhimurium สตง-CRM197 ที่ได้จากการสุ่มอนุพันธ์ตามห่วงโซ่น้ำตาลถูกเมื่อเทียบกับคอนจูเกตที่ได้รับจากการเชื่อมโยงหนึ่งสถานที่ปลายทางของภูมิภาคหลัก สำหรับวิธีการสุ่มออกซิเดชันจ้าโดย TEMPO เมื่อเทียบกับการเกิดออกซิเดชันด้วย NaIO4 ซึ่งเปิดหน่วยน้ำตาลที่มีผลกระทบมากขึ้นมีแนวโน้มที่สอดคล้องกันบน epitopes สตง. และโครงสร้าง เกี่ยวกับวิธีการเลือกสองยาวแตกต่างกันในปัจจุบัน spacer ระหว่างน้ำตาลและโปรตีนที่ถูกนำมาเปรียบเทียบ. จากมุมมองของกระบวนการวิธีการผันทั้งหมดส่งผลให้ไม่มีโปรตีนฟรีที่เหลือซึ่งเป็นส่วนประกอบที่แพงที่สุดของวัคซีน โปรตีนที่ให้บริการไม่จำเป็นต้องได้รับการ derivatized สำหรับประเภทของเคมีทั้งสอง แต่การผลิตของ conjugates สุ่มที่จำเป็นขั้นตอนหนึ่งที่น้อยกว่าเมื่อเทียบกับคนที่เลือก นอกจากนี้วิธีการสุ่มส่งผลให้อัตราผลตอบแทนที่สูงกว่าการผันเงินแผ่นดิน (ประมาณสองเท่าด้วยวิธีการคัดเลือก) มีข้อได้เปรียบในแง่ของค่าใช้จ่ายในการฉีดวัคซีนรวม อย่างไรก็ตามการใช้เคมีคัดเลือกสามารถเพิ่มผลประโยชน์ในแง่ของความมั่นคงการผลิต [35], [36] และ [37]. conjugates เลือกและการสุ่มเหนี่ยวนำให้เกิดการตอบสนองต่อต้านสตง. IgG ที่คล้ายกันและแตกต่างไม่พบระหว่าง conjugates เลือกสังเคราะห์ที่มีตัวเชื่อมโยงที่แตกต่างกัน ความยาว ป้องกันการสตง. IgM ตรวจพบเฉพาะในหนูวัคซีนกับ conjugates TEMPO หลังจากสามปริมาณ. conjugates สุ่มแอนติบอดีเหนี่ยวนำให้เกิดการฆ่าเชื้อแบคทีเรียที่มีกิจกรรมมากขึ้นต่อการป้องกันการสตง. หน่วย ELISA IgG เมื่อเทียบกับ conjugates เลือกยืนยันว่าการปรับเปลี่ยนตามห่วงโซ่น้ำตาลที่ไม่ได้มีผลเสียต่อผัน ภูมิคุ้มกันแม้ว่ามันอาจจะส่งผลกระทบต่อความสมบูรณ์ epitope สตง. และโครงสร้าง แต่มีความสัมพันธ์ผกผันกับระดับของอนุพันธ์และกิจกรรมการฆ่าเชื้อแบคทีเรียของแอนติบอดีที่เกิดในหมู่ conjugates สุ่ม การวิเคราะห์มาซึ่งยืนยันว่าการศึกษาระดับปริญญาที่สูงขึ้นของอนุพันธ์สุ่มไม่ได้ส่งผลกระทบทางลบต่อความสามารถของ conjugates ที่สอดคล้องกันเพื่อก่อให้เกิดแอนติบอดีสามารถรับรู้ทั้งสองสายพันธุ์ที่รุกราน S. Typhimurium ทดสอบ. ความแตกต่างในกิจกรรมฆ่าเชื้อแบคทีเรียอาจจะเกี่ยวข้องกับสตง. ที่แตกต่างกันไป อัตราส่วนของโปรตีน conjugates ต่างๆ (ต่ำกว่าสำหรับคนที่สุ่ม) หรือโครงสร้างที่แตกต่างของ conjugates ตัวเอง: ดวงอาทิตย์โครงสร้าง conjugates เลือกกับจุดที่ไม่มีการเชื่อมโยงโดยตรงระหว่าง polysaccharide สตง. และโปรตีนเทียบกับ cross-linked โครงสร้างที่แตกต่างกันของ conjugates สุ่ม การกำหนดค่าที่สองนี้อาจนำไปสู่การไกลโค CRM197-สตง. หลังจากการประมวลผลใน B-เซลล์ ตามการศึกษาที่ผ่านมาประชากร T เซลล์สามารถรับรู้ epitopes คาร์โบไฮเดรตบนไกลโคมาจากแอนติเจนนำเสนอการประมวลผลเซลล์ของกลุ่ม B Streptococcus วัคซีนผันและการนำเสนอความหนาแน่นสูงของ epitopes คาร์โบไฮเดรตอาจมีบทบาทสำคัญในการกำหนดความสำเร็จของวัคซีน [ 38] เคมีที่แตกต่างกันนอกจากนี้ยังอาจส่งผลกระทบต่อการนำเสนอของ epitopes น้ำตาลและผู้ให้บริการระบบภูมิคุ้มกันของร่างกาย นอกจากนี้การปรากฏตัวของตัวเชื่อมโยงในการคัดเลือก แต่ไม่ได้อยู่ใน conjugates สุ่มอาจจะเป็นปัจจัยที่ส่งผลกระทบต่อแอนติบอดีเพิ่มเติมกิจกรรมการทำงาน [28] และ [39]. ในบริบทของ NTS สตง. ตามวัคซีน glycoconjugate มีเพียงการศึกษาน้อย ที่ได้รับการตรวจสอบวันที่อิทธิพลของเคมีผันในการกระตุ้นภูมิคุ้มกันและผลการวิจัยที่ได้รับการตัดกันได้ [19], [20] และ [28] นี้เน้นความซับซ้อนของการตอบสนองภูมิคุ้มกันเพื่อ glycoconjugates ซึ่งได้รับอิทธิพลจากที่แตกต่างกันพารามิเตอร์ผันอย่างยิ่งที่เชื่อมต่อกัน [15]. การศึกษาครั้งนี้เน้นให้เห็นถึงความสำคัญของเคมีผันในการออกแบบของเอส Typhimurium สตง. ตามวัคซีน glycoconjugate ความรู้ที่ดีของการปรับโครงสร้างของวัคซีนดังกล่าวพร้อมกับการออกแบบและการทดสอบอื่น ๆ ที่กำหนดไว้วัคซีนผันจะนำไปสู่ความเข้าใจของความสัมพันธ์ระหว่างโครงสร้างผันและภูมิคุ้มกัน

ผลลัพธ์ (ไทย) 3:

4 . การอภิปราย
มีการรับรู้ที่เพิ่มขึ้นของความสำคัญของ NTS เป็นปัญหาสาธารณสุขที่สำคัญในการพัฒนาโลก [ 1 ] [ 32 ] [ 33 ] ในขณะที่รับผิดชอบ และในประเทศที่มีรายได้สูง , NTS เป็นสาเหตุของโรคที่ร้ายแรงในทวีปแอฟริกาปัจจุบันยังไม่มีวัคซีนป้องกันโรคนี้ และมี glycoconjugation เป็นวิธีการที่มีแนวโน้มการพัฒนาวัคซีน [ 34 ] .

เคเคมีที่ใช้เพื่อสังเคราะห์ไกลโคค จูเกตวัคซีนสามารถส่งผลกระทบต่อความสามารถ [ 15 ] ที่นี่ .สำหรับสารประกอบที่ได้จากการสุ่มตาม oag-crm197 กับตาลห่วงโซ่เปรียบเทียบกับสารประกอบที่ได้จากการเชื่อมโยงเว็บไซต์หนึ่งที่สถานีหลักของภูมิภาค สำหรับวิธีการสุ่ม พะแนง ออกซิเดชัน โดยจังหวะเทียบออกซิเดชันกับ naio4 ซึ่งเปิดน้ำตาลหน่วยเดียวกันมากขึ้น หรือ อาจส่งผลกระทบต่อผู้ป่วย และ โครงสร้างเกี่ยวกับวิธีการเลือก สองความยาวที่แตกต่างกันของช่วงปัจจุบันระหว่างน้ำตาลกับโปรตีนเปรียบเทียบ

จากกระบวนการมุมมอง วิธีการทั้งหมด ส่งผลให้ไม่มีตกค้างฟรีโปรตีน ซึ่งเป็นส่วนที่แพงที่สุดของวัคซีน พาหะโปรตีนไม่ต้อง derivatized สำหรับทั้งสองชนิดของเคมี ,แต่การผลิตของสารประกอบที่เป็นแบบขั้นตอนเดียวน้อยกว่าเมื่อเปรียบเทียบกับคนที่เลือก โดยวิธีการสุ่ม ( หรือสูงกว่า ) ผลผลิต ( ประมาณสองเท่ากับการเลือกวิธีการ ) มีข้อดีในแง่ของต้นทุนวัคซีนรวม อย่างไรก็ตาม การใช้งาน เคมี สามารถเพิ่มประโยชน์ในแง่ของการผลิตความสอดคล้อง [ 35 ] , [ 36 ] และ [ 37 ] .

และการสุ่มเลือกสารประกอบที่คล้ายกัน หรือ การต่อต้านกลุ่มและไม่มีความแตกต่างระหว่างการพบสารประกอบสังเคราะห์ที่มีความยาวสนามกอล์ฟที่แตกต่างกัน IgM anti หรือถูกตรวจพบในหนูที่ได้รับหลังจากจังหวะสารประกอบ 3 ( .

สารประกอบที่กระตุ้นภูมิคุ้มกันแบบมากขึ้นกิจกรรมต่อต้านแบคทีเรีย หรือ เชื้อกลุ่มหน่วยเมื่อเทียบกับใช้สารประกอบ , ยืนยันว่าการปรับเปลี่ยนตามน้ำตาลโซ่ไม่ส่งผลคือ สามารถ แม้ว่า มันอาจส่งผลกระทบต่อความสมบูรณ์ของไวรัสและ หรือโครงสร้าง อย่างไรก็ตามมีความสัมพันธ์ผกผันระหว่างระดับของแอนติบอดีแบคทีเรียซัลและกิจกรรมการสุ่มของสารประกอบ . การวิเคราะห์ facs ยืนยันว่าระดับสูงของการสุ่มกับไม่เกิดผลเสียต่อความสามารถของสารประกอบที่ทำให้เกิดแอนติบอดีจำสองรุกราน S . typhimurium สายพันธุ์ทดสอบ

ความแตกต่างในการฆ่าเชื้อแบคทีเรียอาจจะเกี่ยวข้องกับการทดสอบที่แตกต่างกันต่อโปรตีนของสารประกอบต่าง ๆ ( น้อยกว่าคนที่สุ่ม ) หรือโครงสร้างที่แตกต่างกันของสารประกอบที่ตัวเอง : ดวงอาทิตย์สำหรับการเลือกโครงสร้างสารประกอบที่ไม่มีจุดของการเชื่อมโยงโดยตรงระหว่างการทดสอบพอลิแซ็กคาไรด์และโปรตีนเมื่อเทียบกับโครงสร้างที่แตกต่างกันของสารประกอบที่ทำให้เกิดการสุ่ม . การตั้งค่าที่สองนี้อาจนำไปสู่ crm197 เพิ่มเติม หรือไกลโคเปปไตด์หลังจากการประมวลผลในบี - . ตามการศึกษาล่าสุดประชากรเซลล์ t สามารถจำคาร์โบไฮเดรตจากในไกลโคเปปไตด์ที่ได้มาจากเซลล์ antigen-presenting การประมวลผลของกลุ่ม B Streptococcus ) วัคซีนและความหนาแน่นสูง การนำเสนอของคาร์โบไฮเดรตจากอาจมีบทบาทในการกำหนดความสำเร็จของคอนจูเกตวัคซีน [ 38 ]เคมีที่แตกต่างกันก็อาจส่งผลกระทบต่อการนำน้ำตาลจากบริษัทขนส่งและระบบภูมิคุ้มกัน นอกจากนี้ การปรากฏตัวของสนามกอล์ฟในการคัดเลือก แต่ไม่ได้ในการสารประกอบที่อาจเพิ่มปัจจัยที่มีผลต่อกิจกรรมการทำงาน ) [ 28 ] และ [ 39 ] .

ในบริบทของ NTS หรือไกลโคค จูเกตวัคซีนพื้นฐาน ,มีเพียงไม่กี่การศึกษาว่าได้ศึกษาถึงอิทธิพลของการเดทในเคมีสามารถค้นพบและตัดกันได้ [ 19 ] , [ 20 ] และ [ 28 ] นี้เน้นความซับซ้อนของการตอบสนองของภูมิคุ้มกันเพื่อไกลโคค จูเกตซึ่งเป็นอิทธิพลจากที่แตกต่างกันการขอเชื่อมค่า

[ 15 ]การศึกษานี้เน้นความสำคัญของเคมี ) ในการออกแบบของ S . typhimurium หรือใช้วัคซีนไกลโคค จูเกต . ความรู้ที่ดีขึ้นของโครงสร้างละเอียดของผู้สมัคร เช่น วัคซีน ร่วมกับการออกแบบและการทดสอบอื่น ๆที่ชัดเจนคือ วัคซีน จะนำไปสู่ความเข้าใจต่อความสัมพันธ์ระหว่างโครงสร้างและสามารถผัน
.